Buňky P19 - Výzkum embryonálního karcinomu s použitím buněk P19
P19 je buněčná linie myšího embryonálního karcinomu. Je široce využívána v biomedicínském výzkumu, zejména pro studium vývojové biologie, biologie kmenových buněk, buněčné diferenciace a screeningu léčiv. Protože buňky P19 mají schopnost diferenciace, mohou být užitečné při zkoumání složitých biologických procesů, jako je tvorba tkání a raný embryonální vývoj. V tomto článku se budeme zabývat základy myších buněk P19.
Obecná charakteristika a původ buněk P19
Než začnete s buněčnou linií pracovat, je nezbytné znát její obecné vlastnosti a původ. V této části se budeme zabývat následujícími informacemi: Co je buněčná linie P19? Jaká je velikost buněk P19? Jaký je původ buněk P19?
- P19 je typ pluripotentních embryonálních karcinomových buněk původně získaných z teratokarcinomu vyvinutého u myši C3H/He. Tuto buněčnou linii poprvé vytvořili v roce 1982 McBurney a Rogers.
- Buňky P19 mohou kontinuálně růst v kultivačním médiu doplněném sérem. Mohou se diferencovat na jiné typy buněk, pokud jsou vystaveny netoxickým léčivům, jako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO) [1].
- Tyto myší karcinomové buňky mají morfologii podobnou epitelu.
- Buněčná linie P19 má euploidní samčí karyotyp (n=40; XY).
Informace o kultivaci buněk P19
Buněčná linie P19 je díky svým jedinečným vlastnostem hojně kultivována ve výzkumných laboratořích. Její kultivace je snadná a snadno zvládnutelná. V této části jsou zmíněny všechny klíčové informace, které potřebujete k udržování a pěstování buněčné kultury P19. Dozvíme se následující: Jaká je doba zdvojení buněk P19? Jak se kultivuje buněčná linie P19? Je P19 adherentní buněčná linie?
Klíčové body pro kultivaci buněk P19
|
Doba zdvojení: |
Doba zdvojení buněčné linie P19 je přibližně 2 až 3 dny. |
|
Adherentní nebo v suspenzi: |
Buněčná linie embryonálního karcinomu P19 je adherentní. |
|
Poměr subkultivace: |
U buněk P19 by měla být prováděna subkulturace každých 48 hodin a měl by být zachován poměr dělení těchto buněk 1:10. Adherentní buňky se promyjí fyziologickým roztokem 1 X fosfátového pufru a inkubují se s akutázou, dokud buňky nedisociují. Buňky se doplní kultivačním médiem a sklidí se centrifugací. Odebrané buňky se opatrně resuspendují a rozdělí do nových baněk. |
|
Kultivační médium: |
Ke kultivaci buněk P19 se používá médium DMEM/Ham's F12 obsahující 5 % fetálního hovězího séra, 3,1 g/l glukózy, 1,6 mM L-glutaminu, 1,0 mM pyruvátu sodného, 15 mM HEPES a 1,2 g/l NaHCO3. |
|
Růstové podmínky: |
Pro pěstování a kultivaci buněčné linie embryonálního karcinomu P19 je nezbytný zvlhčený inkubátor nastavený na 37 °C s přívodem 5 % CO2. |
|
Skladování: |
Zmrazené lahvičky s buňkami P19 by měly být skladovány při teplotě nižší než -150 °C v mrazničce nebo v plynné fázi kapalného dusíku, aby se zachovala dlouhodobá životaschopnost buněk. |
|
Postup zmrazování a médium: |
Pro zmrazení buněk P19 lze použít médium CM-1 nebo CM-ACF s použitím metody pomalého zmrazování, která chrání buňky před šokem a zachovává jejich životaschopnost. |
|
Postup rozmrazování: |
Zmrazené buňky P19 lze rozmrazit ve vodní lázni o teplotě 37 °C rychlým mícháním lahvičky po dobu 40 až 60 sekund. Buňky se doplní čerstvým médiem a odstředí se, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Buněčná paleta se opět resuspenduje a buňky se přelijí do nové baňky pro růst. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti: |
Pro buněčnou linii P19 jsou vyžadovány laboratorní podmínky úrovně biologické bezpečnosti 1. |
Buněčná linie P19: Výhody a nevýhody
V tomto oddíle se budeme zabývat výhodami a nevýhodami buněčné linie P19.
Výhody
- Diferenciační potenciál: Buňky P19 se mohou diferencovat na různé typy buněk, včetně kardiomyocytů, neuronů a mikroglií. K diferenciaci vyžadují netoxické léky, jako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO). Kyselina retinová indukuje vývoj neuronů, mikroglie a astroglie, zatímco DMSO iniciuje vývoj bijících kardiomyocytů a buněk hladkého svalstva. Buňky P19 jsou tedy užitečné při studiu diferenciace buněk a vývojových procesů
- Modelový systém: Buněčná linie pluripotentního embryonálního karcinomu P19 je cenným modelem pro studium raného embryonálního vývoje. Vědci využívají buňky P19 k objasnění buněčných signálních drah a buněčných a molekulárních mechanismů, které se na těchto procesech podílejí
Nevýhody
- Myší původ: P19 je buněčná linie myšího embryonálního karcinomu. Proto se výsledky studií využívajících tyto buňky nemusí plně promítnout do lidské biologie a procesů
Výzkumné využití buněk P19
Buňky P19 mají několik výzkumných aplikací díky své schopnosti diferenciace a významu pro vývojovou biologii a výzkum kmenových buněk. Některé z důležitých výzkumných aplikací buněk embryonálního karcinomu P19 zahrnují:
- Studie diferenciace buněk: Jak je známo, buňky P19 se mohou diferencovat na neurony, mikrogliální buňky, buňky hladkého svalstva a kardiomyocyty; jsou tedy široce využívány ke studiu buněčných diferenciačních procesů. Kromě toho pomáhají při výzkumu nervového a srdečního vývoje a základních mechanismů. Studie provedená v roce 2018 zjistila, že reaktivní formy kyslíku (ROS) usměrňují diferenciaci buněk P19 do specifických buněčných typů a zabraňují indukci jiných [3]. Jiná studie zkoumala proces neurální diferenciace zprostředkovaný kyselinou retinovou a zjistila zapojení signální dráhy PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Vývojová biologie: Buňky P19 jsou neocenitelným modelem pro studium raného embryonálního vývoje. Pomáhají vědcům pochopit složité biologické procesy, jako je tvorba tkání během vývoje embrya. Výzkum využíval buňky P19 a studoval molekulární faktory přispívající ke vzniku defektu komorového septa (VSD). Výsledky odhalily, že dlouhá nekódující RNA SNHG6 přispívá k VSD negativní regulací miRNA-101 a aktivací dráhy Wnt/β-katenin [5].
- Testování léčiv: Pro screening potenciálních kandidátů na léčiva se používá také buněčná linie myšího embryonálního karcinomu P19. Studie použila diferencované buněčné neurony P19 a zkoumala neuroprotektivní inhibiční účinky acetylcholinesterázy syntetického L-Dopa a vodného extraktu ze semen Mucuna pruriens. Výsledky ukázaly, že rostlinný extrakt vykazuje slibné výsledky ve srovnání s L-Dopou [6].
Zakupte si buněčnou linii P19 ještě dnes
Buňky P19: Výzkumné publikace
V této sekci článků se dozvíte o několika zajímavých výzkumných publikacích týkajících se buněk P19.
Tento článek byl publikován v časopise Oncology Reports v roce 2017. Studie navrhuje, že hypofyzární pohlavní hormony řídí adhezi, proliferaci a migraci buněčných linií teratokarcinomu, včetně buněk P19.
Dlouhá nekódující RNA uc. 4 ovlivňuje diferenciaci buněk prostřednictvím signální dráhy TGF-beta
Tato publikace v časopise Experimental & Molecular Medicine (2018) použila buňky P19 a studovala funkci dlouhé nekódující RNA uc.4. Výsledky odhalily, že uc.4 ovlivňuje diferenciaci buněk prostřednictvím modulace signální dráhy TGF beta.
Tento výzkumný článek byl publikován v roce 2018 v časopise Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Studie zjistila, že extrakt z přírodní mozkové tkáně a trojrozměrná buněčná kultura mohou urychlit diferenciaci buněk embryonálního karcinomu P19 na nervové buňky.
Tato studie byla publikována v časopise Journal of Ethnopharmacology v roce 2020. Studie navrhla, že extrakt z listů Cichorium intybus L. může indukovat diferenciaci embryonálních karcinomových buněk P19 na inzulin produkující β buňky pankreatu.
Tento výzkum byl publikován v časopise Molecules (2022). Tato studie zkoumala neuroprotektivní a acetylcholinesterázové inhibiční účinky extraktu ze semen Mucuna pruriens na neurony buněk P19.
Zdroje pro buněčnou linii P19: Protokoly, videa a další zdroje
Níže je uvedeno několik zdrojů o buňkách P19.
- Protokol neuronální diferenciace buněk P19: Tento článek obsahuje protokol neuronální diferenciace buněk P19 a další užitečné informace o diferenciaci buněk P19.
- Transfekce buněk P19: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem transfekce buněk P19.
Následující odkaz obsahuje protokol kultivace buněk P19.
- Buňky P19: Tato webová stránka obsahuje všechny užitečné informace o buněčné linii P19, včetně podmínek její kultivace, médií pro buňky P19, dělení buněk a mnoho dalšího.
Zkoumání buněčné linie P19: Často kladené otázky
Odkazy
- McBurney, M.W., buňky embryonálního karcinomu P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonální karcinomová buněčná linie: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey a G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Výzkum kmenových buněk, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., a další, All-trans-retinoid acid induces differentiation of P19 cells into neurons involved in the PI3K/Akt/GSK3β signaling pathway. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al. dlouhá nekódující RNA SNHG6 přispívá ke vzniku defektu komorového septa prostřednictvím negativní regulace miR-101 a aktivace dráhy Wnt/β-katenin. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al. vodný extrakt ze semen Mucuna pruriens zlepšil neuroprotektivní a acetylcholinesterázové inhibiční účinky ve srovnání se syntetickou L-dopou. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.