A375-cellelinjen – En guide til forskning i melanom

A375 er en human melanomcellelinje, der er meget udbredt i toksikologisk og immuno-onkologisk forskning. Forskere anvender denne cellelinje til at studere kræftbiologi og signalveje, teste eller screene potentielle kræftmidler samt udvikle nye og effektive behandlingsformer.

Oprindelse og generelle egenskaber ved A375-celler

At kende en cellelinjes oprindelse og generelle egenskaber kan hjælpe dig med at planlægge dens anvendelse i forskning. Dette afsnit af artiklen vil dække oprindelsen og egenskaberne ved A375-cellelinjen. For eksempel: Hvad er A375-cellelinjen? Hvad er A375-cellelinjens egenskaber? Hvor kommer A375-celler fra? Hvad er morfologien for A375-melanomceller? Hvad er A375-cellestørrelsen?

• Hudkræftcellelinjen A375 stammer fra en eksplantatkultur af en solid tumor fra en 54-årig kvinde med malignt melanom [1].
• A375-celler har en epitelagtig morfologi.
• A375-cellernes størrelse er relativt mindre sammenlignet med andre cellelinjer. De har en diameter på ca. 12 µm.
• A375-melanomcellerne er hypotriploide. Det modale kromosomantal for denne cellelinje er 62. Normalt har hver celle ni markørkromosomer og en kopi af de normale N2-, N6- og N22-kromosomer.

A375-celler: Oplysninger om cellekulturer

A375-cellekulturer er nemme at vedligeholde. De stiller ikke nogen særlige krav til cellekulturen. Dette afsnit vil hjælpe dig med at lære de nødvendige oplysninger om cellekulturen. F.eks. hvad er A375-fordoblingstiden? Hvad er A375-cellelinjens medie? Hvad er udsåningstætheden for A375? Er A375-melanomceller adhærente?

Vigtige punkter ved dyrkning af A375-celler

Populationsfordoblingstid:

A375-fordoblingstiden er 20 timer.

Adhærent eller i suspension:

A375 er en adhærent human melanomcellelinje.

Udsåningstæthed:

En celletæthed på 1 x 10⁴ celler/cm² er ideel for A375-cellekulturer. Adhærente celler skylles med 1 x phosphatbuffersaltvand (PBS) og inkuberes med passageringsopløsning (Accutase). Derefter tilsættes cellerne dyrkningsmedie og centrifugeres. De høstede celler resuspenderes i et dyrkningsmedie og fordeles i nye kolber til vækst.

Vækstmedium:

DMEM anbefales som det ideelle A375-medium, når det tilsættes 10 % føtal bovint serum (FBS), 4,5 g/l glukose, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamin og 1,0 mM natriumpyruvat. A375-mediet bør fornyes 2-3 gange om ugen.

Vækstbetingelser:

A375-melanomceller dyrkes i en befugtet inkubator (37 °C) med en 5 % CO2-tilførsel.

Opbevaring:

Frosne A375-celler skal opbevares ved under -150 °C i dampfasen af flydende nitrogen eller i en elektrisk fryser.

Fryseproces og medium:

CM-1- eller CM-ACF-medier anvendes til nedfrysning af A375-cellelinjen. Der er valgt en langsom nedfrysningsproces, der muliggør et gradvist temperaturfald på 1 °C for at beskytte cellernes levedygtighed.

Optøningsproces:

Hætteglasset med frosne A375-melanomceller omrystes hurtigt i vandbadet i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Cellerne tilsættes frisk medie og centrifugeres for at fjerne frysemedieelementer. Den opnåede cellepellets blev igen resuspenderet og hældt i nye kolber.

Biosikkerhedsniveau:

A375-kulturer håndteres og opbevares i laboratorier med biosikkerhedsniveau 1.

Forskningsmæssige anvendelser af A375-cellelinjen

A375-cellelinjen har omfattende forskningsanvendelser inden for kræftforskning. Her er nogle af de almindelige områder, hvor A375-celler anvendes.

• Kræftforskning: A375-celler har vidtgående anvendelser inden for melanomforskning. Forskere har brugt disse celler til at undersøge hudkræftbiologi, processer og underliggende cellesignaleringsmekanismer, herunder celleproliferation, migration og invasion. Dette kan også hjælpe forskere med at identificere nye molekylære terapeutiske mål. En undersøgelse foretaget af Lin Zhu og kolleger i 2019 anvendte de meget aggressive melanomceller A375 og fandt frem til mikroRNA-3662's rolle i væksten og invasionen af A375-melanomceller. Undersøgelsens resultater viser, at mikroRNA-3662 retter sig mod ZEB1-genet og regulerer melanomcellernes vækst in vitro og in vivo i A375-tumormodellen [2]. Tilsvarende fandt forskning udført i 2018, at PI3K/AKT- og MAPK/ERK-signalveje er involveret i proliferation og metastase af A375-cellelinjen [3].
• Lægemiddelforskning og -testning: A375-cellelinjen er en nyttig in vitro-tumormodel til test og screening af potentielle kræftmidler. Forskere vurderer toksicitet og effektivitet af nye kemoterapeutiske lægemidler, forbindelser og andre behandlinger ved hjælp af disse A375-melanomceller. For eksempel undersøgte en undersøgelse de kræftbekæmpende egenskaber af mikro- og nanovesikler afledt af grapefrugt på A375-humane melanomceller. Resultaterne afslørede, at mikro- og nanovesikler inducerer cellecyklusstop og apoptose og hæmmer genekspression i celleproliferation, migration og invasion [4].

A375-celler: Publikationer

Her nævnes nogle vigtige forskningspublikationer, der omhandler A375-celler.

D-vitamin og dets lavkalcæmiske analoger modulerer de kræftbekæmpende egenskaber af cisplatin og dacarbazin i den humane melanom-A375-cellelinje

Denne undersøgelse blev offentliggjort i Journal of Oncology i 2019. Undersøgelsen foreslog, at samtidig behandling med D-vitamin og analoger forbedrer den kræftbekæmpende virkning af cisplatin og dacarbazin i A375-melanomceller.

In vitro-evaluering af de antimelanom-effekter (A375-cellelinje) af gel- og hele bladekstrakter fra udvalgte aloe-arter

Denne forskning blev offentliggjort i Journal of Herbal Medicine i 2022. Denne undersøgelse undersøgte de anti-melanom-effekter af aloe vera-gel i A375-melanomceller.

Fermitin-familiemedlem 2 fremmer udviklingen af melanom ved at styrke bindingen af p-α-Pix til Rac1 for at aktivere MAPK-signalvejen

Denne undersøgelse i Oncogene (2021) foreslog, at fermitin-familiemedlem 2 (FERMT2 eller kindlin-2) fremmer udviklingen af melanom ved at aktivere MAPK gennem binding med p-α-Pix og Rac1.

FARP1 fremmer celleproliferation ved at modulere MAPK-signalvejen i kutan melanom

Denne undersøgelse i The American Journal of Dermatopathology (2019) foreslår, at FARP1 kan fremme udviklingen og progressionen af kutan melanom. Det kan derfor være et nyttigt terapeutisk mål.

Cytotoksisk og apoptotisk potentiale af Phyllodium elegans-ekstrakter på humane kræftcellelinjer

Denne forskningsartikel blev offentliggjort i Bioengineered (2019). Denne undersøgelse undersøgte den cytotoksiske og apoptotiske aktivitet af et ekstrakt fra planten Phyllodium elegans på humane karcinomcellelinjer, herunder A375.

Ressourcer til A375-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere

Her følger et par online ressourcer om A375-celler.

• A375-celletransfektion: Denne videovejledning hjælper dig med at lære A375-celletransfektion trin for trin.
• Cellekultivering: Denne video indeholder meget nyttig information om dyrkning af cellelinjer.

Protokollerne for cellekultivering af A375-celler er angivet her.

• A375-cellelinje: Dette link indeholder nyttige oplysninger om dyrkning og vedligeholdelse af A375-cellelinjer, herunder A375-medier og håndtering af frosne og prolifererende A375-kulturer.

Referencer

1. Avram, S., et al., Standardisering af A375 humane melanommodeller på kyllingefosterets chorioallantoismembran og Balb/c nude-mus. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 retter sig mod ZEB1 og dæmper invasionen af den meget aggressive melanomcellelinje A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C hæmmer melanom A375-celleproliferation og metastase via undertrykkelse af PI3K/Akt- og MAPK/ERK-signalveje. Life sciences, 2018. 206: s. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- og nanovesikler afledt af grapefrugt viser tydelige metabolomprofiler og antikræftaktiviteter i den humane melanomcellelinje A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.