Клетки HEK293T: Разкриване на потенциала в изследванията по трансфекция
Клетките HEK293T са човешки ембрионални бъбречни клетки, широко използвани в индустриалната биотехнология, токсикологията и изследванията в областта на рака. Тези безсмъртни клетки се използват и за производството на различни терапевтични протеини и вируси.
- Среда за растеж
- Клетките HEK293T се култивират в EMEM (минимална есенциална среда на Игъл), съдържаща 1,0 g/L L-глюкоза, 2,2 g/L NaHCO3, 2,0 mM L-глутамин и 10% фетално телешко серум. Средата трябва да се сменя два пъти седмично.
- Време за удвояване
- Времето за удвояване, отчетено за HEK293T клетки, е 30 часа.
- Тип растеж
- HEK293T е адхезивна клетъчна линия.
- Ниво на биологична безопасност
- BSL-1
- Наличен от
- Cytion — Поръчайте HEK293T
- Общи характеристики и произход на HEK293T клетките
- Клетъчни технологии и биомедицински приложения на HEK293T клетки
- Изследователски приложения на клетъчната линия HEK293T
- Иновации в клетъчната терапия с използване на HEK293T клетки
- Иновативни техники в култивирането на HEK293T клетки
- Закупете HEK293 клетки за вашите изследвания
- Информация за култивирането на клетъчната линия HEK293T
- Клетъчна линия HEK293T: предимства и ограничения
- Често задавани въпроси за култивирането и приложенията на HEK293T клетки
- Клетки HEK293T: Изследователски публикации
- Ресурси за клетъчната линия HEK293T: протоколи, видеоклипове и др.
- Източници
- Често задавани въпроси
Общи характеристики и произход на HEK293T клетки
В тази част от статията ще разгледаме произхода и общата информация за клетъчната линия HEK293T.
- Клетъчната линия HEK293T произхожда от първични човешки ембрионални бъбречни клетки, култивирани в лаборатория. Изследователите разработиха тези клетки в началото на 70-те години на миналия век чрез трансфекция на ембрионални бъбречни клетки с фрагменти от ДНК на аденовирус тип 5. Изследователите създават клетъчната линия HEK293T чрез въвеждане на големия Т-антиген на маймунския вирус 40 (SV40) в генома на HEK293 клетките. Тази модификация позволява на изследователите лесно да трансфектират 293 клетки и ги прави подходящи за производство на протеини и изследвания на генната експресия [1].
- Клетките HEK293T притежават епителиоподобна морфология. Те имат удължена и сплескана форма с ясно очертана клетъчна граница.
- Размерът на HEK293T клетките варира между 11 и 15 µm в диаметър.
- Клетките HEK293T с голям Т-антиген на SV40 притежават сложен кариотип. Тези клетки са хипотриплоидни, съдържат 3 пъти по-малко хромозоми от хаплоидна гамета и притежават модален брой хромозоми 64.
Каква е разликата между HEK293T и HEK293?
И двете клетъчни линии HEK293 и HEK293T са от човешки произход. HEK293T е популярно производно на клетъчната линия HEK293. Учените разработиха тези клетки от оригиналните човешки ембрионални бъбречни клетки 293 чрез трансфекция с голям Т-антиген SV40, докато създадоха безсмъртните HEK293 клетки чрез трансформация и култивиране на човешки ембрионални бъбречни клетки с фрагменти от ДНК на човешки аденовирус 5.
Клетъчни технологии и биомедицински приложения на HEK293T клетки
Клетъчна култура и съхранение в изследванията с HEK293T
Клетките HEK293T, които са получени от човешки ембрионални бъбречни клетки 293, намират широко приложение в клетъчната култура поради силния си растеж и лесността на трансфекция. За да работят с тези клетки, изследователите трябва да дадат приоритет на създаването на клетъчни банки, което включва съхранение на клетки за продължителни изследвания и терапевтична употреба. Те трябва да използват подход за създаване на клетъчни банки на етапи, за да запазят свойствата на клетките и да гарантират дългосрочната им жизнеспособност. Създаването на клетъчни банки изисква спазване на правилата за добра производствена практика, за да се гарантира жизнеспособността и целостта на клетките за терапевтични приложения.
Добрите производствени практики са от решаващо значение при производството на клетъчни банки HEK293T, които са основополагащи както за научни изследвания, така и за терапевтични приложения. Основната клетъчна банка служи като референтна точка за всички последващи клетъчни продукти. Производството на тези клетки за терапевтични приложения, като например производството на лентивируси за генни терапии, следва строги регулаторни стандарти, за да се гарантира безопасността и ефикасността на крайните продукти.
Протоколи и тестове с използване на HEK293T
В цитотехнологията са разработени специфични протоколи и тестове за оценка на свойствата на HEK293T клетките. Те включват оценка на ефикасността на векторите за генна терапия и взаимодействието на клетката с екстрацелуларния матрикс в чашка или суспензионна култура. За да се запази целостта на HEK293T клетките, изследователите избират реагенти за трансфекция с прецизност и подлагат суровините на строги тестове за контрол на качеството.
Приложения на клетъчната линия HEK293T в научните изследвания
- Разработване на ваксини: Клетъчната линия HEK293T се използва за изучаване на вируси и производство на ваксини на базата на вирусни вектори за борба с различни вирусни инфекции. В едно проучване тази клетъчна линия от ембрионални бъбречни клетки е използвана за изследване на структурната и функционалната основа на проникването на вируса COVID-19 в клетките чрез човешкия ангиотензин-конвертиращ ензим 2 (ACE2) [3]. Освен това, в едно скорошно проучване са използвани HEK93T клетки за генериране на псевдотипизирани с шип на SARS-CoV-2 лентивирусни частици [4].
- Токсикологични изследвания: Тази клетъчна линия от човешки ембрионални бъбречни клетки се използва широко за тестване на токсичността и ефикасността на лекарства. Изследване, проведено през 2022 г., използва HEK293T като нормална човешка клетъчна линия за валидиране на цитотоксичния потенциал на екстракти от Caladium lindenii срещу клетъчната линия на рак на черния дроб HepG2 [5].
- Изследвания на генната експресия: Клетъчната линия HEK293T с голям Т-антиген SV40 е силно податлива на трансфекция, което я прави подходяща за изследвания на генната експресия. В едно проучване бяха използвани HEK293T клетки за изследване на ролята на дългия некодиращ РНК SNHG16 в регулирането на функциите на трофобласта. Проучването разкри, че LncRNA SNHG16 взаимодейства с оста miR-218-5p/LASP1, за да медиира тези ефекти [6].
Иновации в клетъчната терапия с използване на HEK293T клетки
Напредък в клетъчната терапия с HEK293T
Клетките HEK293T допринасят значително за развитието на клетъчната терапия, особено при създаването на вирусни вектори за генна терапия. Тези клетки са от съществено значение в производствените процеси, които спазват правилата за добра производствена практика, тъй като гарантират производството на висококачествени продукти за генна терапия. Обучението на производствения персонал също се фокусира върху работата с уникалните свойства на HEK293T клетките и поддържането на висок стандарт за лекарствените продукти, произведени от тези клетки.
Клетки HEK293T в клинични изпитвания и генна терапия
Клетъчната линия HEK293T играе ключова роля в разработването на продукти за генна терапия и е неразделна част от клиничните изпитвания, целящи да внесат нови клетъчни терапии на пазара. Това включва използване на високата трансфективност на клетъчната линия за доставка на гени, като се използват вектори като лентивирусни опаковъчни вектори, при които мутацията D64V на интегразата е значителен напредък за повишаване на безопасността.
Иновативни техники в култивирането на HEK293T клетки
Универсалността на HEK293T клетките подкрепя иновативни техники както в двуизмерни, така и в по-сложни клетъчни култури. Тази адаптивност е ключова при проучването на клетъчни продукти за различни видове биомедицински изследвания, включително изследвания на рака, където тези клетки се използват за изучаване на туморогенни процеси и тестване на лекарства. Освен това линията HEK293T играе важна роля в производството на лентивирусни частици, които са от решаващо значение както за научните изследвания, така и за производствените процеси на терапевтични вектори.
Закупете HEK293 клетки за вашите научни изследвания
Повишете качеството на вашите изследвания с нашите HEK293 клетки, известни със своята адаптивност в проучванията за генна експресия и производството на ваксини. Нашата оферта включва многофункционални деривати като HEK293T, линията HEK293, адаптирана за суспензия, HEK293T/17, AAV-293 и 2V6.11. Разгледайте нашия богат избор, за да подкрепите и ускорите експерименталната си работа.
Информация за култивирането на клетъчната линия HEK293T
Клетките HEK293T се култивират широко в изследователски лаборатории. Преди да започнете култивирането на клетки HEK293T, трябва да знаете: Какво е времето за удвояване на клетките HEK293T? Какво представлява средата за HEK293T? Каква е плътността на засяване на HEK293T?
Ключови моменти при култивирането на HEK293T клетки
Време за удвояване:
Времето за удвояване, отчетено за HEK293T клетки, е 30 часа.
Прилепващи или в суспензия:
HEK293T е адхезивна клетъчна линия.
Плътност на засяване:
Клетките HEK293T се засяват с плътност 1 x 104 клетки/cm2. При тази плътност на засяване клетките могат да образуват конфлуентен монослой за приблизително 4 дни. За засяване адхезивните клетки се отделят с помощта на разтвора за дисоциация Accutase. Отделените клетки се центрофугират и след това внимателно се ресуспендират с помощта на среда за растеж. След това клетките се разпределят в нови колби за култивиране.
Среда за растеж:
Клетките HEK293T се култивират в EMEM (минимална есенциална среда на Игъл), съдържаща 1,0 g/L L-глюкоза, 2,2 g/L NaHCO3, 2,0 mM L-глутамин и 10% фетално телешко серум. Средата трябва да се сменя два пъти седмично.
Условия за растеж:
Културите от HEK293T клетки се съхраняват в овлажнен инкубатор при 37 °C с 5% CO2.
Съхранение:
Човешките ембрионални бъбречни клетки HEK293T се съхраняват във фазата на пари на течен азот или при температура под -150 °C за по-дълго време.
Процес на замразяване и среда:
Клетките HEK293 могат да се замразяват в среда за замразяване CM-1 или CM-ACF. За клетките HEK293T се препоръчват процеси на бавно замразяване, които позволяват постепенно понижаване на температурата с 1 °C, за да се защити тяхната жизнеспособност.
Процес на размразяване:
Флаконът със замразени клетки се разклаща бързо във водна баня (37 °C), докато остане малък леден буцик. Клетките се ресуспендират в среда и се центрофугират, за да се отстранят компонентите на средата за замразяване. Възстановените клетки след това се култивират в нови колби, съдържащи среда за растеж.
Ниво на биологична безопасност:
За работа с и поддържане на клетъчни култури HEK293T е необходима лаборатория с ниво на биологична безопасност 1.
Клетъчна линия HEK293T: предимства и ограничения
С човешките ембрионални бъбречни клетки 293T е свързана уникална комбинация от предимства и ограничения. Тук ще разгледаме няколко основни предимства и недостатъци на тази клетъчна линия.
Предимства и недостатъци на HEK293T клетките
Сред значителните предимства на клетките HEK293T е тяхната висока трансфективност, при която клетъчната линия проявява забележителна ефективност при усвояването на чужда ДНК и производството на изобилие от протеини. Това качество ги прави широко предпочитани както за проучвания на преходна, така и на стабилна трансфекция. Освен това, културите от HEK293T клетки са известни с лесното си поддържане, което ги прави отличен избор за различни лабораторни експерименти благодарение на тяхната устойчивост и простите изисквания за работа с тях.
Въпреки това, има ограничения, свързани с HEK293T клетъчните култури. Едно от основните притеснения е рискът от микробно замърсяване, което може значително да повлияе на клетъчната морфология, генната експресия и други критични характеристики, което потенциално може да доведе до неточни експериментални резултати. Освен това, макар че HEK293T клетките са подходящи за дългосрочни експерименти, продължителните периоди на култивиране могат да компрометират здравето на клетките. Това може да повлияе на ефективността на трансфекцията и скоростта на растеж, поради което обикновено се препоръчва броят на пасажите да се ограничи до 20 или по-малко, за да се запази целостта на клетките.
Често задавани въпроси относно клетъчната култура и приложенията на HEK293T
Клетки HEK293T: Научни публикации
В тази секция сме споменали няколко обещаващи научни публикации, посветени на HEK293T клетките.
Тази публикация ще бъде публикувана в BioRxiv през 2022 г. В това проучване са използвани HEK293T клетки за разработване на mRNA ваксини срещу вируса COVID-19, кодиращи N-терминалния и RBD (домените за свързване с рецептора) на гена spike.
Циркулярният HER2 RNA-позитивен тройно-негативен рак на гърдата е чувствителен към пертузумаб
Това изследване е публикувано в Molecular Cancer през 2020 г. Проучването предлага, че експресията на циркулярна HER2 РНК в клетките на тройно-негативния рак на гърдата го прави чувствителен към лечение с лекарството пертузумаб. В това проучване изследователите са използвали HEK293 клетки за производство на лентивирус и трансфекция на циркулярния HER2 ген.
Антивирусна роля на IFITM3 при инфекция с прототипен пенест вирус
Тази статия е публикувана в списанието „Virology Journal“ през 2022 г. В това проучване са използвани HEK293T клетки за изследване на антивирусния ефект на IFITM3 (интерферон-индуциран трансмембранен протеин 3) при инфекция с прототипен пенест вирус (PFV).
В тази научна статия, публикувана в Nature Scientific Reports (2017 г.), са използвани HEK293T клетки и е проучено, че miRNA-21 медиира индуцираните от метформин антиангиогенни ефекти чрез регулиране на PI3K/AKT сигналния път и експресията на гените SMAD7 и PTEN.
MicroRNA-608 инхибира пролиферацията на рак на пикочния мехур чрез сигналния път AKT/FOXO3a
Това изследване беше публикувано в списанието Molecular Cancer през 2017 г. В него са използвани HEK293 клетки за проучване на антипролиферативния потенциал на miRNA-608 срещу рак на пикочния мехур.
Ресурси за клетъчната линия HEK293T: протоколи, видеоклипове и др.
Ето няколко ресурса за HEK293T клетки:
- Трансфекция на HEK293T клетки.
- Трансфекция на HEK клетки: Това видео показва общия протокол за трансфекция на клетъчната линия от човешки ембрионални бъбречни клетки HEK293.
- Пасиране на клетки: Това видео обяснява процедурата за разделяне или субкултивиране на адхезивни клетки.
Протоколи за клетъчна култура
Протоколите за клетъчна култура за HEK293T клетки са изброени тук.
- Разделяне на HEK293T клетки: Този сайт предоставя подробно стъпка по стъпка ръководство за субкултивиране на HEK293 клетки.
- Култивиране на човешки ембрионални бъбречни клетки: Този линк ще ви предостави протокола за клетъчна култура на HEK293T.
Източници
- Tan, E., et al., Клетъчна линия HEK293 като платформа за производство на рекомбинантни протеини и вирусни вектори. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2021, 9.
- Kim, M.J., et al., AMPKα1 регулира прогресията на рака на белия дроб и гърдата чрез регулиране на TLR4-медиираната сигнална ос TRAF6-BECN1. Cancers (Basel), 2020, 12(11).
- Wang, Q., et al., Структурна и функционална основа на проникването на SARS-CoV-2 чрез използване на човешки ACE2. Cell, 2020. 181(4): стр. 894–904.
- Gale, E.C., et al., Базираното на хидрогел бавно освобождаване на ваксина със субединица на рецепторно-свързващ домейн предизвиква неутрализиращи антителни реакции срещу SARS-CoV-2. bioRxiv, 2021.
- Kalsoom, A., et al., In Vitro оценка на цитотоксичния потенциал на екстракти от Caladium lindenii върху човешки хепатокарцином HepG2 и нормални клетъчни линии HEK293T. Biomed Res Int, 2022, стр. 1279961.
- Yu, Z., et al., LncRNA SNHG16 регулира функциите на трофобласта чрез оста miR-218-5p/LASP1. J Mol Histol, 2021. 52(5): стр. 1021-1033.