Vero Cells: Průkopnické cesty v oblasti virových studií a inovací vakcín

Buněčná linie Vero, imortalizovaný buněčný model savců odvozený z epiteliálních buněk ledvin africké zelené opice, stojí v čele výzkumu virologie, mikrobiologie a buněčné a molekulární biologie. Jejich široké uplatnění zahrnuje vývoj vakcín, farmaceutický screening a výzkum biologie virů a parazitů, nádorové imunologie a imunoterapeutických strategií.

Původ a klíčové vlastnosti buněk Vero

Při zkoumání buněčné linie, jako je Vero, se nabízí několik otázek: Co přesně jsou buňky Vero? Jak vznikla buněčná linie Vero? Jaký příběh se skrývá za názvem "Vero"? Cílem této části je objasnit genezi a základní vlastnosti buněk Vero.

Vznik buněčné linie Vero se datuje do roku 1962 a pochází z epitelových buněk ledvin africké zelené opice. Tuto linii kultivovali Y. Kawakita a Yasumura na univerzitě Chiba v Japonsku. Termín "Vero" je odvozen z esperantského "Verda reno", což v překladu znamená "zelená ledvina", ačkoli "Vero" také rezonuje s pojmem "pravda"

Buňky Vero obvykle tvoří monovrstvy, ale mohou se přizpůsobit suspenzním kulturám a vykazovat strukturu podobnou epitelu. Tyto buňky se vyznačují zaobleným až protáhlým tvarem a průměrným průměrem asi 17 µm. Buňky Vero vykazují hypodiploidní počet chromozomů, přičemž modální počet chromozomů je 58 u zhruba 66 % buněčné populace, ačkoli variace s vyšší ploidií existují u malé části buněk (1,7 %).

Klonování buněk Vero a jejich jedinečné vlastnosti

Odlišné klony odvozené z linie buněk Vero vykazují jedinečné vlastnosti, které je odlišují od původní linie. Mezi ně patří dva pozoruhodné klony buněk Vero:

• Buněčná linie Vero E6: Tento klon, známý také jako Vero C1008, pochází z buněk Vero 76 a byl izolován v roce 1979 P. J. Pricem pomocí techniky ředění na mikrotitračních destičkách. Buňky Vero E6 jsou vhodné zejména pro kultivaci virů, které se pomalu replikují.

• Buňky Vero 76: Tyto buňky pocházejí z ledvin africké zelené opice z roku 1968 a zachovávají si epitelovou morfologii charakteristickou pro buňky Vero.

Tyto varianty buněk Vero mají vedle mateřské linie nadále zásadní význam pro rozvoj virologického výzkumu a vývoj lékařských zákroků, což značí jejich význam ve vědecké komunitě.

Kultivační informace

Kultivace buněk Vero, opičí buněčné linie, vyžaduje znalost specifických parametrů, jako je doba zdvojení, hustota výsevu a vhodné růstové médium.

• Doba zdvojení populace: Doba zdvojení buněk Vero je přibližně 24 hodin.

• Adherence: Vero buňky přilnou k povrchu a při kultivaci obvykle tvoří monovrstvy.

• Hustota výsevu: Doporučuje se začít s hustotou výsevu 1 x 10^4 buněk/cm^2. Chcete-li kultivovat adherentní Vero buňky, promyjte je PBS a ošetřete je Accutase, aby se oddělily. Po oddělení buňky odstřeďte, znovu je rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových kultivačních baněk.

• Kultivační médium: Pro kultivaci buněk Vero jsou vhodná média Ham's F12 i DMEM. Měla by být doplněna 2,5 mM L-glutaminem a 5 % fetálního hovězího séra (FBS), aby se podpořil optimální růst. Médium by se mělo obnovovat dvakrát až třikrát týdně.

• Růstové podmínky: Vero buňky prospívají při teplotě 37 °C ve zvlhčeném prostředí s 5 % CO2.

• Skladování: Pro dlouhodobé skladování by měly být buňky Vero uchovávány při teplotě nižší než -150 °C, a to buď v mrazničce s velmi nízkou teplotou, nebo v plynné fázi tekutého dusíku.

• Postup zmrazování a médium: Pro kryokonzervaci použijte jako zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF nebo růstové médium s FBS a DMSO. Použijte pomalou techniku zmrazování, kdy se teplota postupně snižuje o 1 °C za minutu.

• Postup rozmrazování: Rozmrazujte buňky Vero ponořením nádoby do vodní lázně o teplotě 37 °C a jemným mícháním po dobu 40-60 sekund. Poté buňky zřeďte v čerstvém médiu, odstřeďte, abyste odstranili kryoprotektivum, znovu je rozpusťte v čerstvém růstovém médiu a umístěte je do nové baňky, aby se obnovily a rostly.

• Úroveň biologické bezpečnosti: S buňkami Vero by se mělo manipulovat v laboratoři, která splňuje požadavky na úroveň biologické bezpečnosti 1.

Použití buněčné linie Vero ve výzkumu

Buněčná linie Vero má četné využití ve výzkumu v oblasti buněčné biologie a virologie. Zde jsme se věnovali některým konkrétním z nich.

Buňky Vero ve výzkumu virů a výrobě vakcín

Buňky Vero, odvozené z buněk afrických zelených opičích ledvin, se staly základem při vývoji bioprocesů vakcín proti různým virům, včetně polioviru a viru japonské encefalitidy. Jejich přizpůsobivost v adherentních i suspenzních kulturách a jejich široká schopnost podporovat viry, včetně patogenů, jako je virus des petits ruminants, podtrhují jejich význam při izolaci virů a vývoji vakcín.

Vero buňky byly v mnoha studiích použity k výrobě vakcín pro lidi. Například významná studie publikovaná v roce 2019 prokázala použití buněk Vero při vývoji inaktivované vakcíny proti viru žluté zimnice [2].

Buňky Vero se běžně používají ve studiích virových infekcí, například ve studii provedené v roce 2020, která infikovala buňky Vero různými izoláty viru SARS-CoV-2 za účelem studia růstových vlastností viru [4]. Podobně jiná studie zkoumala buněčné reakce na infekci virem SARS-CoV-2 s využitím buněčné kultury Vero [5].

Úloha buněk Vero při tkáňovém inženýrství a vývoji bioprocesů v předchozích fázích vývoje

Kromě výroby vakcín přispívají buňky Vero k tkáňovému inženýrství a širší oblasti vývoje bioprocesů, což podtrhuje potřebu pokračujícího výzkumu jejich vlastností a aplikací. Výběr vhodných podlinek buněk Vero je klíčem k maximalizaci jejich potenciálu v biotechnologickém a farmaceutickém průmyslu.

Použití buněk Vero při testování účinnosti a bezpečnosti léčivých přípravků

Buňky Vero se často používají při testování léčiv k posouzení účinnosti a bezpečnosti farmaceutických sloučenin. Tyto buňky jsou často považovány za standardní model normálních ledvinových buněk ve studiích zkoumajících cytotoxické účinky různých léčiv a terapeutických látek. Například výzkum porovnávající vliv extraktů z kořene rostliny Terminalia avicennioides na HepG2, buněčnou linii rakoviny jater, a na buňky Vero, odvozené z epitelu opičích ledvin, zjistil, že extrakty více poškozují rakovinné buňky než normální buňky.

Omezení buněk Vero

Ačkoli jsou buňky Vero hojně využívány, mají svá omezení, jako je produkce vero toxinů a genomické změny, které mohou ovlivnit některé aplikace. Pochopení specifických podlinek a genomických vlastností buněk Vero, včetně linie Vero F6, je nezbytné pro optimalizaci jejich použití v různých bioprocesech.

Prozkoumejte naše buňky Vero a jejich deriváty pro průlomové výzkumné aplikace

Výzkumné publikace

Níže jsou uvedeny některé nejnovější a nejčastěji citované výzkumné publikace s buňkami Vero.

Přizpůsobení buněk Vero k růstu v suspenzi pro produkci viru vztekliny v různých bezsérových médiích

Tato studie publikovaná v časopise Vaccine Journal (2019) přizpůsobila buňky Vero k růstu v suspenzních kulturách pro produkci viru vztekliny ve vysokém titru za použití různých bezsérových médií.

Citlivost Toxoplasma gondii k etanolovému extraktu z Tinospora crispa ve Vero buňkách

Tento článek byl publikován v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine v roce 2019. Studie navrhla, že etanolový extrakt rostliny Tinospora crispa působí škodlivě na parazita Toxoplasma gondii. Pro hostitelské buňky (buněčnou linii Vero) je však bezpečný.

Účinky extraktu z listů Colchicum baytopiorum na cytotoxicitu a dráhy buněčné smrti u buněčných linií C-4 I a Vero

Tento článek byl publikován v časopise Journal of the Balkan Union of Oncology v roce 2021. V tomto stidy Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez a Gul Ozcan zkoumali cytotoxický účinek extraktu z listů Colchicum baytopiorum na buněčné linie C-4I a Vero.

Resveratrol inhibuje replikaci koronaviru 2 těžkého akutního respiračního syndromu (SARS-CoV-2) v kultivovaných buňkách Vero

Tato studie v časopise Phytotherapy Research (2021) použila k výzkumu terapeutického účinku resveratrolu na replikaci viru buňky Vero infikované SARS-CoV-2.

Lipofilní statiny inhibují produkci viru Zika v buňkách Vero

Tento článek v časopise Nature Scientific Reports (2019) navrhuje, že lipofilní statiny, tj. cerivastatin, lovastatin, fuvastatin, simvastatin a mevastatin, mohou bránit produkci viru Zika v buňkách Vero.

Zdroje pro buňky Vero: Zdroje: protokoly, videa a další

• Transfekce buněk Vero: Tento odkaz vás provede transfekčním protokolem pro buňky Vero.
• Transfekce buněčné linie Vero: Toto video vysvětluje protokol transfekce buněčné linie Vero.
• Subkultivace buněk Vero: Toto video popisuje obecná doporučení pro subkultivaci adherentních buněčných linií.

Protokoly pro kultivaci buněk

• Kultivace buněk Vero: Tato webová stránka obsahuje dobře vysvětlený protokol pro kultivaci buněk Vero.
• Kultivace buněk Vero: Tento dokument vám může pomoci naučit se protokol pro množení, udržování a zmrazování buněk Vero.

Odkazy

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton a A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferativní účinek extraktů a frakcí kořene Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill a Perr. na buněčné linie HepG2 a Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): s. 1-7.
4. Yao, P. a kol. izolace a růstové charakteristiky SARS-CoV-2 v buňkách Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection (Rozdílná signalizace a produkce viru v buňkách Calu-3 a Vero při infekci SARS-CoV-2 ). Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.