Клетки DLD-1: Приложения и изводи от изследванията с клетки DLD-1 в областта на колоректалния рак
DLD-1 е клетъчна линия от човешки колоректален карцином, често използвана в изследванията на рака. Тя е ценен инструмент за проучване на различни аспекти на рака на дебелото черво, включително развитие на тумора, прогресия, основни молекулярни механизми и реакция към терапевтични средства. По този начин DLD-1 играе изключителна роля в разбирането на заболяването и разработването на потенциални стратегии за лечение.
- Среда за растеж
- За култивиране на DLD-1 клетки се използва RPMI 1640 с добавки към средата, включително 10% фетално телешко серум (FBS), 2,1 mM стабилен глутамин и 2,0 g/L NaHCO3. Средата трябва да се сменя 2-3 пъти седмично.
- Време за удвояване
- Времето за удвояване на DLD-1 е приблизително 15 часа.
- Тип растеж
- DLD-1 е адхезивна клетъчна линия от човешки колоректален карцином. Клетките растат в монослоеве.
- Ниво на биологична безопасност
- BSL-1
- Наличен от
- Cytion — Поръчайте DLD-1
- Общи характеристики и произход на DLD-1 клетките
- Информация за култивирането на клетъчната линия DLD-1
- Клетъчна линия DLD-1: Предимства и ограничения
- Приложения за научни изследвания на клетъчната линия DLD-1
- 5. Научни публикации за DLD-1 клетки
- Ресурси за клетъчната линия DLD-1: протоколи, видеоклипове и др.
- Често задавани въпроси
Общи характеристики и произход на DLD-1 клетките
Преди да започне работа с клетъчна линия, първото, което изследователят трябва да има предвид, е нейният произход и общите й характеристики. Тази част от статията представлява подробно въведение в клетъчната линия DLD-1. Тя ще обхване следните често задавани въпроси: Какви са клетките DLD-1? Какво представлява раковата клетъчна линия DLD-1? Какви са мутациите в клетъчната линия DLD-1? Какъв е размерът на клетката DLD-1? Каква е морфологията на клетките DLD-1?
- DLD-1, клетъчна линия на рак на дебелото черво, произхожда от дебелото черво на 67-годишен мъж с колоректален аденокарцином. Тя е изолирана от D.L. Dexter и колеги през 1977-1979 г. Тази клетъчна линия има същия произход като клетъчните линии HCT-8, HCT-15 и HRT-18.
- Подобно на колоректалните ракови заболявания, клетките DLD-1 притежават фенотип на микросателитна нестабилност [1].
- Мутациите на DLD-1 включват KRAS, P53, BRAF, BRCA1 и BRCA2. Поради статуса на DLD-1 P53, мутациите DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 и DLD-1 KRAS, тези клетки се считат за идеални за изследвания на рака.
- Тези клетки притежават епителиоподобна морфология.
- Размерът на клетъчната линия DLD-1 е приблизително 15 µm.
- Клетъчната линия на човешки колоректален рак DLD-1 притежава псевдодиплоиден кариотип. Около 86% от клетките притежават модален брой хромозоми 46. Въпреки това, полиплоидия може да съществува и в 17,1% от клетъчната популация.
Информация за култивирането на клетъчната линия DLD-1
Преди да започнете култивирането на която и да е клетъчна линия, трябва да знаете основните изисквания за култивирането ѝ. В тази секция ще бъдат подчертани важните точки, които трябва да научите, преди да започнете работа с клетъчната линия DLD-1. Това включва: Какво е времето за удвояване на DLD-1? Каква е културалната среда за DLD-1? Каква е плътността на засяване на клетките DLD-1? Как се култивират клетките DLD-1?
Ключови моменти при култивирането на DLD-1 клетки
Време за удвояване:
Времето за удвояване на DLD-1 е приблизително 15 часа.
Адхезивни или в суспензия:
DLD-1 е адхезивна клетъчна линия от човешки колоректален карцином. Клетките растат в монослоеве.
Плътност на засяване:
Клетките DLD-1 се засяват с плътност от 1 до 2 x 104 клетки/cm2. Адхезивните клетки се промиват с 1x фосфатен буферен разтвор (PBS) и се инкубират с разтвор за пасажиране (Accutase) при стайна температура. След инкубация от 8 до 10 минути, отделените клетки се добавят към културалната среда и се центрофугират. След това клетъчният пелетен се ресуспендира внимателно и клетките се изсипват в нови културални съдове, съдържащи среда за растеж.
Среда за растеж:
За култивиране на DLD-1 клетки се използва RPMI 1640 с добавки към средата, включително 10% фетално телешко серум (FBS), 2,1 mM стабилен глутамин и 2,0 g/L NaHCO3. Средата трябва да се сменя 2-3 пъти седмично.
Условия за растеж:
Културите DLD-1 се поддържат в овлажнен инкубатор при 37 °C с 5% CO2.
Съхранение:
DLD-1 клетките се съхраняват във фазата на пари на течен азот или в електрически фризер с ултраниска температура (при температура под -150 °C).
Процес на замразяване и среда:
За замразяване на DLD-1 клетките могат да се използват средите за замразяване CM-1 или CM-ACF. Винаги се препоръчва бавен процес на замразяване, позволяващ постепенно понижаване на температурата с 1 °C, като по този начин се предотвратява шокът за клетките и се защитава тяхната жизнеспособност.
Процес на размразяване:
Замразените клетки се размразяват във водна баня, предварително настроена на температура 37 °C, за 40 до 60 секунди, докато остане малък леден буцик. След това клетките се добавят към свежа среда и се центрофугират. Тази стъпка е необходима, за да се отстранят компонентите на средата за замразяване от клетките. Събраните клетки се ресуспендират в среда за растеж и се разпределят в колбата за растеж.
Ниво на биологична безопасност:
Клетъчната линия DLD-1 се поддържа в лаборатории с ниво на биологична безопасност 1.
Клетъчна линия DLD-1: Предимства и ограничения
В тази част от статията ще разгледаме предимствата и ограниченията на клетъчната линия DLD-1 за рак на дебелото черво.
Предимства
Основните предимства на клетъчната линия DLD-1 са:
Модел на колоректален рак
Клетките DLD-1 притежават мутации, често срещани при пациенти с колоректален рак, като мутация DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA и DLD-1 BRCA2. Тази релевантност ги прави клинично подходящ клетъчен модел за изучаване на това заболяване.
Туморогенна клетъчна линия
Клетките DLD-1 са туморогенни. Те могат да причинят тумори, когато се инжектират в голи мишки. Поради това изследователите използват тези клетки за разработване на модели на ксенографтни тумори, които помагат за изследване на образуването, развитието и прогресията на туморите in vivo.
Ограничения
Ограниченията, свързани с DLD-1 клетките, са:
Хетерогенност
Популациите от DLD-1 клетки на дебелото черво проявяват генетична и фенотипна хетерогенност. Това може да повлияе на общата приложимост на резултатите от изследванията.
Приложения на клетъчната линия DLD-1 в научните изследвания
Клетъчната линия DLD-1 предлага широк спектър от приложения в изследванията на рака. Някои от най-важните приложения са разгледани в тази секция.
- Изследване на рака: Клетките DLD-1 служат като ценен in vitro модел за разбиране на молекулярните механизми, лежащи в основата на растежа, развитието и прогресията на колоректалния рак. Освен това те се използват за изучаване на генната експресия, сигналните пътища и влиянието на специфични генетични мутации върху поведението на раковите клетки. Изследване, проведено през 2022 г., установи, че сигналната каскада PI3K/Akt/YAP регулира миграцията и инвазията на клетъчната линия DLD-1 на колоректален рак [2].
- Разработване на лекарства: Изследователите използват клетъчната линия DLD-1, за да тестват ефективността на лекарствата срещу рак и да оценят потенциала им за лечение на рак на дебелото черво. Това спомага за разработването на лекарства и ефективната борба с болестта. Проучване, проведено през 2022 г., използва раковата клетъчна линия DLD-1 и изследва противораковата активност на силициевите фталоцианини – химически синтезирани съединения. Резултатите от проучването сочат, че тези съединения са мощни противоракови агенти [3]. Интересно е, че друго проучване установи противораковия потенциал на протеина P8, получен от пробиотици, като използва клетки DLD-1 [4].
5. Научни публикации за клетките DLD-1
В тази секция ще бъдат представени няколко интересни и често цитирани публикации, посветени на клетъчната линия DLD-1 на колоректален карцином.
Тази публикация е в списанието „Journal of Biologically Active Products from Nature“ (2022). Проучването установи, че флавоноидът диосмин предизвиква клетъчна смърт в DLD-1 клетките и също така причинява спиране на клетъчния цикъл; по този начин той може да бъде потенциален антираков агент.
Бромелаинът ефективно потиска колоректалния рак с Kras-мутация чрез стимулиране на фероптозата
Това проучване, публикувано в списанието „Animal Cells and Systems“ (2018 г.), предлага, че бромелаинът, ензим, потиска KRAS-мутацията в DLD-1 и оказва силно цитотоксично действие.
Тази научна статия е публикувана през 2019 г. в списанието „Environmental Toxicology“. Проучването изследва антитуморните ефекти на естественото съединение бергаптен, като използва колоректална клетъчна линия DLD-1.
Това проучване, публикувано в списанието „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials“ (2023 г.), установи, че нанокомпозитите от куркумин и железен оксид са високо ефективни срещу колоректалните ракови клетки DLD-1.
Тази научна статия беше публикувана през 2020 г. в Turkish Journal of Biology. Проучването предложи, че естествен продукт, епибрасинолид-медиираната активация на AKT в DLD-1 клетки, стимулира автофагията, свързана с полиамините.
Ресурси за клетъчната линия DLD-1: протоколи, видеоклипове и др.
Ето няколко ресурса за DLD-1 клетки:
- Трансфекция на DLD-1: Това видео урок е изчерпателно ръководство за протокола за ин витро трансфекция на DLD-1.
- DLD-1 клетки: Тази научна статия описва накратко изискванията за култивиране на DLD-1 клетки, включително среди и условия на култивиране. Освен това, тя може да ви помогне да научите протокола за трансфекция, използван за DLD-1 клетки.
Следните връзки съдържат протокола за култивиране на DLD-1, човешки клетки от рак на дебелото черво.
- Клетъчна линия DLD-1: Този уебсайт ще ви предостави основна информация за клетъчната линия DLD-1. Той ще ви помогне да научите различни протоколи за култивиране на DLD-1 клетки, включително субкултивиране и работа с криоконсервирани и пролифериращи култури.
Източници
- Gavrilas, L.I., et al., Проапоптотични гени като нови мишени за единични и комбинирани лечения с ресвератрол и куркумин при колоректален рак. Food & function, 2019. 10(6): стр. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., PI3K/Akt/YAP сигнализацията стимулира миграцията и инвазията на DLD‑1 колоректални ракови клетки. Oncology Letters, 2022. 23(4): стр. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Противоракова активност на нови силициеви фталоцианини срещу клетъчната линия на колоректален аденокарцином (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): стр. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Противоракови роли на протеина P8, получен от пробиотици, в клетъчната линия на колоректален рак DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): стр. 9857.