Buňky AGS – využití buněk AGS (lidský adenokarcinom žaludku) ve výzkumu rakoviny
Buňky AGS představují buněčnou linii lidského adenokarcinomu žaludku, která je široce využívána v biomedicínském výzkumu. Zejména se používá ke studiu biologie rakoviny žaludku, včetně růstu, vývoje a progrese nádoru a terapeutických zásahů. Kromě toho se používá k výzkumu interakcí mezi hostitelem a patogenem.
- Růstové médium
- K kultivaci buněk AGS se používá médium DMEM obsahující 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení buněk AGS se pohybuje mezi 24 a 48 hodinami.
- Typ růstu
- Buňky AGS jsou adhezivní. Rostou do monovrstev.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-2
- K dispozici u
- Cytion — Objednat AGS
Obecné charakteristiky a původ buněk AGS
Než začnete s buněčnou linií pracovat, je nutné znát její původ a obecné charakteristiky. Tato část se bude zabývat následujícími tématy: Co jsou buňky AGS? Jaký je původ buněk AGS? Jaká je morfologie buněčné linie AGS?
- Buněčná linie AGS byla odvozena z žaludeční tkáně 54leté ženy kavkazského původu s adenokarcinomem žaludku. Byla izolována v roce 1979 [1].
- Buňky AGS mají epiteliální morfologii.
- Žaludeční epiteliální buňky AGS jsou hyperdiploidní. Modální počet chromozomů u buněk AGS je 49, což se vyskytuje u téměř 60 % buněk. Polyploidie se vyskytuje také u přibližně 3,6 % buněk.
Informace o kultivaci buněčné linie AGS
Pro správnou manipulaci a správu buněčné linie musíte znát základní pojmy týkající se kultivace. Zejména byste se měli naučit: Jaká je doba zdvojnásobení buněk AGS? Jaké je médium pro buňky AGS? Jak se provádí subkultivace buněk AGS? Která média pro zmrazení se používají pro žaludeční epiteliální buňky AGS?
Klíčové body pro kultivaci buněk AGS
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk AGS se pohybuje mezi 24 a 48 hodinami.
Adherentní nebo v suspenzi:
Buňky AGS jsou adhezivní. Rostou do monovrstev.
Hustota výsevu:
Buňky AGS se vysévají v hustotě 1 x 104 buněk/cm2. Při této hustotě vytvoří buňky konfluentní monovrstvu za 3 až 5 dní. Po odstranění starého média se buňky propláchnou 1 x PBS a inkubují se s disociačním roztokem Accutase. Odloučené buňky se resuspendují v kultivačním médiu a odstředí. Peleta buněk se znovu resuspenduje a po spočítání buněk AGS se rozlije do nové baňky pro růst.
Růstové médium:
K kultivaci buněk AGS se používá médium DMEM obsahující 10 % FBS, 4 mM L-glutamin, 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně.
Podmínky růstu:
Buňky AGS se uchovávají ve zvlhčeném inkubátoru (při teplotě 37 °C) s přívodem 5 % CO2.
Skladování:
Zmrazené buňky AGS se uchovávají v elektrických mrazničkách při teplotě pod -150 °C nebo po delší dobu v plynné fázi kapalného dusíku.
Proces zmrazování a médium:
K zmrazení buněk AGS se používá médium CM-1 nebo CM-ACF. Zmrazení buněk se provádí pomalým procesem, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu a chrání životaschopnost buněk.
Proces rozmrazování:
Zmrazené žaludeční epitelové buňky se rychle promíchávají ve vodní lázni o teplotě 37 °C po dobu 40 až 60 sekund. Rozmrazené buňky se resuspendují v čerstvém kultivačním médiu a přelijí do nových lahví pro růst. Po 24hodinové inkubaci se médium obnoví, aby se odstranily složky mrazicího média. Naopak rozmrazené buňky se odstředí a složky mrazicího média se odstraní. Poté se sklizené buňky znovu resuspendují a rozdělí do baňky obsahující kultivační médium.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro kultivaci buněk AGS je nezbytné laboratorní prostředí s úrovní biologické bezpečnosti 2.
Buněčná linie AGS: Výhody a omezení
Tato část článku objasní některé z klíčových výhod a omezení spojených s buňkami AGS.
Výhody
Hlavní výhody žaludečních epiteliálních buněk AGS jsou:
Snadná kultivace
Buněčná linie AGS z karcinomu žaludku se snadno udržuje v laboratořích pro buněčné kultury. Nemá žádné složité a náročné požadavky na kultivaci. Navíc vykazuje dobré růstové vlastnosti, což z ní činí ideální volbu pro studium biologie rakoviny žaludku.
Relevance pro rakovinu žaludku
Buňky AGS byly odvozeny z lidského adenokarcinomu žaludku, díky čemuž jsou široce využívány ke studiu biologie karcinomu žaludku a terapeutických zásahů.
Omezení
Omezení spojená s buněčnou linií AGS jsou:
In vitro buněčný model
Buňky AGS se kultivují v biomedicínských výzkumných laboratořích za umělých podmínek. Proto nemusí plně replikovat mikroprostředí rakoviny žaludku in vivo a další buněčné a molekulární interakce.
Aplikace buněk AGS
Buňky AGS se specificky používají ke studiu biologie rakoviny žaludku. Mají mnoho dalších slibných aplikací v biomedicínské oblasti. Mezi zajímavé výzkumné aplikace buněk AGS patří:
- Studium rakoviny žaludku: Buňky AGS jsou vynikajícím výzkumným nástrojem pro zkoumání buněčných a molekulárních mechanismů, které jsou základem růstu, metastázování a invaze rakoviny žaludku. Vědci také využívají žaludeční epiteliální buňky AGS ke studiu různých buněčných procesů, genetických mutací a signálních drah při vývoji rakoviny žaludku. Studie publikovaná v časopise Oncology Reports (2019) zjistila, že mikroRNA-183-5p.1 podporuje proliferaci, migraci a invazi nádorových buněk tím, že inhibuje signální kaskádu Bcl 2/P53. K dosažení těchto účinků navíc také downreguluje gen TPM1. Proto se jak mikroRNA, tak TPM1 navrhují jako účinné molekulární cíle pro vývoj cílených terapií proti rakovině žaludku [2].
- Screening léčiv: Buňky AGS se běžně používají ke screeningu nových a účinných léků proti rakovině žaludku. Vědci pomocí buněčné linie AGS hodnotí cytotoxicitu a účinnost potenciálních léčiv. Byly také provedeny studie zaměřené na identifikaci nových molekulárních cílů a vývoj nových cílených terapií pro boj s karcinomy žaludku. Výzkum provedený v roce 2021 využil buňky rakoviny žaludku AGS a studoval terapeutický účinek léku paklitaxel. Výsledky odhalily, že paklitaxel indukuje mitotickou katastrofu, což je integrální mechanismus apoptózy neboli buněčné smrti v buňkách AGS. Kromě toho také podporoval autofagii v buňkách rakoviny žaludku [3].
- Interakce mezi hostitelem a patogenem: Buněčná linie AGS se také zabývá studiem interakcí mezi hostitelem a patogenem. To pomáhá výzkumníkům porozumět buněčným mechanismům a reakcím zapojeným do infekce. Například studie provedená v roce 2020 zjistila, že malé nekódující RNA přítomné ve vezikulech vnější membrány Helicobacter pylori snižují sekreci interleukinu 8 v lidských buňkách AGS [4].
5. Vědecké publikace o buněčné linii AGS
Tato část článku se bude zabývat několika zajímavými a nejčastěji citovanými výzkumnými publikacemi, které se zabývají buňkami AGS.
Tato studie v časopise Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) navrhla, že salidrosid, přírodní sloučenina, indukuje ochrannou autofagii a buněčnou smrt v epiteliálních buňkách AGS žaludku prostřednictvím modulace signální dráhy PI3K/AKT/mTOR.
Tato studie byla publikována v časopise Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Zkoumala synergické protinádorové účinky polysacharidu astragalu a léčiva apatinibu v buňkách AGS. Výsledky studie odhalily, že astragalus zesiluje protinádorové účinky apatinibu prostřednictvím potlačení signální dráhy AKT.
Tento výzkum v časopise Journal of Ethnopharmacology (2018) navrhl, že curcuzedoalid, přírodní sloučenina z rostliny Curcuma zedoaria Roscoe, přispívá k jejímu cytotoxickému potenciálu proti buňkám AGS.
Nadměrná exprese FOXA1 inhibuje buněčnou proliferaci a EMT buněk AGS lidského karcinomu žaludku
Tato publikace v časopise Gene (2018) navrhuje, že zvýšená exprese FOXA1 potlačuje proliferaci buněk adenokarcinomu žaludku AGS, epiteliálně-mezenchymální přechod (EMT) a invazi.
sncRNA zabalené do vezikul vnější membrány Helicobacter pylori tlumí sekreci IL-8 v lidských buňkách
Tento výzkumný článek byl publikován v časopise International Journal of Medical Microbiology v roce 2020. V této studii byly použity buňky AGS ke studiu interakcí mezi hostitelem a patogenem. Výsledky odhalily, že Helicobacter pylori obsahuje ve svých vezikulech vnější membrány některé nekódující RNA, které ovlivňují hladiny IL-8 v buňkách AGS.
Zdroje pro buněčnou linii AGS: protokoly, videa a další
Níže uvádíme několik zdrojů týkajících se buněk AGS.
- Protokol transfekce buněk AGS: Toto video je podrobným návodem k naučení se protokolu transfekce pro žaludeční epiteliální buňky AGS.
Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk AGS.
- Protokol kultivace buněk AGS: Tato webová stránka obsahuje užitečné informace o médiích pro buňky AGS a protokolech kultivace buněk. Stručně řečeno, poskytuje protokol pro subkultivaci žaludečních epiteliálních buněk AGS a manipulaci s proliferujícími a kryokonzervovanými kulturami AGS.
- Subkultivace buněk AGS: Tato stránka podrobně vysvětluje postup subkultivace buněk AGS.
Reference
- Phuc, B.H., et al., Srovnávací genomika dvou vietnamských kmenů Helicobacter pylori, CHC155 od pacienta s rakovinou žaludku mimo kardii a VN1291 od pacienta s vředem dvanácterníku. Scientific Reports, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 podporuje migraci a invazi buněk AGS rakoviny žaludku tím, že se zaměřuje na TPM1. Oprava v /10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371–2381.
- Khing, T.M., et al., Vliv paklitaxelu na apoptózu, autofagii a mitotickou katastrofu v buňkách AGS. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA zabalené do vezikul vnější membrány Helicobacter pylori tlumí sekreci IL-8 v lidských buňkách. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.