Buněčná linie Neuro-2a
Neuro-2a je myší nervová buněčná linie široce používaná ve výzkumu neurověd. Tyto buňky se využívají především ke studiu vývoje nervové soustavy, diferenciace, neurotoxicity, buněčných signálních drah a růstu axonů. Kromě toho se používají také pro vývoj a screening léčiv.
Tento článek se zaměřuje na důležité aspekty neuroblastomových buněk Neuro-2a, které by vám mohly pomoci před zahájením práce s nimi. Bude se zabývat především:
- Obecné vlastnosti a původ buněk Neuro-2a
- Informace o kultivaci buněčné linie Neuro-2a
- Výhody a nevýhody buněčné linie Neuro-2a
- Výzkumné aplikace buněčné linie Neuro-2a
- Výzkumné publikace zabývající se buňkami Neuro-2a
- Zdroje pro buňky Neuro-2a: protokoly, videa a další
Obecné vlastnosti a původ buněk Neuro-2a
Tato část článku se bude zabývat pozadím a základními charakteristikami buněčné linie Neuro-2a, které je nezbytné znát před zahájením práce s ní. Dozvíte se zde: Co je buněčná linie Neuro-2a? Jaký je původ buněčné linie Neuro-2a? Co je to diferenciace buněk Neuro-2a? Jaká je velikost buňky Neuro-2a? Jaká je morfologie buněk Neuro-2a?
- Buňky Neuro-2a pocházejí ze spontánního nádoru (neuroblastomu) u myši albína (kmen A). Buněčnou linii založili R.J. Klebe a F.H. Ruddle.
- Buňky neuroblastomu Neuro-2a vykazují morfologii neuronálních a améboidních kmenových buněk.
- Velikost buněk Neuro-2a je 12 mikrometrů na výšku [1].
- Počet chromozomů buněk Neuro-2a se může pohybovat v rozmezí od 59 do 193, přičemž modální počet je 95. Karyotyp těchto neuroblastomových buněk je nestabilní v rozmezí 94 až 98 chromozomů.
Informace o kultivaci buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a se hojně používají ve výzkumných laboratořích v oblasti neurovědy. Před zahájením práce s těmito buňkami byste se měli seznámit s níže uvedenými nezbytnými informacemi o kultivaci buněk. To vám může usnadnit práci. Dozvíte se: Co je to Neuro-2a kultivační médium? Jak se kultivují buňky Neuro-2a? Jaká je doba zdvojnásobení buněk Neuro-2a? Jaká je výsevní hustota buněk Neuro-2a ? Jaký je protokol pro kultivaci buněk Neuro-2a? Jaké je kultivační médium pro buňky Neuro-2a?
Klíčové body pro kultivaci buněk Neuro-2a
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk Neuro-2a je přibližně 70 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
Neuro-2a je adhezivní buněčná linie.
Hustota výsevu:
Optimalizovaná hustota výsevu pro buněčnou linii Neuro-2a je 1 × 10⁴ buněk/cm². Před výsevem se buňky promyjí fosfátovým pufrem bez hořčíku a vápníku (1×). Následně se přidá pasážovací roztok (Accutase) a buňky se inkubují po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Po disociaci buněk se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí. Získaný buněčný pelet se opatrně resuspenduje a buňky se přelijí do kultivační nádoby pro růst.
Růstové médium:
Pro kultivaci buněk Neuro-2a se používá EMEM. Obsahuje 10 % FBS, 2 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO₃, EBSS, 1 mM pyruvát sodný a NEAA pro ideální růst buněk. Média by se měla vyměňovat 1 až 2krát týdně.
Podmínky růstu:
Kultury Neuro-2a se udržují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C, který je napojen na přívod 5 % CO₂.
Skladování:
Buňky by měly být dlouhodobě skladovány při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku s ultranízkou teplotou nebo v plynné fázi kapalného dusíku.
Proces zmrazování a médium:
K zmrazení buněk Neuro-2a se používají média CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují pomalým procesem, při kterém teplota klesá pouze o 1 °C za minutu. Tím se buňky chrání před teplotním šokem a zachovává se jejich životaschopnost.
Proces rozmrazování:
K rozmrazení zmrazených kultur se lahvička umístí na 40 až 60 sekund do vodní lázně o teplotě 37 °C, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. Poté se přidá kultivační médium a buňky se odstředí. Tento krok pomáhá odstranit složky zmrazovacího média. Buněčný pelet se následně resuspenduje a buňky se přenesou do nové baňky naplněné kultivačním médiem. Poté se buňky umístí do inkubátoru při teplotě 37 °C na minimálně 24 hodin.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro manipulaci s kulturami Neuro-2a a jejich udržování je povinné používat laboratoře s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a mají některé výhody a nevýhody, které je odlišují od jiných neuronálních buněčných linií. Zde jsou uvedeny některé významné klady a zápory těchto buněk.
Výhody
Výhody myší neuroblastomové buněčné linie Neuro-2a jsou:
-
Snadná kultivace:
Buněčná linie Neuro-2a nevyžaduje složité ani komplikované postupy při kultivaci buněk. Její kultivace a údržba ve výzkumných laboratořích je snadná.
-
In vitro model neuronálních buněk:
Neuro-2a je praktický model neuronálních buněk, který je široce využíván výzkumníky ve studiích vývoje a diferenciace neuronů.
Nevýhody
Nevýhody buněk Neuro-2a jsou:
-
Myší původ:
Neuro-2a pochází z myší, a proto by výzkumníci měli postupovat opatrně při extrapolaci výsledků studií založených na myších na lidské zdraví a nemoci, jelikož se biologie myší a lidí může výrazně lišit.
Výzkumné aplikace buněčné linie Neuro-2a
Buňky Neuro-2a nabízejí mnoho možností využití v oblasti neurovědeckého výzkumu. Zde se budeme zabývat několika slibnými způsoby využití této buněčné linie:
- Neurální vývoj: Neuro-2a je in vitro model neuronálních buněk, který se široce používá ke studiu neurálního vývoje a souvisejících procesů, jako je diferenciace, růst axonů a tvorba synapsí. Studie provedená v roce 2020 využila buňky Neuro-2a k prozkoumání role mikroRNA-124 v diferenciaci neuronálních buněk indukované kyselinou retinovou [2]. Další studie zkoumala expresi receptoru kyseliny retinové gama (RARG) a miRNA-124 v buněčné linii neuroblastomu (N2A). Tato studie navrhla, že RARG je cílem miR-124 a potlačuje růst neuritů [3].
- Neurotoxicita: Buňky Neuro-2a se také používají k hodnocení toxických účinků léčiv, chemikálií nebo faktorů životního prostředí na nervové buňky. Například studie provedená Zhihongem Yinem a spolupracovníky zkoumala neurotoxicitu bisfenolu A (BPA), chemické látky přítomné v životním prostředí, s využitím buněk Neuro-2a. Autoři zjistili, že BPA potlačuje diferenciaci a proliferaci neuronálních buněk narušením jejich buněčné a synaptické integrity [4].
- Screening léčiv: Buňky Neuro-2a se rovněž používají k hodnocení terapeutických účinků řady léčiv, sloučenin a přírodních produktů. Například v jedné studii byly buňky Neuro-2a použity ke zkoumání antioxidačního potenciálu extraktu z rostliny Ginkgo biloba. Výzkum navíc naznačil, že tento extrakt způsobuje snížení agregace Aβ a může představovat potenciální léčbu Alzheimerovy choroby [5].
5. Vědecké publikace zabývající se buňkami Neuro-2a
Zde uvádíme několik zajímavých výzkumných článků zabývajících se buněčnou linií Neuro-2a.
Tato studie publikovaná v časopise Journal of Natural Medicines v roce 2018 zkoumala terapeutické účinky alkamidů izolovaných z bílého pepře (P. nigrum) na neuronální buňky Neuro-2a.
Downregulace Nkx2.1 se podílí na mozkových abnormalitách vyvolaných nadbytkem kyseliny retinové
Tento výzkum publikovaný v časopise Acta Biochimica et Biophysica Sinica v roce 2020 navrhl, že gen Nkx2.1 hraje důležitou roli ve vývoji mozku myší prostřednictvím regulace signální kaskády Shh.
Tento článek, publikovaný v časopise Toxicology and Industrial Health (2023), naznačuje, že environmentální chemická látka bisfenol A vyvolává neurotoxicitu v buňkách Neuro-2a a narušuje jejich synaptickou a cytoskeletální funkci.
Tento článek v časopise „Pharmaceuticals“ (2021) navrhuje, že léčivo hexarelin moduluje kaskády PI3K/AKT a MAPK v buňkách neuroblastomu (Neuro-2a) a inhibuje apoptózu buněk Neuro-2a vyvolanou peroxidem vodíku.
Tento výzkumný článek v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) uvádí, že ovocný extrakt z Emblica officinalis potlačuje neurozánět v buňkách Neuro-2a, a může tak být prospěšný při neurozánětlivých onemocněních.
Zdroje informací o buňkách Neuro-2a: protokoly, videa a další
Níže jsou uvedeny online zdroje týkající se buněk Neuro-2a. Zahrnují protokol pro kultivaci a transfekci buněk Neuro-2a.
- Protokol transfekce buněk Neuro-2a: Buňky Neuro-2a jsou vhodným hostitelem pro transfekci. Tento odkaz vás provede protokolem transfekce této buněčné linie. Účinnost transfekce buněk Neuro-2a se liší v závislosti na použitém činidle.
Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk Neuro-2a.
- Protokol pro kultivaci buněk Neuro-2a: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem pro subkultivaci buněk Neuro-2a.
- Buňky Neuro-2a: Tato webová stránka obsahuje komplexní informace o kultivačních médiích pro buňky Neuro-2a, hustotě výsevu a protokolech pro subkultivaci a manipulaci s kryokonzervovanými a proliferativními kulturami.
Reference
- Lulevich, V., et al., Mechanika jednotlivých buněk poskytuje citlivý a kvantitativní prostředek pro zkoumání interakcí mezi peptidem amyloid-beta a neuronálními buňkami. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872–7.
- You, Q., et al., Role miR-124 v regulaci diferenciace buněk Neuro-2A indukované kyselinou retinovou. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X., a kol., Receptor kyseliny retinové gama je cílem mikroRNA-124 a inhibuje růst neuritů. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z., a kol., Expozice bisfenolu A vyvolala neurotoxicitu a souvisela se synapsemi a cytoskeletem v buňkách Neuro-2a. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L., et al., Extrakt z ginkgo biloba (EGb) inhibuje oxidační stres v buňkách Neuro-2A s nadměrnou expresí APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.