Ramosovy buňky - výzkum B-buněčného lymfomu: Význam Ramosových buněk
Ramosovy buňky jsou buněčnou linií B lymfocytů, která se hojně používá v biomedicínském výzkumu. Uplatnění nacházejí především v imunologii a při studiu rakoviny. Výzkumníci tyto buňky využívají k hodnocení cytotoxických léčiv a ke studiu povrchových antigenů B buněk, mutací a apoptotických mechanismů.
Původ a obecné vlastnosti Ramosových buněk s
Pochopení původu a základních vlastností buněčné linie hraje zásadní roli při rozhodování o její vhodnosti pro váš výzkum. Proto je vhodné tyto informace důkladně posoudit před zahájením jakékoliv práce s ní. Tato část se zabývá následujícími často kladenými otázkami: Co je to linie nádorových buněk Ramos? Co je buněčná linie Ramos CD19? Co je buněčná linie Ramos CD20? Jaký je původ buněk Ramos? Jaké jsou markery buněčné linie Ramos? Jaká je velikost buněk Ramos? Jaká je morfologie buněčné linie Ramos?
- Ramosova buněčná linie byla založena v roce 1972. Tyto buňky byly získány z ascitické tekutiny tříletého kavkazského chlapce s Burkittovým lymfomem amerického typu [1].
- Exprimují klíčové markery B buněk, včetně imunoglobulinu M (IgM), CD19, CD20 a CD22.
- Ramosovy buňky jsou negativní na virus Epstein Bar. Mohou však být trvale přesunuty na buňky Epstein-Barrové pozitivní.
- Tyto buňky B lymfoblastu mají morfologii kulatého tvaru.
Ramosovy modré buňky vs. Ramosovy B buňky
Ramosovy modré buňky i Ramosovy B buňky jsou lidské Burkittovy lymfomové buňky. Obě jsou negativní na virus Epstein Bar. Rozdíl mezi těmito buňkami spočívá v tom, že modré buňky Ramos exprimují reportérový gen indukovaný NF-κB/AP-1 zvaný SEAP (secreted embryonic alkaline phosphate), zatímco bílé buňky Ramos ne.
Kultivace Ramosových buněk
Tato část článku je věnována tomu, abyste se dozvěděli nezbytné informace o kultivaci buněk Ramos. Zde se dozvíte: Jaká je doba zdvojení buněčných linií? Jaké je doporučené médium? Jak se kultivují buňky Ramos?
Klíčové body pro kultivaci buněk Ramos
|
Doba zdvojení: |
Doba zdvojení buněk Ramos je zhruba 20,4 ± 1,5 hodiny. Může se však lišit v závislosti na poskytnutých podmínkách kultivace buněk. |
|
Adherentní nebo v suspenzi: |
Ramosovy buňky rostou v suspenzi. |
|
Hustota buněk: |
Optimální hustota buněk pro buněčnou linii Ramos je 3 x105 buněk/ml . Pro subkultivaci se suspendované buňky odebírají centrifugací. Buňky se doplní čerstvým médiem a opatrně resuspendují. Poté se buňky přelijí do nové baňky v hustotě 3 až 9 x105 buněk/ml . |
|
Růstové médium: |
Ke kultivaci buněk Ramos se používá RPMI 1640 doplněné 10 % fetálního hovězího séra, 2,1 mM stabilního glutaminu a 2,0 g/l NaHCO3. médium by se mělo vyměňovat 2krát týdně. |
|
Růstové podmínky: |
Lidská buněčná linie Burkittova lymfomu (Ramos) se uchovává ve zvlhčeném inkubátoru při 5 % CO2 a teplotě 37 °C. |
|
Skladování: |
Aby se ochránila životaschopnost buněk, uchovávají se zmrazené buňky Ramos při teplotě nižší než -150 °C nebo v plynné fázi tekutého dusíku po delší dobu. |
|
Postup zmrazování a médium: |
Pro buňky Ramos se doporučuje zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF. Používá se pomalý proces zmrazování, který umožňuje postupný pokles teploty o 1 stupeň Celsia za minutu. Toto pomalé zmrazování chrání buňky před jakýmkoli šokem a zvyšuje jejich životaschopnost. |
|
Proces rozmrazování: |
Při rozmrazování se zmrazené buňkyudržují v předehřáté vodní lázni při 37 °C po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane malý ledový chuchvalec. Poté se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Peleta se opět resuspenduje a buňky se dávkují do nové baňky obsahující kultivační médium. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti: |
Laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1 je nezbytná pro udržování Epstein-Barrové virus negativních buněčných kultur Ramos. Úroveň biologické bezpečnosti se však posouvá na 2, pokud se Ramosovy buňky trvale změní na pozitivní na virus Epstein-Barrové. |
Ramos: Výhody a omezení
Stejně jako jiné buněčné linie mají i buňky Ramos výrazné výhody a omezení. V této části se budeme zabývat některými významnými, které mohou významně ovlivnit jejich využití ve výzkumu.
Výhody
- Buněčný model Burkittova lymfomu: Ramosovy buňky byly vyvinuty z pacienta s Burkittovým lymfomem, což z nich činí vhodný buněčný model pro studium lymfoidních malignit
- Snadná kultivace: Ramosovy buňky se snadno kultivují a udržují v laboratoři. Mají jednoduché požadavky a podmínky pro kultivaci buněk
Omezení
- Model in vitro: Ramosovy buňky nemusí zcela reprezentovat genetickou složitost pacientských nádorů, což omezuje jejich použitelnost. Kromě toho výsledky experimentů využívajících buněčnou linii Ramos nemusí zcela odrážet podmínky in vivo, což může vést k problémům při translaci
použití buněk Ramos ve výzkumu
Ramos nabízí slibné aplikace v biomedicíně. Některé z nezbytných výzkumných využití Ramosových buněk zahrnují:
- Biologie lymfomů: Ramosovy buňky se široce používají ke studiu biologie lymfomu. Používají se ke zkoumání genetických a molekulárních faktorů, které jsou základem lymfoidních malignit. Kromě toho vědci pomocí těchto buněk Burkittova lymfomu získávají poznatky o iniciaci, progresi a heterogenitě onemocnění. Zkoumají se také genetické mutace a signální dráhy, což může vést k vývoji přesnějších diagnostických a terapeutických přístupů. Studie provedená v roce 2019 zjistila, že inhibice GCN5 (General control non-depressible 5) histon acetyltransferázy snižuje tumorigenicitu buněk lidského Burkittova lymfomu (Ramos) prostřednictvím narušení signalizace BCR. GCN5 se proto nabízí jako reálný cíl pro vývoj farmakoterapie lymfomů [2].
- Screening a testování léčiv: Buněčná linie Ramos je široce využívána pro účely screeningu a testování léčiv. Výzkumníci hodnotí účinnost potenciálních terapeutických sloučenin při inhibici buněčné proliferace a růstu a při indukci buněčné smrti v lymfomových buňkách. To pomáhá identifikovat slibné kandidáty na léky, a tím usnadňuje vývoj cílené léčby pro pacienty s lymfomem. Výzkum například ukázal, že methanolový extrakt ze slupek, dužiny a semen plodů Annona působí mírně, zatímco chloroformový extrakt vykazuje silné účinky na proliferaci buněk Ramos. Studie tedy navrhla, že plody Annona by se mohly ukázat jako účinné v prevenci a léčbě lymfomů [3].
Ramosovy buňky pro váš výzkum
Publikace s buňkami Ramos
V této části článku je uvedeno několik zajímavých výzkumných publikací s buněčnou linií Ramos:
Kontinuální signalizace CD 79b a CD 19 je nutná pro zdatnost buněk B Burkittova lymfomu
Tento výzkum byl publikován v časopise The EMBO v roce 2018. Studie zjistila, že B buňky Ramos vyžadují pro svou zdatnost a konkurenční růst expresi markerů CD19 a CD79b (BCR signalizační složka Igβ).
Tato studie publikovaná v časopise Neoplasia (2021) využila buňky Ramos a navrhla, že doména kinázy smíšené linie (MLKL) je epigeneticky regulována v buňkách Burkittova lymfomu (Ramos). Jedná se tedy o slibný prognostický marker pro úspěšnost léčby související s nekroptózou.
Fosforylace PBK/TOPK Tyr74 pomocí JAK2 podporuje růst nádoru Burkittova lymfomu
Tento výzkumný článek v časopise Cancer Letters (2022) naznačil, že signální osa JAK2/TOPK/histon H3 hraje klíčovou roli při proliferaci buněčných linií B lymfomu in vitro.
Tento článek byl publikován v roce 2020 v časopise Toxins. Studie navrhla, že léčba verotoxinem-1 indukuje stres endoplazmatického retikula (ER) v buňkách Ramos B. To vede k iniciaci apoptotické signalizace nebo signalizace přežití v lymfomových buněčných liniích.
Silymarin inhibuje expresi genů Toll-like receptoru 8 a apoptózu v nádorové buněčné linii Ramos
Tato studie v časopise Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) uvádí, že přírodní sloučenina silymarin potlačuje expresi TLR8 (Toll-like receptor 8) a apoptózu v buněčné linii Ramos.
Zdroje pro buněčnou linii Ramos: Ramosovy zdroje: protokoly, videa a další zdroje
Níže je uvedeno několik online zdrojů o buňkách Ramos:
- Ramosovy buňky: transfekce buněk Ramos: Tento dokument vám pomůže seznámit se s protokolem pro transfekci buněčné linie Ramos.
Následující odkaz obsahuje protokol o kultivaci buněk Ramos:
- Ramosovy buňky: Tato webová stránka obsahuje základní informace o buněčné linii Ramos. Obsahuje také protokol pro subkultivaci buněk Ramos a manipulaci s proliferujícími a kryokonzervovanými kulturami. Kromě toho jsou k dispozici také informace týkající se médií pro buňky Ramos, doby zdvojení a hustoty buněk.
Klíčové poznatky o Ramosových buňkách: Často kladené otázky
Odkazy
- Kerntke, C.G., Analýza organizace a signální kapacity membránového IgE při jeho interakci s CD19 a CD23 v B lymfocytech. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, A.T., et al., Inhibice GCN5 HAT snižuje přežití buněk lidského Burkitova lymfomu prostřednictvím snížení exprese cílových genů MYC a bráněním signálním drahám BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Phytochemical profile and antioxidation activity of annona fruit and its effect on lymphoma cell proliferation (Fytochemický profil a antioxidační aktivita plodů annony a jejich vliv na proliferaci lymfomových buněk ). Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.