BEWO-cellelinje
BeWo er en cellekultur afledt af humant choriocarcinom, der er meget udbredt i biomedicinsk forskning. Den fungerer som en værdifuld in vitro-model til at undersøge den komplicerede proces med placentaudvikling og syncytialisering af humane trofoblaster. Forskere anvender også disse celler til at studere trofoblastcellers adfærd, hormonproduktion og transport af stoffer gennem placenta. Derudover har BeWo-celler også anvendelse inden for toksikologi, infektioner og studier af smitteoverførsel.
Denne artikel indeholder grundlæggende viden om BeWo-cellerne, som kan hjælpe dig med at arbejde med dem i din forskning. Den vil omfatte:
- BeWo-cellernes generelle egenskaber og oprindelse
- BeWo-cellelinje: Oplysninger om dyrkning
- Fordele og ulemper ved BeWo-cellelinjen
- Forskningsanvendelser af BeWo-celler
- Forskningspublikationer om BeWo-celler
- Ressourcer til BeWo-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
BeWo-cellernes generelle egenskaber og oprindelse
Forudgående viden om en cellelinjes oprindelse og generelle egenskaber er afgørende for dens anvendelse i din forskning. Denne del af artiklen undersøger BeWo-cellelinjens oprindelse, karakteristiske træk og meget mere. Her vil du lære: Hvad er BeWo-choriocarcinom-cellelinjen? Hvad er BeWo-syncytialisering? Hvor stammer BeWo-celler fra? Hvad er BeWo-cellernes morfologi? Hvad er BeWo's ploidi?
- Placentacellelinjen BeWo stammer fra et malignt gestationelt choriocarcinom i en mandlig fosterplacenta i 1968 [1]. Den fungerer derfor som en uvurderlig model for placenta-forskning.
- BeWo-celler udviser en epitel-lignende morfologi.
- BeWo-celler er relativt små og varierer mellem 20 og 30 µm [2].
- BeWo-celler udviser en stabil karyotype. Deres stamcelleantal er hypotetraploid. Det modale kromosomantal for BeWo-celler er 86. Det kan variere fra 71 til 178.
- BeWo-celler producerer flere hormoner, dvs. humant chorionisk somatomammotropin, humant chorionisk gonadotropin (hCG) og steroidhormoner.
- BeWo-celler udtrykker molekylære markører, herunder CK 7, E-cadherin og VE-cadherin.
B30-sublinje
B30 er en sublinje af BeWo-celler. Den bruges til at undersøge optagelse og transport af næringsstoffer. Dette tilskrives deres kraftige vækst på porøse membraner.
BeWo og JEG-3
BeWo- og JEG-3-cellelinjer stammer fra choriocarcinomer og anvendes i placenta-forskning. BeWo-celler producerer hormoner i lavere niveauer end JEG-3, såsom humant choriongonadotropin (hCG) og østradiol.
BeWo-cellelinje: Oplysninger om dyrkning
Det kan være vanskeligt at opretholde en cellekultur, medmindre man kender de vigtigste detaljer. For eksempel: Hvad er fordoblingstiden for BeWo? Hvad er BeWo-cellemediet? Hvordan dyrker man BeWo-cellelinjen?, og Hvordan fryser man BeWo-celler ned?
Vigtige punkter ved dyrkning af BeWo-celler
Fordoblingstid:
Fordoblingstiden for BeWo-cellerne er ca. 30 timer.
Adhærent eller i suspension:
BeWo er en adhærent cellelinje.
Celleudsåningstæthed:
Den anbefalede udsåningstæthed for BeWo-celler er 1 x 10⁴ celler/cm². Ved udsåning fjernes gammelt medie fra cellerne, og cellerne skylles med 1× PBS. Derefter tilsættes Accutase (passageringsopløsning), og cellerne inkuberes i 8 til 10 minutter ved stuetemperatur. Herefter tilsættes kulturmedium til de løsrevne celler, og de centrifugeres. De høstede celler resuspenderes derefter og hældes over i en ny kolbe.
Vækstmedium:
Ham's F12K-medium indeholdende 10 % FBS, 2,0 mM L-glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat og 2,5 g/L NaHCO₃ anvendes til dyrkning af BeWo-celler. BeWo-cellemediet bør udskiftes 2 til 3 gange om ugen.
Vækstbetingelser:
BeWo-celler opbevares i en befugtet inkubator indstillet til en temperatur på 37 grader Celsius og med en CO₂-tilførsel på 5 %.
Opbevaring:
Frosne BeWo-celler opbevares ved under -150 °C i en elektrisk ultralavtemperaturfryser eller i dampfasen af flydende nitrogen.
Fryseproces og medium:
Det anbefales at nedfryse BeWo-celler i CM-1- eller CM-ACF-nedfrysningsmedium. Cellerne nedfryses ved hjælp af en langsom nedfrysningsmetode. Denne metode tillader kun et temperaturfald på 1 grad pr. minut, hvilket forhindrer cellerne i at få et temperaturchok og beskytter cellernes levedygtighed.
Optøningsproces:
Frosne celler optøs ved at nedsænke dem i et forudindstillet vandbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder, indtil der kun er en lille isklump tilbage. Derefter tilsættes frisk vækstmedium, og cellerne centrifugeres for at fjerne komponenterne fra frysemediet. Den opsamlede cellepellet resuspenderes og overføres til en dyrkningskolbe med henblik på vækst.
Biosikkerhedsniveau:
Der kræves et laboratorium på biosikkerhedsniveau 1 til håndtering og vedligeholdelse af BeWo-cellekulturer.
Udgivet: 2023 | Senest opdateret: maj 2026
Fordele og ulemper ved BeWo-cellelinjen
BeWo-celler har unikke egenskaber og medfører specifikke fordele og ulemper. I dette afsnit vil vi undersøge nogle af de mest bemærkelsesværdige.
Fordele
De vigtigste fordele ved BeWo-choriocarcinom-cellelinjen er:
-
In vitro-model for placentaceller
BeWo-celler udgør en in vitro-model til undersøgelse af trofoblastcellers adfærd og syncytiation i placenta, hvorved man kan replikere processer, der er vanskelige at observere in vivo.
-
Hormonproduktion
BeWo-celler udskiller hormoner, såsom hCG og placentalactogen, hvilket gør dem værdifulde til studier af hormonregulering og forskning i reproduktionsbiologi.
Ulemper
Ulemperne ved BeWo-trofoblastceller er:
-
Kræftcellelinje
BeWo-celler stammer fra choriocarcinom, som er en placenta-tumor. Denne oprindelse repræsenterer muligvis ikke fuldt ud normal placenta-cellefunktion.
Forskningsanvendelser af BeWo-celler
BeWo-cellelinjen anvendes i vid udstrækning i placenta-forskning. Her nævnes nogle få specifikke anvendelser af denne cellelinje:
- Forskning i moderkagen og graviditet: BeWo-celler spiller en central rolle i forskning i moderkagen og graviditet. Forskere bruger for eksempel disse celler til at undersøge transporten af stoffer, herunder lægemidler, næringsstoffer og toksiner, gennem moderkagebarrieren. Desuden undersøger de også produktionen og reguleringen af hormoner, herunder humant choriongonadotropin (hCG), placentalaktogen og steroidhormoner. Dette er vigtigt for at forstå hormonelle forandringer under graviditeten. Forskning udført i 2018 undersøgte effekten af bromerede flammehæmmere (BFR'er) på aktiviteten af sulfotransferase i den humane trofoblastiske cellelinje (BeWo). Dette enzym er involveret i reguleringen af de intracellulære niveauer af skjoldbruskkirtelhormonet [3].
- Infektions- og sygdomsforskning: BeWo-celler anvendes også til at undersøge interaktionen mellem patogener og placentaceller. Denne forskning er værdifuld for at forstå sygdomme, der kan overføres fra mor til foster, og for at udvikle strategier til at beskytte fostrets sundhed. Desuden hjælper denne cellelinje forskere med at undersøge komplikationer, der opstår under graviditeten, såsom præeklampsi. For eksempel anvendte en undersøgelse udført af Michalina Bralewska i 2023 BeWo-trofoblastcellemodellen og fandt, at både Chromogranin A (CgA) og det peptid, der stammer fra det, catestatin (CST), kan spille en rolle i den indviklede proces med præeklampsi (PE)-patogenese [4]. I forlængelse heraf undersøgte en anden undersøgelse trichosanthins potentiale som kræftmiddel ved hjælp af BeWo-choriocarcinom-cellelinjen. Forskningen gjorde også en ekstra indsats for at opdage biomarkører ved at udføre sammenlignende proteomisk analyse før og efter eksperimentet [5].
5. Forskningspublikationer om BeWo-celler
Her er nogle vigtige forskningspublikationer om BeWo-trofoblastceller.
Denne undersøgelse i Frontiers in Bioscience-Landmark (2022) foreslog, at AMPK-signalering aktiverer mitofagi i BeWo-trofoblastceller via FUNDC1- og PRKN-faciliterede mitofagiveje. Som et resultat hjælper mitofagi med at opretholde ATP-produktion og mitokondriemembranpotentiale.
Ethylparaben inducerer apoptotisk celledød i humane placenta-BeWo-celler via Caspase-3-vejen
Denne artikel blev offentliggjort i Animal Cells and Systems (2020). Undersøgelsen foreslog, at ethylparaben medierer BeWo-cellers apoptose via regulering af caspase 3-vejen.
Denne undersøgelse i tidsskriftet Drug Metabolism and Disposition (2023) anvendte placentacellelinjer, herunder BeWo, JAR, JEG-3 og HTR-8/SVneo, til at undersøge aflejringen af fremmedstoffer og steroider i celler.
Denne forskningsartikel i International Journal of Molecular Medicine (2020) foreslog, at Apelin, liganden til APJ-receptoren, fremmer BeWo-celleproliferation gennem APJ- og ERK1/2-, stat3- og AMPK-signalering. Det kunne således være et essentielt adipokin, der regulerer udviklingen af placenta.
Denne undersøgelse i Epilepsia (2021) undersøgte virkningerne af føtale næringsstoffer og antiepileptika på cholintransportører i den humane trofoblastcellelinje, BeWo.
Ressourcer til BeWo-cellelinjen: Protokoller, videoer og mere
Her er nogle online ressourcer om BeWo-celler:
- In vitro-transfektion: Denne video hjælper dig med at lære protokollen for in vitro-plasmid-DNA-transfektion for adhærente celler.
Følgende link indeholder oplysninger om cellekulturer for BeWo-celler:
- BeWo-celler: Denne hjemmeside indeholder vigtige oplysninger om cellekulturer vedrørende BeWo-cellelinjen. Dette omfatter oplysninger om cellemedier og dyrkningsbetingelser. Den indeholder også protokoller for subkultivering og håndtering af kryopræserverede og proliferative kulturer.
Referencer
- Weber, M., et al., Cytogenomics of six human trophoblastic cell lines. Placenta, 2021. 103: s. 72-75.
- Kolokol'tsova, T., et al., Characteristics of trophoblasts in long-term culture. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2017. 164: s. 259-265.
- Leonetti, C.P., C.M. Butt og H.M. Stapleton, Forstyrrelse af thyreoideahormonsulfotransferaseaktivitet ved bromholdige flammehæmmende kemikalier i den humane choriocarcinom-placentacellelinje, BeWo. Chemosphere, 2018. 197: s. 81-88.
- Bralewska, M., T. Pietrucha og A. Sakowicz, Reduktion i CgA-afledt CST-proteinniveau i HTR-8/SVneo- og BeWo-trofoblastcellelinjer forårsaget af det præeklampatiske miljø. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(8): s. 7124.
- Hu, Y. et al., Komparativ proteomisk analyse af tilsætning af lægemidlet trichosanthin til BeWo-cellelinjen. Molecules, 2022. 27(5): s. 1603.