P19-celler – Forskning i embryonalt karcinom ved hjælp af P19-celler
P19 er en musembryonalt karcinomcellelinje. Den anvendes i vid udstrækning inden for biomedicinsk forskning, hovedsageligt til studier af udviklingsbiologi, stamcellebiologi, celledifferentiering og lægemiddelscreening. Da P19-celler har differentieringsevne, kan de være nyttige til at undersøge komplekse biologiske processer såsom vævsdannelse og tidlig embryonal udvikling. I denne artikel vil vi gennemgå de grundlæggende fakta om P19-celler fra mus.
- Vækstmedium
- DMEM/Ham's F12-medier indeholdende 5 % føtal bovint serum, 3,1 g/L glukose, 1,6 mM L-glutamin, 1,0 mM natriumpyruvat, 15 mM HEPES og 1,2 g/L NaHCO₃ anvendes til dyrkning af P19-celler.
- Fordoblingstid
- Den rapporterede fordoblingstid for P19-cellelinjen er ca. 2 til 3 dage.
- Væksttype
- Den embryonale karcinomcellelinje P19 er adhærent.
- Biosikkerhedsniveau
- BSL-1
- Kan bestilles hos
- Cytion — Bestil P19
- Generelle egenskaber og oprindelse af P19-celler
- Oplysninger om dyrkning af P19-celler
- P19-cellelinje: Fordele og ulemper
- Forskningsanvendelser af P19-celler
- Køb din P19-cellelinje i dag
- P19-celler: Forskningspublikationer
- Ressourcer til P19-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
- Udforsk P19-cellelinjen: Ofte stillede spørgsmål
- Referencer
- Ofte stillede spørgsmål
Generelle egenskaber og oprindelse af P19-celler
Det er vigtigt at kende en cellelinjes generelle egenskaber og oprindelse, inden man begynder at arbejde med den. Dette afsnit dækker følgende: Hvad er P19-cellelinjen? Hvor stor er en P19-celle? Hvad er P19-cellernes oprindelse?
- P19 er en type pluripotente embryonale karcinomceller, der oprindeligt stammer fra et teratokarcinom udviklet i en C3H/He-mus. Cellelinjen blev først etableret i 1982 af McBurney og Rogers.
- P19-celler kan vokse kontinuerligt i et serumtilført dyrkningsmedium. De kan differentieres til andre celletyper, når de udsættes for ikke-toksiske stoffer såsom retinsyre og dimethylsulfoxid (DMSO) [1].
- Disse musekarcinomceller har en epitelagtig morfologi.
- P19-cellelinjen har en euploid mandlig karyotype (n=40; XY).
Oplysninger om dyrkning af P19-celler
P19-cellelinjen dyrkes i vid udstrækning i forskningslaboratorier på grund af dens unikke egenskaber. Dyrkningen er nem og overskuelig. Dette afsnit indeholder alle de vigtige oplysninger, du har brug for til at opretholde og dyrke en P19-cellekultur. Vi vil lære: Hvad er fordoblingstiden for P19-celler? Hvordan dyrker man P19-cellelinjen? Er P19 en adhærent cellelinje?
Vigtige punkter ved dyrkning af P19-celler
Fordoblingstid:
Den rapporterede fordoblingstid for P19-cellelinjen er ca. 2 til 3 dage.
Adhærent eller i suspension:
Den embryonale karcinomcellelinje P19 er adhærent.
Subkultureringsforhold:
P19-celler bør subkultiveres hver 48. time, og der bør opretholdes et opdelingsforhold på 1:10 for disse celler. Adhærente celler vaskes med 1 X fosfatbuffersaltvand og inkuberes med Accutase, indtil cellerne dissocierer. Cellerne tilsættes dyrkningsmedium og høstes ved centrifugering. De opsamlede celler resuspenderes omhyggeligt og fordeles i nye kolber.
Vækstmedium:
DMEM/Ham's F12-medier indeholdende 5 % føtal bovint serum, 3,1 g/L glukose, 1,6 mM L-glutamin, 1,0 mM natriumpyruvat, 15 mM HEPES og 1,2 g/L NaHCO₃ anvendes til dyrkning af P19-celler.
Vækstbetingelser:
En befugtet inkubator indstillet til 37 °C med en CO₂-tilførsel på 5 % er afgørende for vækst og dyrkning af den embryonale karcinomcellelinje P19.
Opbevaring:
Frosne P19-cellehætteglas skal opbevares ved en temperatur under -150 °C i en fryser eller i dampfasen af flydende nitrogen for at bevare cellernes levedygtighed på længere sigt.
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-medier kan anvendes til nedfrysning af P19-celler ved hjælp af en langsom nedfrysningsmetode, der beskytter cellerne mod chok og bevarer deres levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne P19-celler kan optøs i et vandbad ved 37 °C ved hurtigt at omryste hætteglaset i 40 til 60 sekunder. Cellerne tilsættes frisk væske og centrifugeres for at fjerne elementer fra frysemidlet. Cellepaletten resuspenderes igen, og cellerne hældes over i en ny kolbe til vækst.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves laboratorieforhold på biosikkerhedsniveau 1 for P19-cellelinjen.
P19-cellelinjen: Fordele og ulemper
I dette afsnit vil vi gennemgå fordele og ulemper ved P19-cellelinjen.
Fordele
- Differensieringspotentiale: P19-celler kan differentieres til forskellige celletyper, herunder kardiomyocytter, neuroner og mikrogliaceller. De kræver ikke-toksiske stoffer til differentiering, såsom retinsyre og dimethylsulfoxid (DMSO). Retinsyre inducerer udviklingen af neuroner, mikroglia og astroglia, mens DMSO igangsætter udviklingen af pulserende kardiomyocytter og glatte muskelceller. P19-celler er derfor nyttige i studiet af celledifferentiering og udviklingsprocesser.
- Modelsystem: Den pluripotente embryonale karcinomcellelinje P19 er en værdifuld model til undersøgelse af tidlig embryonal udvikling. Forskere anvender P19-celler til at belyse cellesignalveje samt de cellulære og molekylære mekanismer, der er involveret i disse processer.
Ulemper
- Musoprindelse: P19 er en embryonal karcinomcellelinje fra mus. Derfor kan resultaterne fra undersøgelser, der anvender disse celler, muligvis ikke fuldt ud overføres til menneskets biologi og processer.
Forskningsanvendelser af P19-celler
P19-celler har adskillige forskningsanvendelser på grund af deres differentieringsevne og relevans for udviklingsbiologi og stamcelleforskning. Nogle af de vigtige forskningsanvendelser af P19-embryonale karcinomceller omfatter:
- Undersøgelser af celledifferentiering: Som bekendt kan P19-celler differentiere sig til neuroner, mikroglia, glatte muskelceller og kardiomyocytter; de anvendes derfor i vid udstrækning til at undersøge celledifferentieringsprocesser. Derudover bidrager de til forskning i neural og kardial udvikling samt de underliggende mekanismer. En undersøgelse fra 2018 viste, at reaktive iltarter (ROS) styrer differentieringen af P19-celler til specifikke celletyper og forhindrer induktionen af andre [3]. En anden undersøgelse udforskede den retinsyremedierede neurale differentieringsproces og påviste, at PI3K/Akt/GSK3β-signalvejen er involveret [4].
- Udviklingsbiologi: P19-celler er en uvurderlig model til at studere tidlig embryonal udvikling. De hjælper forskere med at forstå komplekse biologiske processer, såsom vævsdannelse under embryoudviklingen. I forskningen anvendte man P19-celler og undersøgte de molekylære faktorer, der bidrager til dannelsen af ventrikulær septumdefekt (VSD). Resultaterne afslørede, at et langt ikke-kodende RNA, SNHG6, bidrager til VSD ved negativt at regulere miRNA-101 og aktivere Wnt/β-catenin-signalvejen [5].
- Lægemiddelafprøvning: P19-musembryonale karcinomcellelinjer anvendes også til screening af potentielle lægemiddelkandidater. I en undersøgelse anvendte man differentierede P19-celle-neuroner til at undersøge de neurobeskyttende, acetylcholinesterasehæmmende virkninger af syntetisk L-Dopa og et vandigt ekstrakt af Mucuna pruriens-frø. Resultaterne viste, at planteekstraktet udviste lovende resultater sammenlignet med L-Dopa [6].
Køb din P19-cellelinje i dag
P19-celler: Forskningspublikationer
Dette afsnit af artiklen vil omhandle nogle interessante forskningspublikationer, der omhandler P19-celler.
Denne artikel blev offentliggjort i Oncology Reports i 2017. Undersøgelsen fremlagde, at hypofyse-kønshormoner styrer teratokarcinomcellelinjers adhæsion, proliferation og migration, herunder P19-celler.
Det lange ikke-kodende RNA uc.4 påvirker celledifferentiering via TGF-beta-signalvejen
Denne publikation i tidsskriftet Experimental & Molecular Medicine (2018) anvendte P19-celler og undersøgte funktionen af det lange ikke-kodende RNA uc.4. Resultaterne afslørede, at uc.4 påvirker celledifferentiering ved at modulere TGF-beta-signalvejen.
Denne forskningsartikel blev offentliggjort i 2018 i tidsskriftet *Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine*. Undersøgelsen viste, at naturligt hjernevævsekstrakt og 3D-cellekultur kan fremskynde P19-embryonale karcinomcellers differentiering til neurale celler.
Denne undersøgelse blev offentliggjort i Journal of Ethnopharmacology i 2020. Undersøgelsen foreslog, at bladekstrakt fra Cichorium intybus L. kan fremkalde differentiering af P19-embryonale karcinomceller til insulinproducerende β-celler i bugspytkirtlen.
Denne forskning blev offentliggjort i Molecules (2022). Undersøgelsen undersøgte de neurobeskyttende og acetylcholinesterasehæmmende virkninger af Mucuna pruriens-frøekstrakt på P19-celle-neuroner.
Ressourcer til P19-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her følger nogle ressourcer om P19-celler.
- Protokol for neuronal differentiering af P19-celler: Denne artikel indeholder en protokol for neuronal differentiering af P19-celler samt andre nyttige oplysninger om differentiering af P19-celler.
- Transfektion af P19-celler: Dette link hjælper dig med at lære protokollen for transfektion af P19-celler.
Følgende link indeholder protokollen for dyrkning af P19-celler.
- P19-celler: Denne hjemmeside indeholder alle nyttige oplysninger om P19-cellelinjen, herunder dyrkningsbetingelser, P19-cellemedier, celledeling og meget mere.
Udforskning af P19-cellelinjen: Ofte stillede spørgsmål
Referencer
- McBurney, M.W., P19-embryonale karcinomceller. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): s. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19-embryonale karcinomcellelinjer: En model til undersøgelse af interaktioner mellem gener og miljø. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey og G. Rödel, Mitokondrielle ROS styrer differentieringen af pluripotente P19-celler fra mus. Stem Cell Research, 2018. 30: s. 180-191.
- Fu, F., et al., All-trans-retinsyre inducerer differentieringen af P19-celler til neuroner, der er involveret i PI3K/Akt/GSK3β-signalvejen. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): s. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Langt ikke-kodende RNA SNHG6 bidrager til dannelsen af ventrikulær septumdefekt via negativ regulering af miR-101 og aktivering af Wnt/β-catenin-signalvejen. Die Pharmazie – An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): s. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Vandigt ekstrakt af Mucuna pruriens-frø forbedrede de neurobeskyttende og acetylcholinesterasehæmmende virkninger sammenlignet med syntetisk L-dopa. Molecules, 2022. 27(10): s. 3131.