Клетки Hep3B: Изследвания и открития в областта на хепатоцелуларния карцином
HEP3B е безсмъртна клетъчна линия от човешки хепатоцитен карцином. Тя се използва широко в изследванията на хепатотоксичността и метаболизма на лекарствата. Ефективността на трансфекцията на HEP3B е значителна; поради това тези клетки често се използват за изучаване на развитието, прогресията и терапевтичните интервенции при рак на черния дроб. Тази статия обхваща цялата необходима информация за клетъчната линия HEP3B, за да ви помогне при работата с нея. Основно тя ще включва:
- Среда за растеж
- За култивиране на HEP3B клетки се използва среда EMEM, съдържаща 10% FBS, 2,2 g/L NaHCO3, 2 mM L-глутамин и балансиран солев разтвор на Earle (EBSS).
- Време за удвояване
- Времето за удвояване на HEP3B клетките е приблизително 36 часа.
- Тип растеж
- Тази клетъчна линия на хепатома е адхезивна.
- Ниво на биологична безопасност
- BSL-1
- Налична от
- Cytion — Поръчайте HEP3B
- Общи характеристики и произход на HEP3B клетките
- Информация за култивирането на клетъчната линия HEP3B
- Клетъчна линия HEP3B: Предимства и ограничения
- Приложения на HEP3B клетките в научните изследвания
- Публикации за клетъчната линия HEP3B
- Ресурси за клетъчната линия HEP3B: протоколи, видеоклипове и др.
- Общи характеристики и произход на HEP3B клетките
- Информация за култивирането на клетъчната линия HEP3B
- Клетъчна линия HEP3B: предимства и ограничения
- Приложения на HEP3B клетките в научните изследвания
- 5. Публикации за клетъчната линия HEP3B
- Ресурси за клетъчната линия HEP3B: протоколи, видеоклипове и др.
- Често задавани въпроси
Общи характеристики и произход на HEP3B клетките
Основната информация, от която се нуждаете за дадена клетъчна линия, е нейният произход и общите й характеристики. Тя може да ви помогне да решите как да я използвате в изследванията си и да се справите с нея. Тази част от статията обхваща цялата необходима информация за произхода и характеристиките на HEP3B. Тук ще научите: Какво представляват клетъчните линии Hep 3B? Какъв е произходът на клетките Hep3B? Каква е морфологията на клетките HEP3B?
- HEP3B, непрекъсната клетъчна линия от човешки хепатома, произхожда от чернодробната тъкан на 8-годишно африканско момче с хепатоцелуларен карцином (HCC). Тя е създадена от Аден и колеги през 1979 г. в лабораторията на Барбара Б. Ноулс, Институт „Уистар“, Филаделфия, САЩ [1].
- Клетките HEP3B имат интеграция на генома на вируса на хепатит В (HBV) в хромозомата си.
- Тези хепатоцитни карциномни клетки проявяват епителна морфология.
- Клетките HEP3B имат модален брой хромозоми 60. За разлика от HepG2, те не притежават пренаредена хромозома 1.
Каква е разликата между HepG2 и Hep3B?
HepG2 и HEP3B се различават по броя на хромозомите на клетка. HEP3B съдържа 60 хромозоми, докато HepG2 клетките имат средно 55 хромозоми. Освен това, HepG2 е нетуморогенна и хепатит В отрицателна, докато HEP3B е туморогенна и HBV положителна.
Информация за култивирането на клетъчната линия HEP3B
Знанията за култивирането на клетъчна линия могат да ви улеснят работата с нея. Тази секция обхваща всички ключови моменти при култивирането на клетъчната линия HEP3B HBV, включително: Какво е времето за удвояване на клетките Hep3B? Какви са условията за култивиране на HEP3B? Как се култивират HEP3B HCC клетки?
Ключови моменти при култивирането на HEP3B клетки
Време за удвояване:
Времето за удвояване на HEP3B клетките е приблизително 36 часа.
Адхезивни или в суспензия:
Тази клетъчна линия на хепатома е адхезивна.
Съотношение на разделяне:
Клетките HEP3B се субкултивират в съотношение от 1:2 до 1:4. Адхезивните клетки HEP3B се изплакват с 1 x PBS и след това се инкубират с разтвора за дисоциация Accutase. След 8 до 10 минути се добавя свежа среда и клетките се центрофугират. След това събраните клетки се ресуспендират внимателно и се изсипват в колби, съдържащи културална среда, при препоръчано съотношение на разделяне.
Среда за растеж:
За култивиране на HEP3B клетки се използва EMEM среда, съдържаща 10% FBS, 2,2 g/L NaHCO3, 2 mM L-глутамин и балансиран солев разтвор на Earle (EBSS).
Условия за растеж:
Клетките HEP3B се култивират в овлажнен инкубатор при 37 °C с непрекъснато подаване на 5% CO2.
Съхранение:
Замразените HEP3B клетки се съхраняват при температура под -150 °C в електрически фризер или във фазата на пари на течен азот.
Процес на замразяване и среда:
Препоръчителната среда за замразяване на HEP3B клетки е CM-1 или CM-ACF. Клетките се замразяват чрез процес на бавно замразяване, който позволява понижение на температурата само с 1°C на минута, за да се запази жизнеспособността на клетките.
Процес на размразяване:
Замразените клетки се размразяват във водна баня, предварително настроена на 37 °C, за 40 до 60 секунди. След това тези клетки се добавят към свежа среда за растеж и се центрофугират, за да се отстранят елементите на средата за замразяване. Събраните клетки се ресуспендират и се разпределят в нови колби за растеж.
Ниво на биологична безопасност:
За култивирането на HEP3B клетки е необходима лаборатория с ниво на биологична безопасност 1.
Клетъчна линия HEP3B: предимства и ограничения
HEP3B е широко използвана клетъчна линия за хепатоцелуларен карцином. В тази секция ще се спрем на някои основни предимства и ограничения на тези хепатома клетки.
Предимства
Основните предимства на HEP3B клетките са:
Лесни за култивиране
Клетките HEP3B нямат специфични изисквания за култивиране, което ги прави лесни за работа и поддържане в изследователска лаборатория. Това опростява експерименталните процедури.
Висока ефективност на трансфекцията
Клетките HEP3B показват забележителна ефективност на трансфекцията, което ги прави широко използвани в генетичната манипулация и проучванията, свързани с генната експресия.
Туморогенност
HEP3B е туморогенна клетъчна линия на хепатоцелуларен карцином, способна да образува тумори при инжектиране в имунокомпрометирана мишка. Това помага при изучаването на прогресията и развитието на рака с помощта на ксенографтни модели на HEP3B.
Статус на P53 при HEP3B
Клетките HEP3B притежават мутация на гена P53, подобна на тази при хепатоцелуларния карцином (HCC) и други видове рак, което ги прави подходящи за изучаване на ефектите от мутацията на P53 върху растежа, развитието и прогресията на рака.
Ограничения
Ограничението, свързано с клетъчната линия HEP3B, е:
Клетъчен модел in vitro
Клетъчната линия HEP3B служи като in vitro модел на клетките на хепатоцелуларен карцином (HCC). Въпреки това, тя може да не отразява напълно сложността на HCC, както се среща в живите организми. Следователно, експерименталните резултати in vitro могат да се различават от наблюдаваните in vivo.
Приложения на HEP3B клетките в научните изследвания
Клетъчната линия HEP3B предлага няколко приложения в биомедицинските изследвания. Някои от ключовите приложения на HEP3B клетките включват:
- Биология на рака: HEP3B е клетъчна линия на човешки хепатоцелуларен карцином. Тя е безценен клетъчен модел за изследване на клетъчните и молекулярните механизми, лежащи в основата на развитието и прогресията на HCC. Изследователите използват тези клетки за изучаване на генетични мутации, клетъчни процеси и клетъчни сигнални пътища, свързани с рака на черния дроб. Например, в едно проучване, използвало HEP3B клетки, е установено, че микроРНК-223-3p регулира компонентите на NLRP3 инфламазома, инхибира пролиферацията и усилва апоптозата на HEP3B хепатокарциномни клетки [2].
- Скрининг и разработване на лекарства: Клетъчната линия HEP3B се използва също за тестване, скрининг и разработване на нови терапевтични средства срещу карцином на черния дроб. Освен това тя се използва за оценка на токсичността и ефикасността на различни противоракови лекарства и лечения. Изследователите също така използваха тези хепатома клетки за изучаване на метаболизма на лекарствата. Изследователите използваха HEP3B клетки и оцениха цитотоксичния потенциал на растителен екстракт от Cotinus coggygria върху HEP3B хепатоцитни карциномни клетки [3].
- Вирусни инфекции: HEP3B е клетъчна линия, положителна за вируса на хепатит В; следователно тя се използва за изучаване на вирусни инфекции, които могат да доведат до развитие на рак на черния дроб, т.е. HBV и HCV. Това може да помогне за по-доброто разбиране на вирусните инфекции и разработването на потенциални антивирусни лечения. Например, в едно проучване са използвани ракови хепатоцитни клетки HEP3B и е изследвано значението на убитикинирането за разпространението на вируса на хепатит С. Резултатите сочат, че убиквитин-специфичната протеаза 15 (USP15) участва в разпространението на HCV чрез регулиране на специфични за хепатоцитите функции, включително образуването на липидни капчици и транслацията на HCV РНК [4].
5. Публикации за клетъчната линия HEP3B
В тази част от статията ще бъдат разгледани няколко интересни научни публикации за HEP3B клетките.
Регулиране на апоптозата и автофагията от лутеолин в човешките хепатоцелуларни ракови клетки Hep3B
Тази публикация в Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) предлага, че индуцираният от лутеолин стрес в ендоплазматичния ретикулум може да окаже антитуморни ефекти в P53-нулеви HEP3B клетки по начин, независим от P53.
Потенциално насочване към Hep3B чернодробни ракови клетки чрез лупеол, изолиран от Avicennia marina
Това проучване в списанието „Archiv der Pharmazie“ (2021 г.) предлага пентацикличен тритерпеноид, лупеол, като потенциално противораково средство срещу HEP3B клетки.
Тази статия е публикувана в Molecular Medicine Reports (2017). Резултатите от проучването сочат, че етанолният екстракт от Cnidium monnieri (L.) Cusson предизвиква клетъчна смърт (апоптоза) и спиране на клетъчния цикъл в хепатокарциномните клетки HepG2 и HEP3B чрез регулиране на p53 и Akt/GSK-3β сигналния път.
Това изследване, публикувано в Biomolecules and Therapeutics (2020), предлага, че ауранофин проявява синергична активност и насърчава сулфорафан-медиираната апоптоза на HEP3B клетките чрез активиране на PI3K/AKT пътя.
Тази научна статия в BioFactors (2023) предлага, че циркулярната РНК-0072309 оказва антитуморни ефекти в клетките на хепатоцелуларен карцином HEP3B чрез насочване към miRNA-665.
Ресурси за клетъчната линия HEP3B: протоколи, видеоклипове и др.
Ето няколко ресурса, достъпни за клетки HEP3B:
- Трансфекция на HEP3B: Това видео ще ви обясни протокола за трансфекция на HEP3B клетки.
- Ефективност на трансфекцията на HEP3B: Този линк ще ви помогне да научите състава на средата HEP3B DMEM, пасажирането на клетките и протокола за трансфекция на HEP3B клетки. Освен това, той предоставя информация за оптимизиране на реагента HEP3B lipofectamine 3000 във вашия протокол за трансфекция.
Следващият линк съдържа протокола за култивиране на HEP3B клетки:
- Условия за култивиране на HEP3B: Този линк ще ви помогне да научите протокола за работа и поддържане на култури от Huh7 и HEP3B.
- Клетки HEP3B: Този уебсайт съдържа богата информация за клетките HEP3B, включително среди за HEP3B, протокол за разделяне на клетки, размразяване и работа с пролиферативни и криоконсервирани култури.
Източници
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Произход и свойства на клетъчни линии на хепатоцелуларен карцином. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): стр. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p регулира NLRP3, за да стимулира апоптозата и да инхибира пролиферацията на Hep3B клетки. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): стр. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. и S. Selen-Isbilir, Цитотоксичен ефект на екстракт от Cotinus coggygria върху раковата клетъчна линия Hep3B. Natural Product Research, 2022: стр. 1-4.
- Kusakabe, S. и др., USP15 участва в разпространението на вируса на хепатит С чрез регулиране на транслацията на вирусната РНК и образуването на липидни капчици. Journal of Virology, 2019. 93(6): стр. 10.1128/jvi. 01708-18.