Buňky NCI-H1299: Výzkum a klinické důsledky buněk NCI-H1299 pro karcinom plic
NCI-H1299 je imortalizovaná lidská buněčná linie nemalobuněčného karcinomu plic, která se široce používá v imunitní onkologii, při výzkumu rakoviny a objevování léčiv. Vědci navíc tyto buňky využívají ke zkoumání citlivosti na léky, základních signálních drah a molekulárních mechanismů souvisejících s rakovinou plic. Kromě toho se tyto buňky používají ke studiu virových infekcí, jako je SARS-CoV-2.
Obecná charakteristika a původ buněk NCI-H1299
První věc, kterou je třeba o buněčné linii vědět, je její původ a obecné charakteristiky, protože ty vám pomohou navrhnout její použití ve vašem výzkumu. Tato část článku vám pomůže dozvědět se některé důležité informace o původu a vlastnostech NCI-H1299. Například co jsou buňky NCI-H1299 pro rakovinu plic? Jaký typ buňky je NCI-H1299? Jaká je velikost buněk NCI-H1299? Jaký je rozdíl mezi buňkami A549 a NCI-H1299?
- Buněčná linie NCI-H1299 pochází z metastázy v lymfatických uzlinách plic 43letého bělošského pacienta s rakovinou.
- Tyto buňky mají homozygotní částečnou deleci genu p53; neexprimují tedy protein p53. Nedostatečná exprese proteinu p53 přispívá k proliferační tendenci buněk plicního karcinomu NCI-H1299.
- Kromě p53 mají tyto imortalizované buňky údajně i mutaci NCI-H1299 KRAS, která je zodpovědná za jejich růst, proliferaci, migraci a invazivní vlastnosti.
- Karyotyp NCI-H1299 je téměř diploidní.
- Buňky NCI-H1299 mají morfologii podobnou epiteliálním buňkám.
- Tyto buňky jsou zploštělé a mají tloušťku menší než 5 µm.
NCI-H1299 a A549
NCI-H1299 a A549 jsou buněčné linie nemalého karcinomu plic. Buňky NCI-H1299 jsou ve srovnání s buňkami A549 agresivnější a citlivější. Obě mají relativně podobné mutace, například KRAS. Na rozdíl od buněk NCI-H1299 však buňky A549 exprimují gen P53.
Kultivační informace
Udržování kultury buněčné linie není snadné, dokud o ní neznáte všechny klíčové informace, včetně: Jaká je doba zdvojení NCI-H1299? Jaká je hustota výsevu NCI-H1299? Jaká jsou buněčná média NCI-H1299? Jak se kultivují buněčné linie NCI-H1299? Tato část vám pomůže dozvědět se odpovědi na všechny tyto otázky týkající se kultivace buněk NCI-H1299.
Klíčové body pro kultivaci buněk NCI-H1299
|
Doba zdvojení: |
Doba zdvojení buněk NCI-H1299 se pohybuje v rozmezí 22-30 hodin. |
|
Adherentní nebo v suspenzi: |
NCI-H1299 je adherentní buněčná linie. |
|
Poměr subkultivace: |
NCI-H1299 se subkultivuje v doporučeném poměru 1:3 až 1:6. Pro nasazení se adherentní buňky promyjí 1x PBS a inkubují s pasážovacím roztokem Accutase po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Oddělené buňky se přidají s čerstvým kultivačním médiem a odstředí se. Buněčná peleta se poté resuspenduje a buňky se přelijí do nových baněk obsahujících růstové médium. |
|
Růstové médium: |
RPM1 1640 je ideálním médiem pro buňky NCI-H1299. Je doplněno 10% fetálním hovězím sérem, 4500 mg/l glukózy, 2,0 mM L-glutaminu, 1 mM pyruvátu sodného, 1500 mg/l NaHCO3 a 10 mM HEPES. Média by se měla obnovovat každé 2 až 3 týdny. |
|
Růstové podmínky: |
Buněčné kultury karcinomu plic NCI-H1299 se udržují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s 5% přívodem CO2. |
|
Skladování: |
Buněčnou linii NCI-H1299 lze dlouhodobě skladovat v plynné fázi tekutého dusíku nebo v mrazničkách s velmi nízkou teplotou při teplotě nižší než -150 °C. |
|
Proces zmrazování a médium: |
CM-1 nebo CM-ACF jsou média pro zmrazování buněk NCI-H1299. Buňky se zmrazují pomalým zmrazovacím procesem, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 stupeň za minutu, aby byla chráněna životaschopnost buněk. |
|
Proces rozmrazování: |
Zmrazené buňky NCI-H1299 se rychle míchají v předehřáté vodní lázni při teplotě 37 stupňů Celsia po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane malý kousek ledu. Rozmražené buňky se přidají s čerstvým médiem a mohou být přímo kultivovány v nových baňkách nebo odstředěny. V prvním případě je třeba médium vyměnit po 24 hodinách inkubace. Odstředění pomáhá odstranit prvky mrznoucího média. Poté se sklizené buňky resuspendují v čerstvém médiu a dávkují se do nové baňky ke kultivaci. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti: |
Pro práci s buněčnou kulturou NCI-H1299 je nutná laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1. |
Zakoupit buněčnou linii NCI-H1299: vysoce kvalitní výzkumné nástroje pro zkoumání biologie rakoviny plic
Výhody a nevýhody buněk NCI-H1299
Stejně jako jiné lidské nádorové buněčné linie má i NCI-H1299 některé charakteristické vlastnosti spojené se specifickými výhodami a nevýhodami. Zde jsme shrnuli několik významných z nich.
Výhody
Hlavní výhody buněčné linie nemalobuněčného karcinomu plic NCI-H1299 jsou následující:
-
Model rakoviny plic in vitro
Buněčné linie NCI-H1299 byly vyvinuty z metastáz karcinomu plic v lymfatických uzlinách, a proto mají relativně podobné vlastnosti. Proto mohou tyto buňky sloužit jako in vitro model pro zkoumání biologie karcinomu plic, buněčných a molekulárních mechanismů a pro screening a testování potenciálních terapeutik.
-
Snadná kultivace
Buňky NCI-H1299 se snadno kultivují a udržují ve výzkumné laboratoři. Neexistují žádné náročné požadavky na kultivaci buněk a postupy.
-
NCI-H1299 P53 a NCI-H1299 KRAS mutace
Buňky NCI-H1299 postrádají expresi genu p53, což umožňuje buňkám intenzivně se množit. Navíc mají mutaci KRAS, která přispívá k růstu, proliferaci, invazi a migraci buněk. Vzhledem k těmto skutečnostem vědci využívají buňky H1299 ke zkoumání molekulárních mechanismů souvisejících s mutacemi KRAS a P53.
Nevýhody
Nevýhody buněk NCI-H1299 jsou následující:
-
Tkáňová specifičnost
Buňky NCI-H1299 pocházejí z plicní tkáně. Její použitelnost je proto většinou omezena na výzkum karcinomu plic. Nemusí plně reprezentovat heterogenitu a obecné charakteristiky jiných typů rakoviny.
Výzkumné aplikace buněk NCI-H1299
Buněčná linie NCI-H1299 se hojně používá ve výzkumu rakoviny plic. Zde je uvedeno několik slibných aplikací této buněčné linie.
- Biologie rakoviny: Buňky NCI-H1299 slouží jako skvělý výzkumný nástroj pro zkoumání vývoje rakoviny, její progrese a souvisejících buněčných a molekulárních mechanismů. Tyto buňky jsou vybaveny určitými mutacemi, které výzkumníkům umožňují zkoumat související chování nádorových buněk, signální dráhy a profily genové exprese. Několik studií použilo buněčnou linii nemalobuněčného karcinomu plic NCI-H1299 ke studiu biologie rakoviny plic. Například studie provedená v roce 2018 zkoumala signální dráhu zapojenou do apoptózy buněk karcinomu plic s využitím buněk NCI-H1299. Vědci zjistili, že dráha PI3K/AKT přispívá k proliferaci buněk a její inhibice může způsobit smrt nádorových buněk [1]. Stejně tak jiný výzkum zkoumal mechanismy podílející se na epiteliálně-mezenchymálním přechodu (EMT) buněk NCI-H1299. Tato studie navrhla, že extracelulární protein SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) přispívá k EMT a migraci NCI-H1299, a tím podporuje nádorové bujení buněk - protein SPARC působí jako mediátor signalizace TGF-β1 [2].
- Objevování a screening léčiv: NCI-H1299, buněčná linie lidského karcinomu plic, se hojně využívá k hodnocení toxicity a účinnosti potenciálních léčiv. Kromě toho ji vědci používají ke zkoumání mechanismu účinku protinádorových léčiv. Studie rovněž využívají tyto buňky k identifikaci možných cílů a mechanismů rezistence vůči léčivům. Například výzkum prováděný Xiao-Yun Shenem a jeho kolegy zkoumal protinádorový potenciál přírodní sloučeniny bruceinu D (BD). Výsledky ukázaly, že BD významně brání proliferaci, invazi a migraci buněk NCI-H1299. Lze ji proto považovat za potenciální adjuvantní terapii při léčbě nemalobuněčného karcinomu plic [3]. Podobně studie hodnotila cytotoxické účinky xanthohumolu samotného a v kombinaci s chemoterapeutikem cisplatinou na buňky karcinomu plic NCI-H1299 [4].
Výzkumné publikace s buňkami NCI-H1299
Některé významné a nejcitovanější výzkumné publikace o buněčné linii plicního karcinomu NCI-H1299 naleznete zde.
Tento článek byl publikován v časopise Human and Experimental Toxicology (2021). Studie navrhuje, že indol-3-karbinol indukuje apoptózu u buněk H1299 prostřednictvím zvýšení hladiny reaktivních forem kyslíku (ROS).
Tento výzkum byl publikován v roce 2018 v časopise Cellular Physiology and Biochemistry. Výsledky výzkumu odhalily, že kombinace kyseliny kávové a paklitaxelu má synergický protinádorový účinek u buněčné linie nemalobuněčného karcinomu plic NCI-H1299.
Tento výzkumný článek byl publikován v časopise Molecular Medicine Reports (2018). Studie hodnotila protinádorový účinek tubeimosidu-1, triterpenoidního saponinu, a základní mechanismy u buněčné linie NCI-H1299.
Pristimerin indukuje apoptózu a inhibuje proliferaci a migraci u buněk karcinomu plic H1299
Tento článek publikovaný v časopise Journal of Cancer (2020) navrhl, že pristimerin, přírodní sloučenina, potlačuje proliferaci a migraci buněk NCI-H1299.
Mechanismus regulace genu VIPR1 v buňkách lidského adenokarcinomu plic H1299
Tato studie v časopise Medical Oncology (2019) zkoumala potenciální účinky nadměrné exprese genu VIPR1 na buněčnou linii adenokarcinomu NCI-H1299.
Zdroje pro buněčnou linii NCI-H1299: H1299: protokoly, videa a další zdroje
Zde je několik online zdrojů, které představují buňky NCI-H1299.
- Transfekce NCI-H1299: Toto video vysvětluje protokol pro tranzientní transfekci buněčných linií NCI-H1299.
- Subkultivace adherentní buněčné linie: Toto video vám pomůže naučit se obecný postup subkultivace adherentní buněčné linie.
Následující odkaz obsahuje informace o kultivaci buněk NCI-H1299.
- Buněčná linie NCI-H1299: Tento odkaz vám pomůže získat informace o protokolu pasážování a transfekce buněk NCI-H1299.
Často kladené otázky o buněčné linii NCI-H1299
Odkazy
- Gu, J. a kol., Studie apoptózy indukované EGCG u buněk karcinomu plic inhibicí signální dráhy PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC působí jako mediátor TGF-β1 při podpoře epiteliálně-mezenchymálního přechodu u buněk karcinomu plic A549 a H1299. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al. studie mechanismu působení bruceinu D při léčbě buněk nemalobuněčného karcinomu plic H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxické účinky xanthohumolu a jeho kombinace s cisplatinou na buňky lidské metastatické rakoviny plic H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.