Neuro-2a-cellelinje
Neuro-2a er en musebaseret neuronal cellelinje, der er meget udbredt i neurovidenskabelig forskning. Disse celler anvendes hovedsageligt til at undersøge neural udvikling, differentiering, neurotoksicitet, cellulære signalveje og aksonal vækst. Derudover anvendes de til lægemiddeludvikling og screening.
Denne artikel fokuserer på vigtige aspekter af Neuro-2a-neuroblastomceller, som kan være til hjælp, inden du påbegynder arbejdet med dem. Den vil hovedsageligt omhandle:
- Generelle egenskaber og oprindelse af Neuro-2a-celler
- Oplysninger om dyrkning af Neuro-2a-cellelinjen
- Fordele og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningspublikationer om Neuro-2a-celler
- Ressourcer til Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mere
Generelle egenskaber og oprindelse af Neuro-2a-celler
Denne del af artiklen vil dække baggrunden og de grundlæggende egenskaber ved Neuro-2a-cellelinjen, som det er vigtigt at kende, før man arbejder med den. Her vil du lære: Hvad er Neuro-2a-cellelinjen? Hvad er oprindelsen til Neuro-2a -cellelinjen? Hvad er Neuro-2a-celledifferentiering? Hvor stor er en Neuro-2a-celle? Hvordan ser Neuro-2a-cellernes morfologi ud?
- Neuro-2a-celler stammer fra en spontan tumor (neuroblastom) hos en albino-mus (stamme A). Cellelinjen blev etableret af R.J. Klebe og F.H. Ruddle.
- Neuro-2a-neuroblastomcellerne udviser en morfologi, der er karakteristisk for både neuroner og amøboide stamceller.
- Neuro-2a-cellernes størrelse er 12 mikrometer i højden [1].
- Kromosomtallet for Neuro-2a-celler kan variere fra 59 til 193 med et modalt tal på 95. Karyotypen for disse neuroblastomceller er ustabil inden for et interval på 94 til 98 kromosomer.
Oplysninger om dyrkning af Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler anvendes i vid udstrækning i forskningslaboratorier inden for neurovidenskab. Inden du arbejder med disse celler, bør du sætte dig ind i de vigtige oplysninger om cellekultivering, der er nævnt nedenfor. Dette kan hjælpe dig med at komme godt i gang. Du vil lære: Hvad er et Neuro-2a cellekulturmedium? Hvordan dyrker man Neuro-2a-celler? Hvad er fordoblingstiden for Neuro-2a-celler? Hvad er udsåningsdensiteten for Neuro-2a ? Hvad er protokollen for dyrkning af Neuro-2a-celler? Hvad er dyrkningsmediet til Neuro-2a-celler?
Vigtige punkter ved dyrkning af Neuro-2a-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for Neuro-2a-celler er ca. 70 timer.
Adhærent eller i suspension:
Neuro-2a er en adhærent cellelinje.
Udsåningstæthed:
Den optimerede udsåningstæthed for Neuro-2a-cellelinjen er 1 x 10⁴ celler/cm². Før udsåning vaskes cellerne med magnesium- og calciumfri fosfatbuffersaltvand (1x). Derefter tilsættes en passageringsopløsning (Accutase), og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Efter celledissociation tilsættes frisk medium, og cellerne centrifugeres. Den opsamlede cellepellet resuspenderes omhyggeligt, og cellerne hældes i et dyrkningskar til vækst.
Vækstmedium:
EMEM anvendes til dyrkning af Neuro-2a-celler. Det indeholder 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO₃, EBSS, 1 mM natriumpyruvat og NEAA for optimal cellevækst. Mediet bør udskiftes 1 til 2 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
Neuro-2a-kulturer opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C, der er tilsluttet en 5 % CO₂-forsyning.
Opbevaring:
Cellerne skal opbevares ved en temperatur under -150 °C i en elektrisk fryser til ultralave temperaturer eller i væskeformigt nitrogen i dampfase ved langvarig opbevaring.
Fryseproces og medium:
CM-1- eller CM-ACF-medier anvendes til nedfrysning af Neuro-2a-celler. Cellerne nedfryses ved hjælp af en langsom nedfrysningsproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 °C pr. minut. Dette beskytter cellerne mod chok og bevarer deres levedygtighed.
Optøningsproces:
For at optø frosne kulturer anbringes hætteglaset i et vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes dyrkningsmedium, og cellerne centrifugeres. Dette trin hjælper med at fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes derefter, og cellerne overføres til en ny kolbe fyldt med dyrkningsmedium. Herefter anbringes cellerne i en inkubator ved 37 °C i mindst 24 timer.
Biosikkerhedsniveau:
Håndtering og vedligeholdelse af Neuro-2a-kulturer kræver laboratorieforhold på biosikkerhedsniveau 1.
- Fordele og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af Neuro-2a-cellelinjen
- Oplysninger om dyrkning af Neuro-2a-cellelinjen
- Generelle egenskaber og oprindelse af Neuro-2a-celler
- 5. Forskningspublikationer om Neuro-2a-celler
- Ressourcer til Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mere
- Ofte stillede spørgsmål
Fordele og ulemper ved Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har en række fordele og ulemper, der adskiller dem fra andre neuronale cellelinjer. Nogle af de væsentligste fordele og ulemper ved disse celler er anført her.
Fordele
Fordelene ved den murine neuroblastomcellelinje Neuro-2a er:
-
Let at vedligeholde:
Neuro-2a-cellelinjen kræver ikke komplekse eller indviklede cellekulturprocedurer. De er nemme at dyrke og vedligeholde i forskningslaboratorier.
-
In vitro-neuronmodel:
Neuro-2a er en praktisk neuronal cellemodel, der er meget udbredt blandt forskere inden for studier af neuroners udvikling og differentiering.
Ulemper
Ulemperne ved Neuro-2a-celler er:
-
Musoprindelse:
Neuro-2a stammer fra mus, og forskere bør udvise forsigtighed, når de ekstrapolerer resultater fra musebaserede studier til menneskers sundhed og sygdomme, da musens og menneskets biologi kan afvige betydeligt fra hinanden.
Forskningsanvendelser af Neuro-2a-cellelinjen
Neuro-2a-celler har mange anvendelsesmuligheder inden for neurovidenskabelig forskning. Her beskrives nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje:
- Neural udvikling: Neuro-2a er en in vitro-neuronal cellemodel, der er meget udbredt til at studere neuronal udvikling og relaterede processer såsom differentiering, aksonal vækst og synapsedannelse. I en undersøgelse fra 2020 blev Neuro-2a-celler anvendt til at undersøge mikroRNA-124's rolle i retinsyre-induceret neuronal celledifferentiering [2]. En anden undersøgelse undersøgte ekspressionen af Neuro-2a-retinsyre-receptor gamma (RARG) og miRNA-124 i neuroblastomcellelinjen (N2A). Denne undersøgelse foreslog, at RARG er mål for miR-124 og hæmmer neuritvækst [3].
- Neurotoksicitet: Neuro-2a anvendes også til at vurdere de toksiske virkninger af lægemidler, kemikalier eller miljøfaktorer på nerveceller. For eksempel undersøgte en undersøgelse foretaget af Zhihong Yin og kolleger neurotoksiciteten af bisphenol A (BPA), et miljøkemikalie, ved hjælp af Neuro-2a-celler. De observerede, at BPA hæmmer neuroncelledifferentiering og -proliferation ved at forstyrre deres cellulære og synaptiske integritet [4].
- Lægemiddelscreening: Neuro-2a-celler anvendes også til at evaluere de terapeutiske virkninger af forskellige lægemidler, forbindelser og naturprodukter. I en undersøgelse blev der for eksempel anvendt Neuro-2a-celler til at undersøge det antioxidative potentiale i planteekstrakt fra Ginkgo biloba. Desuden pegede forskningen på, at det medfører et fald i Aβ-aggregering og kan være en potentiel behandling af Alzheimers sygdom [5].
5. Forskningspublikationer om Neuro-2a-celler
Her er nogle interessante forskningsartikler om Neuro-2a-cellelinjen.
Denne undersøgelse, offentliggjort i Journal of Natural Medicines i 2018, undersøgte de terapeutiske virkninger af alkamider isoleret fra hvid peber (P. nigrum) på Neuro-2a-neuronceller.
Nkx2.1-nedregulering er involveret i hjerneabnormiteter forårsaget af overskydende retinsyre
Denne forskning, offentliggjort i Acta Biochimica et Biophysica Sinica i 2020, foreslog, at Nkx2.1-genet spiller en vigtig rolle i musens hjerneudvikling ved at regulere Shh-signalkaskaden.
Denne artikel blev offentliggjort i *Toxicology and Industrial Health* (2023) og foreslår, at miljøkemikaliet bisphenol A udløser neurotoksicitet i neuro-2a-celler og forstyrrer deres synaptiske og cytoskeletale funktioner.
Denne artikel i tidsskriftet *Pharmaceuticals* (2021) foreslår, at lægemidlet hexarelin modulerer PI3K/AKT- og MAPK-kaskaderne i neuroblastomceller (Neuro-2a) og hæmmer hydrogenperoxid-induceret apoptose i Neuro-2a-celler.
Denne forskningsartikel i Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) foreslår, at frugtekstrakt fra Emblica officinalis undertrykker neuroinflammation i Neuro-2a-celler og dermed kan være gavnligt ved neuroinflammatoriske sygdomme.
Ressourcer til Neuro-2a-celler: Protokoller, videoer og mere
Nedenfor findes de online ressourcer, der er tilgængelige om Neuro-2a-celler. De omfatter protokol for Neuro-2a-cellekultur og transfektion.
- Transfektionsprotokol for Neuro-2a: Neuro-2a er en velegnet transfektionsvært. Dette link vil guide dig gennem transfektionsprotokollen for cellelinjen. Transfektionseffektiviteten for Neuro-2a varierer fra reagens til reagens.
Følgende link indeholder protokollen for dyrkning af Neuro-2a-celler.
- Neuro-2a-cellekulturprotokol: Dette link hjælper dig med at lære protokollen for subkultivering af Neuro-2a-celler.
- Neuro-2a-celler: Hjemmesiden indeholder omfattende viden om Neuro-2a-cellemedier, udsåningstæthed samt protokoller for subkultivering og håndtering af kryopræserverede og proliferative kulturer.
Referencer
- Lulevich, V., et al., Enkeltcellemekanik udgør et følsomt og kvantitativt middel til at undersøge interaktioner mellem amyloid-beta-peptid og neuronale celler. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872-7.
- You, Q., et al., miR-124’s rolle i reguleringen af retinsyre-induceret Neuro-2A-celle-differentiering. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinsyre-receptor gamma er mål for mikroRNA-124 og hæmmer neuritvækst. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z., et al., Eksponering for bisphenol-A inducerede neurotoksicitet og var forbundet med synapser og cytoskelettet i Neuro-2A-celler. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L., et al., Ginkgo biloba-ekstrakt (EGb) hæmmer oxidativt stress i Neuro-2A-celler, der overeksprimerer APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.