Клетъчна линия Neuro-2a
Neuro-2a е клетъчна линия от мишки, широко използвана в неврологичните изследвания. Тези клетки се използват главно за изучаване на неврологичното развитие, диференциацията, невротоксичността, клетъчните сигнални пътища и растежа на аксоните. Освен това се използват за разработване и скрининг на лекарства.
Настоящата статия се фокусира върху важни аспекти на невробластомните клетки Neuro-2a, които биха могли да ви бъдат от полза, преди да започнете работа с тях. Тя ще обхване предимно:
- Общи характеристики и произход на клетките Neuro-2a
- Информация за култивирането на клетъчната линия Neuro-2a
- Предимства и недостатъци на клетъчната линия Neuro-2a
- Приложения на клетъчната линия Neuro-2a в научните изследвания
- Научни публикации, посветени на клетките Neuro-2a
- Ресурси за клетки Neuro-2a: протоколи, видеоклипове и др.
Общи характеристики и произход на клетките Neuro-2a
В тази част на статията ще бъдат разгледани историята и основните характеристики на клетъчната линия Neuro-2a, които е важно да се знаят, преди да започнете работа с нея. Тук ще научите: Какво представлява клетъчната линия Neuro-2a? Какъв е произходът на клетъчната линия Neuro-2a? Какво представлява диференциацията на клетките Neuro-2a? Какъв е размерът на една клетка Neuro-2a? Каква е морфологията на клетките Neuro-2a?
- Клетките Neuro-2a произхождат от спонтанен тумор (невробластома) на мишка албинос (щам А). Клетъчната линия е създадена от Р.Дж. Клебе и Ф.Х. Ръдъл.
- Клетките от невробластома Neuro-2a притежават морфология на невронни и амебоидни стволови клетки.
- Размерът на Neuro-2a клетките е 12 микрометра на височина [1].
- Броят на хромозомите в клетките Neuro-2a може да варира от 59 до 193, като модалният брой е 95. Кариотипът на тези невробластомни клетки е нестабилен в диапазона от 94 до 98 хромозоми.
Информация за култивирането на клетъчната линия Neuro-2a
Клетките Neuro-2a се използват широко в изследователските лаборатории по невронауки. Преди да започнете работа с тези клетки, трябва да се запознаете с изброената по-долу задължителна информация за култивирането им. Това може да ви улесни в работата. Ще научите: Какво представлява средата за култивиране на клетки Neuro-2a? Как се култивират клетките Neuro-2a? Какъв е времето за удвояване на клетките Neuro-2a? Каква е плътността на засяване на Neuro-2a ? Какъв е протоколът за култивиране на клетки Neuro-2a? Каква е средата за култивиране на клетки Neuro-2a?
Ключови моменти при култивирането на Neuro-2a клетки
Време за удвояване:
Времето за удвояване на клетките Neuro-2a е приблизително 70 часа.
Адхезивни или в суспензия:
Neuro-2a е адхезивна клетъчна линия.
Плътност на засяване:
Оптимизираната плътност на засяване за клетъчната линия Neuro-2a е 1 x 10⁴ клетки/cm². За засяването клетките се промиват с фосфатен буферен разтвор без магнезий и калций (1x). След това се добавя разтвор за пасажиране (Accutase) и клетките се инкубират в продължение на 8 до 10 минути при стайна температура. След дисоциация на клетките се добавя свежа среда и клетките се центрофугират. Събраният клетъчен пелетен остатък се ресуспендира внимателно и клетките се прехвърлят в културален съд за отглеждане.
Среда за растеж:
За култивиране на Neuro-2a клетки се използва EMEM. Тя съдържа 10% FBS, 2 mM L-глутамин, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM натриев пируват и NEAA за идеален клетъчен растеж. Средата трябва да се сменя 1 до 2 пъти седмично.
Условия за отглеждане:
Културите от Neuro-2a се поддържат в овлажнен инкубатор при 37 °C, свързан с източник на 5% CO₂.
Съхранение:
Клетките трябва да се съхраняват при температура под -150 °C в електрически фризер с ултраниска температура или във фазата на пари на течен азот за дългосрочно съхранение.
Процес на замразяване и среда:
За замразяването на клетките Neuro-2a се използват среди CM-1 или CM-ACF. Клетките се замразяват чрез процес на бавно замразяване, при който температурата спада само с 1 °C на минута. Това предпазва клетките от шок и запазва тяхната жизнеспособност.
Процес на размразяване:
За размразяване на замразените култури флаконът се поставя във водна баня при 37 °C за 40 до 60 секунди, докато остане само малък леден буцик. След това се добавя културална среда и клетките се центрофугират. Тази стъпка спомага за отстраняването на компонентите на замразяващата среда. След това клетъчният пелетен остатък се ресуспендира и клетките се прехвърлят в нова колба, пълна с културална среда. След това клетките се поставят в инкубатор при 37 °C за минимум 24 часа.
Ниво на биологична безопасност:
За работа с и поддържане на култури от Neuro-2a е задължително използването на лабораторни условия от ниво 1 на биологична безопасност.
- Предимства и недостатъци на клетъчната линия Neuro-2a
- Приложения на клетъчната линия Neuro-2a в научните изследвания
- Информация за култивирането на клетъчната линия Neuro-2a
- Общи характеристики и произход на клетките Neuro-2a
- 5. Научни публикации, посветени на клетките Neuro-2a
- Ресурси за клетките Neuro-2a: протоколи, видеоклипове и др.
- Често задавани въпроси
Предимства и недостатъци на клетъчната линия Neuro-2a
Клетките Neuro-2a притежават някои предимства и недостатъци, които ги отличават от другите невронни клетъчни линии. Тук са изброени някои от най-забележителните предимства и недостатъци на тези клетки.
Предимства
Предимствата на мишия невробластомен клетъчен линия Neuro-2a са:
-
Лесна за поддържане:
Клетъчната линия Neuro-2a не изисква сложни или комплексни процедури за култивиране на клетки. Те са лесни за култивиране и поддържане в изследователски лаборатории.
-
Ин витро модел на невронни клетки:
Neuro-2a е удобен модел на невронни клетки, широко използван от изследователи в проучвания на развитието и диференциацията на невроните.
Недостатъци
Недостатъците на клетките Neuro-2a са:
-
Миши произход:
Neuro-2a е от миши произход и изследователите трябва да проявяват предпазливост при екстраполиране на резултатите от проучвания, основани на мишки, към човешкото здраве и заболявания, тъй като биологията на мишките и хората може да се различава значително.
Приложения на клетъчната линия Neuro-2a в научните изследвания
Клетките Neuro-2a предлагат много приложения в областта на неврологичните изследвания. Тук се обсъждат няколко обещаващи приложения на тази клетъчна линия:
- Неврално развитие: Neuro-2a е in vitro модел на невронни клетки, който се използва широко за изучаване на невронното развитие и свързаните с него процеси, като диференциация, растеж на аксоните и образуване на синапси. В проучване, проведено през 2020 г., са използвани клетки Neuro-2a за изследване на ролята на микроРНК-124 в индуцираната от ретиноева киселина диференциация на невронните клетки [2]. Друго проучване изследва експресията на ретиноевия киселинен рецептор гама (RARG) и miRNA-124 в клетъчната линия на невробластома (N2A). Това проучване предложи хипотезата, че RARG е мишена на miR-124 и потиска израстването на невритите [3].
- Невротоксичност: Клетките Neuro-2a се използват също за оценка на токсичните ефекти на лекарства, химикали или фактори от околната среда върху нервните клетки. Например, проучване, проведено от Zhihong Yin и колеги, изследва невротоксичността на бисфенол А (BPA) – химикал от околната среда – като използва клетки Neuro-2a. Те наблюдават, че BPA потиска диференциацията и пролиферацията на невронните клетки, като нарушава тяхната клетъчна и синаптична цялост [4].
- Скрининг на лекарства: Клетките Neuro-2a се използват също за оценка на терапевтичната активност на редица лекарства, съединения и природни продукти. Например, в едно проучване, използващо клетки Neuro-2a, е изследван антиоксидантният потенциал на растителния екстракт от Гинко билоба. Освен това изследването предполага, че той води до намаляване на агрегацията на Аβ и може да бъде потенциално лечение за болестта на Алцхаймер [5].
5. Научни публикации, посветени на клетките Neuro-2a
Ето някои интересни научни статии, посветени на клетъчната линия Neuro-2a.
Това проучване, публикувано в списанието „Journal of Natural Medicines“ през 2018 г., изследва терапевтичните ефекти на алкамидите, изолирани от бял пипер (P. nigrum), върху невронните клетки Neuro-2a.
Това изследване, публикувано в списанието „Acta Biochimica et Biophysica Sinica“ през 2020 г., предлага хипотезата, че генът Nkx2.1 играе важна роля в развитието на мозъка при мишките чрез регулиране на сигналната каскада Shh.
Тази статия, публикувана в списанието „Toxicology and Industrial Health“ (2023 г.), предлага, че химикалът от околната среда бисфенол А предизвиква невротоксичност в клетките Neuro-2a и нарушава тяхната синаптична и цитоскелетна функция.
В тази статия, публикувана в списанието „Pharmaceuticals“ (2021 г.), се предлага хипотезата, че лекарственото средство хексарелин модулира PI3K/AKT и MAPK каскадите в клетките на невробластома (Neuro-2a) и инхибира апоптозата на Neuro-2a клетките, предизвикана от водороден пероксид.
В тази научна статия, публикувана в списанието „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine“ (2021 г.), се предлага хипотезата, че плодовият екстракт от Emblica officinalis потиска невровъзпалението в клетките Neuro-2a и по този начин може да бъде от полза при невровъзпалителни заболявания.
Ресурси за клетки Neuro-2a: протоколи, видеоклипове и др.
По-долу са изброени онлайн ресурсите, достъпни за клетките Neuro-2a. Те включват протокол за култивиране и трансфекция на клетки Neuro-2a.
- Протокол за трансфекция на Neuro-2a: Neuro-2a е подходящ гостоприемник за трансфекция. Този линк ще ви насочи относно протокола за трансфекция на клетъчната линия. Ефективността на трансфекцията на Neuro-2a варира в зависимост от реагента.
Следващият линк съдържа протокола за култивиране на клетки Neuro-2a.
- Протокол за култивиране на клетки Neuro-2a: Този линк ще ви помогне да се запознаете с протокола за субкултивиране на клетки Neuro-2a.
- Клетки Neuro-2a: Уебсайтът съдържа изчерпателна информация за клетъчните среди за Neuro-2a, плътността на засяване и протоколите за субкултивиране и работа с криоконсервирани и пролиферативни култури.
Източници
- Lulevich, V. и др., Механиката на единичните клетки предоставя чувствителен и количествен метод за изследване на взаимодействията между пептида амилоид-бета и невронните клетки. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): стр. 13872-7.
- You, Q., и др., Ролята на miR-124 в регулацията на индуцираната от ретиноева киселина диференциация на Neuro-2A клетки. Neural Regen Res, 2020. 15(6): стр. 1133-1139.
- Su, X., и др., Рецепторът на ретиноевата киселина гама е мишена на микроРНК-124 и инхибира растежа на невритите. Neuropharmacology, 2020. 163: стр. 107657.
- Yin, Z., и др., Излагането на бисфенол-А предизвиква невротоксичност и е свързано със синапсите и цитоскелета в Neuro-2A клетки. Toxicology in Vitro, 2020. 67: стр. 104911.
- Chen, L., и др., Екстрактът от Гинко билоба (EGb) инхибира оксидативния стрес в Neuro-2A клетки, които свръхекспресират APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.