NCI-H1299-celler: Forskning og kliniske implikationer af NCI-H1299-lungekræftceller

Oplysninger om dyrkning

Det er ikke let at opretholde en cellelinjekultur, før man kender alle de vigtige oplysninger om den, herunder: Hvad er fordoblingstiden for NCI-H1299? Hvad er udsåningsdensiteten for NCI-H1299? Hvad er NCI-H1299-cellemediet? Hvordan dyrker man NCI-H1299-cellelinjer? Dette afsnit vil hjælpe dig med at finde svarene på alle disse spørgsmål om dyrkning af NCI-H1299-celler.

Vigtige punkter ved dyrkning af NCI-H1299-celler

Fordoblingstid:

Fordoblingstiden for NCI-H1299 ligger mellem 22 og 30 timer.

Adhærent eller i suspension:

NCI-H1299 er en adhærent cellelinje.

Subkultiveringsforhold:

NCI-H1299-celler subkultiveres ved et anbefalet forhold på 1:3 til 1:6. Til udsåning vaskes de adhærente celler med 1x PBS og inkuberes med Accutase-passageopløsning i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Løsrevne celler tilsættes frisk dyrkningsmedium og centrifugeres. Cellepelleten resuspenderes derefter, og cellerne hældes over i nye kolber indeholdende vækstmedium.

Vækstmedium:

RPM1 1640 er et ideelt dyrkningsmedium til NCI-H1299-celler. Det tilsættes 10 % føtal bovint serum, 4500 mg/L glukose, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 1500 mg/L NaHCO3 og 10 mM HEPES. Mediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.

Vækstbetingelser:

NCI-H1299-lungekræftcellekulturer opbevares i en befugtet inkubator ved 37 °C med en CO₂-tilførsel på 5 %.

Opbevaring:

NCI-H1299-cellelinjen kan opbevares i lang tid i dampfasen af flydende nitrogen eller i ultralavtemperaturfrysere ved temperaturer under -150 °C.

Fryseproces og medium:

CM-1 eller CM-ACF er frysemedier til NCI-H1299-celler. Cellerne fryses ved hjælp af en langsom fryseproces, der kun tillader et temperaturfald på 1 grad pr. minut for at beskytte cellernes levedygtighed.

Optøningsproces:

Frosne NCI-H1299-celler omrystes hurtigt i et forvarmet vandbad ved 37 grader Celsius i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. De optøede celler tilsættes frisk væske og kan dyrkes direkte i nye kolber eller centrifugeres. I førstnævnte tilfælde skal væsken udskiftes efter 24 timers inkubation. Centrifugering hjælper med at fjerne rester af frysemidlet. Derefter resuspenderes de høstede celler i frisk væske og overføres til den nye kolbe til dyrkning.

Biosikkerhedsniveau:

Der kræves et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 til håndtering af NCI-H1299-cellekulturen.

Køb NCI-H1299-cellelinjen: Forskningsværktøjer af høj kvalitet til undersøgelse af lungekræftbiologi

Fordele og ulemper ved NCI-H1299-celler

Ligesom andre humane kræftcellelinjer har NCI-H1299 også nogle karakteristiske egenskaber, der er forbundet med specifikke fordele og ulemper. Her har vi opsummeret nogle af de væsentligste.

Fordele

De vigtigste fordele ved NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekræft er:

• In vitro-model for lungekræft

  NCI-H1299-cellelinjer er udviklet ud fra lymfeknudemetastaser fra lungekræft og har derfor relativt ensartede egenskaber. Derfor kan disse celler fungere som en in vitro-model til at undersøge lungekræftbiologi, cellulære og molekylære mekanismer samt screene og teste potentielle behandlingsmidler.

• Let at dyrke

  NCI-H1299-celler er nemme at dyrke og vedligeholde i et forskningslaboratorium. Der er ingen komplicerede krav eller procedurer for cellekulturen.

• NCI-H1299 P53 og NCI-H1299 KRAS-mutation

  NCI-H1299-celler mangler p53-genekspression, hvilket gør det muligt for cellerne at formere sig kraftigt. Desuden bærer de en KRAS-mutation, der bidrager til cellevækst, proliferation, invasion og migration. I lyset heraf anvender forskere H1299-celler til at undersøge molekylære mekanismer, der er relevante for KRAS- og P53-mutationer.

Ulemper

Ulemperne ved NCI-H1299-celler er:

• Vævsspecificitet

  NCI-H1299 stammer fra lungevæv. Derfor er cellernes anvendelighed hovedsageligt begrænset til forskning i lungekræft. De repræsenterer muligvis ikke fuldt ud andre kræfttypers heterogenitet og generelle karakteristika.

Forskningsanvendelser af NCI-H1299-celler

NCI-H1299-cellelinjen anvendes i vid udstrækning i lungekræftforskning. Her nævnes nogle få lovende anvendelser af denne cellelinje.

• Kræftbiologi: NCI-H1299-celler fungerer som et fremragende forskningsværktøj til at undersøge kræftudvikling, -progression og relaterede cellulære og molekylære mekanismer. Disse celler bærer bestemte mutationer, hvilket giver forskerne mulighed for at udforske relateret kræftcelleadfærd, signalveje og genekspressionsprofiler. Flere studier har anvendt NCI-H1299-cellelinjen for ikke-småcellet lungekræft til at undersøge lungekræftbiologi. For eksempel undersøgte et studie fra 2018 den signalvej, der er involveret i lungekræftcellers apoptose, ved hjælp af NCI-H1299-celler. Forskerne fandt, at PI3K/AKT-signalvejen bidrager til celleproliferation, og at hæmning af denne vej kan forårsage kræftcelledød [1]. Ligeledes undersøgte en anden undersøgelse de mekanismer, der er involveret i NCI-H1299-cellernes epitel-til-mesenkym-overgang (EMT). Denne undersøgelse fremsatte den hypotese, at et ekstracellulært protein, SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), bidrager til NCI-H1299-EMT og migration og dermed fremmer tumorigenese i cellerne – SPARC-proteinet fungerer som en mediator for TGF-β1-signalering [2]. 

• Lægemiddelforskning og -screening: NCI-H1299, en human lungekræftcellelinje, anvendes i vid udstrækning til at vurdere toksicitet og effektivitet af potentielle lægemidler. Derudover bruges den af forskere til at undersøge virkningsmekanismen for antitumorlægemidler. I undersøgelser er disse celler også blevet anvendt til at identificere mulige lægemiddelmål og resistensmekanismer. For eksempel undersøgte forskning udført af Xiao-Yun Shen og kolleger det kræftbekæmpende potentiale af det naturlige stof brucein D (BD). Resultaterne viste, at BD i væsentlig grad hæmmer proliferation, invasion og migration af NCI-H1299-celler. Derfor kan det betragtes som en potentiel adjuverende behandling til behandling af ikke-småcellet lungekræft [3]. Tilsvarende vurderede en undersøgelse de cytotoksiske virkninger af xanthohumol alene og i kombination med kemoterapeutikummet cisplatin på NCI-H1299-lungekræftceller [4].

Ofte stillede spørgsmål om NCI-H1299-cellelinjen

Referencer

1. Gu, J., et al., Undersøgelse af EGCG-induceret apoptose i lungekræftceller ved hæmning af PI3K/Akt-signalvejen. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557-4563.
2. Sun, W., et al., SPARC fungerer som mediator for TGF-β1 ved fremme af epitel-til-mesenkym-overgang i A549- og H1299-lungekræftceller. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453-464.
3. Shen, X.-Y., et al., En undersøgelse af virkningsmekanismen for brucein D ved behandling af ikke-småcellede lungekræftceller af typen H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B., et al., Cytotoksiske virkninger af xanthohumol og dets kombination med cisplatin på humane metastatiske lungekræftceller af typen H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1-15.