Клетки ARPE-19 – Специализирано проучване на изследванията върху клетките на пигментния епител на ретината с ARPE-19
ARPE-19 са спонтанно възникнали ретинални пигментни епителни клетки от човешки произход. Те се използват за изучаване на различни аспекти на биологията на ретината, патологичните състояния и терапевтичните интервенции (фармакология). Целта на тази статия е да предостави изчерпателна информация за безсмъртните клетки ARPE-19. Ще бъдат обсъдени основно общите характеристики, условията за култивиране и разнообразните приложения на клетъчната линия в научните изследвания. Следователно, като прочетете тази статия, ще придобиете задълбочено разбиране за:
- Среда за растеж
- За култивиране на клетъчната линия ARPE-19 се използва среда DMEM или Ham’s F12. Средата за ARPE-19 се допълва с 5% FBS, 3,1 g/L глюкоза, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-глутамин, 1,0 mM натриев пируват и 1,2 g/L NaHCO3. Средата се подменя 2 до 3 пъти седмично.
- Време за удвояване
- Времето за удвояване на ARPE-19 е приблизително 55–65 часа. Те могат да претърпят до 48 удвоявания на популацията.
- Тип растеж
- ARPE-19 е адхезивна клетъчна линия.
- Ниво на биологична безопасност
- BSL-1
- Наличен от
- Cytion — Поръчайте ARPE-19
- Клетки ARPE-19: Произход и общи характеристики
- Клетъчна линия ARPE-19: Информация за култивиране
- Предимства и ограничения на ARPE-19 клетки
- Приложения на клетъчната линия ARPE-19 в научните изследвания
- Клетки ARPE-19: Научни публикации
- Ресурси за клетъчната линия ARPE-19: Протоколи, видеоклипове и др.
- Клетки ARPE-19: Произход и общи характеристики
- Клетъчна линия ARPE-19: Информация за култивиране
- Предимства и ограничения на ARPE-19 клетки
- Приложения на клетъчната линия ARPE-19 в научните изследвания
- 5. Клетки ARPE-19: Научни публикации
- Ресурси за клетъчната линия ARPE-19: Протоколи, видеоклипове и др.
- Често задавани въпроси
Клетки ARPE-19: Произход и общи характеристики
Познаването на произхода и общите характеристики на клетъчната линия е от съществено значение за нейното ефективно използване в научните изследвания. В тази част от статията ще бъде представена цялата информация за клетъчната линия ARPE. Например: Какво представлява клетъчната линия ARPE-19? Защо да използваме клетки ARPE-19? Какво представлява клетъчната линия ARPE-19/HPV-16? Клетките ARPE-19 безсмъртни ли са? Каква е морфологията и размерът на клетките ARPE 19?
- Имунизираната клетъчна линия от ретинални пигментни епителни клетки, ARPE-19, е получена от очите на 19-годишен мъж, починал от травма на главата в резултат на инцидент. Тя е създадена от Ейми Аотаки-Кийн през 1986 г.
- Тези клетки експресират маркери на ретинални пигментни епителни клетки, т.е. CRALBP и RPE-65, което предполага, че могат да образуват стабилни монослоеве, характеризиращи се с морфологична и функционална полярност.
- Клетките ARPE-19 притежават морфология, подобна на тази на епителните клетки.
- Клетките ARPE-19 имат предимно нормален кариотип, с изключение на едно делеция и добавяне в дългия ръкав на хромозоми 9 и 19, съответно. Освен това се наблюдават и някои анеуплоидии [1].
Клетъчна линия ARPE-19: Информация за култивиране
Основната информация за култивирането на клетки е от решаващо значение за правилното боравене и поддържане на клетъчна линия. Тази секция ще ви помогне да научите ключовите моменти при култивирането на клетъчната линия ARPE-19. Ще научите: какво е времето за удвояване на ARPE-19? Каква е плътността на засяване на ARPE-19? Каква е клетъчната плътност на ARPE-19? Каква е средата за замразяване на ARPE-19? Как се култивира клетъчната линия ARPE-19?
Ключови моменти при култивирането на ARPE-19 клетки
Време за удвояване на популацията:
Времето за удвояване на ARPE-19 е приблизително 55–65 часа. Те могат да претърпят до 48 удвоявания на популацията.
Адхезивни или в суспензия:
ARPE-19 е адхезивна клетъчна линия.
Съотношение на субкултивиране:
Съотношението на субкултивиране на ARPE-19 е 1:3 до 1:5. Адхезивните клетки се изплакват с 1x PBS и се инкубират с разтворител, accutase, за 8 до 10 минути. Отделените клетки се добавят към свежа среда и се центрофугират. Клетъчният пелетен се ресуспендира отново и се изсипва в културална колба, съдържаща свежа среда.
Среда за растеж:
За култивиране на клетъчната линия ARPE-19 се използва среда DMEM или Ham’s F12. Средата за ARPE-19 се допълва с 5% FBS, 3,1 g/L глюкоза, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-глутамин, 1,0 mM натриев пируват и 1,2 g/L NaHCO3. Средата се сменя 2 до 3 пъти седмично.
Условия за отглеждане:
Клетките ARPE-19 се съхраняват в овлажнен инкубатор при температура 37 °C с подаване на 5% CO2.
Съхранение:
Клетъчната линия може да се съхранява във фазата на пари на течен азот или при температура под -150 °C, за да се запази жизнеспособността на клетките в дългосрочен план.
Процес на замразяване и среда:
CM-1 или CM-ACF се използват като среда за замразяване на ARPE-19. Накратко, клетките се замразяват чрез метод на бавно замразяване, който позволява понижение на температурата само с 1 °C на минута и предпазва клетките от шок.
Процес на размразяване:
Клетките се размразяват във водна баня, предварително настроена на 37 °C. След като остане малък леден буцик, клетките се добавят към свежа културална среда и се центрофугират. По този начин се отстраняват елементите на средата за замразяване. След това клетъчният пелетен се ресуспендира и клетките се разпределят в колба за култивиране.
Ниво на биологична безопасност:
Клетките ARPE-19 се обработват в лаборатории с ниво на биологична безопасност 1.
Предимства и ограничения на ARPE-19 клетките
Клетките ARPE-19 се използват широко в изследванията в областта на биологията на ретиналните клетки. Както и другите клетки, те също имат някои предимства и ограничения. Някои от тях са изброени в тази секция:
Предимства
Основните предимства на клетъчната линия ARPE-19 включват:
Модел на ретинални клетки
Клетките ARPE-19 много наподобяват човешките пигментни епителни клетки на ретината, което ги прави идеални за изследване на заболявания на ретината и тестване на лекарства.
Стабилен темп на растеж
Тези клетки показват стабилен растеж и могат да се поддържат за продължителни периоди, което улеснява дългосрочните експерименти.
Подходящ за трансфекция
Клетъчната линия ARPE-19 е отличен гостоприемник за трансфекция, широко използван както в проучвания за преходна, така и за стабилна експресия.
Ограничения
Ето някои ограничения, свързани с клетъчната линия ARPE-19:
Ограничена диференциация
Диференциацията на ARPE-19 е ограничена в сравнение с първичните ретинални клетки. Това може потенциално да повлияе на определени изследвания, свързани с диференциацията.
Приложения на клетъчната линия ARPE-19 в научните изследвания
Клетъчната линия ARPE-19 има многобройни приложения в изследванията на ретината. Тук разгледахме някои конкретни и значими приложения на тази клетъчна линия от пигментния епител на ретината в научните изследвания.
- Изследвания на ретинални заболявания: Клетките ARPE-19 предлагат ценна информация за патогенезата на ретината. Изследователите използват клетките, за да изследват механизмите на заболяванията и потенциалните лечения. Проучване, проведено през 2020 г., установи, че циркулярната РНК hsa_circ_0041795 взаимодейства с miRNA-646 и VEGFC, за да улесни увреждането, предизвикано от високи нива на глюкоза, в човешките ретинални пигментни епителни клетки ARPE-19. Следователно проучването предлага тази циркулярна РНК като ефективна терапевтична и диагностична мишена за борба с диабетната ретинопатия [2]. По подобен начин Jing Yang и колегите му използваха ARPE-19 клетки и предоставиха информация за патогенезата на диабетната ретинопатия. Те установиха, че инхибирането на lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) може да потисне възпалителния отговор и епителиално-мезенхимния преход на ARPE-19 клетки, третирани с високи нива на глюкоза [3].
- Тестване на лекарства: Клетките ARPE-19 се използват за оценка на ефикасността и безопасността на лекарства и съединения, като помагат за разработването на лечения или терапии за ретинални заболявания. Например, проучване, проведено през 2019 г., установи защитните ефекти на биоактивните вещества от Syzygium malaccense срещу стреса, предизвикан от водороден пероксид, в човешките пигментни епителни клетки на ретината, ARPE-19 [4]. След това едно проучване установи терапевтичната роля на екстракта от Prunella vulgaris var. L срещу уврежданията, предизвикани от синята светлина, в ARPE-19 клетки и миши модел [5].
5. Клетки ARPE-19: Научни публикации
По-долу са представени някои интересни научни публикации, посветени на ретиналните пигментни епителни клетки ARPE-19.
Оценка на реакциите на микроРНК в ARPE-19 клетки срещу оксидативния стрес
Тази научна статия беше публикувана през 2018 г. в списанието Cutaneous and Ocular Toxicology. Това проучване оцени експресията на микроРНК в отговор на оксидативния стрес, предизвикан в човешките ретинални пигментни епителни клетки ARPE-19 чрез третиране с водороден пероксид.
Тази публикация в World Journal of Stem Cells (2021) предлага, че кондиционираната среда на ARPE-19 клетки съдържа растежни фактори, които насърчават невроналната диференциация на мезенхимни стволови клетки, извлечени от мастна тъкан.
Това проучване беше публикувано в International Journal of Molecular Sciences (2019). В него се посочва, че кверцетинът предпазва от стимулираното от IL-1β освобождаване на хемокини в ARPE-19 клетки, като предотвратява активирането на MAPK и NF-κB каскадите, за да подобри възпалителния отговор.
Тази научна статия беше публикувана в International Journal of Molecular Sciences (2018). Това проучване оцени възможните ефекти на оксидативния стрес и възпалението върху функциите на SIRT1 (Sirtuin 1) и DNMT (ДНК метилтрансферази), както и върху метилирането на LINE-1 (дълъг разпръснат ядрен елемент-1) в ARPE-19 клетки.
Тази статия в Antioxidants (2022) установи, че екстрактите от цветове на Chrysanthemum boreale оказват защитен ефект срещу увреждане на ретината, предизвикано от N-ретинилиден-N-ретиниетаноламин (A2E) в ARPE-19 клетки.
Ресурси за клетъчната линия ARPE-19: протоколи, видеоклипове и др.
ARPE-19 е широко използвана клетъчна линия на ретиналния епител. Наличните ресурси, обхващащи протоколите за култивиране и трансфекция на ARPE-19 клетки, са изброени тук:
- Трансфекция на ARPE-19: Това видео е стъпка по стъпка ръководство за изучаване на протокола за трансфекция на клетъчната линия ARPE-19.
Ето някои ресурси, описващи протокола за култивиране на ARPE-19 клетки:
- Протокол за култивиране на ARPE-19: Този линк съдържа информация за култивирането и поддържането на ARPE-19. Той включва информация за средата за ARPE-19, условията за култивиране, протоколите за субкултивиране и работата с пролиферативни и криоконсервирани култури.
Източници
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. и X. Kang, hsa_circ_0041795 допринася за увреждането на човешките пигментни епителни клетки на ретината (ARPE 19), предизвикано от високи нива на глюкоза, чрез абсорбиране на miR-646 и активиране на VEGFC. Gene, 2020. 747: стр. 144654.
- Yang, J. и др., Потискането на SNHG1 инхибира епително-мезенхимния преход и възпалителния отговор на ARPE-19 клетки, предизвикан от високи нива на глюкоза. J Inflamm Res, 2021. 14: стр. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Защитен ефект на производните на мирицетин от Syzygium malaccense срещу стреса, предизвикан от водороден пероксид в ARPE-19 клетки. Molecular vision, 2019. 25: стр. 47.
- Kim, J., К. Чо и С.-Й. Чун, Защитен ефект на екстракт от Prunella vulgaris var. L срещу увреждания, предизвикани от синя светлина, в ARPE-19 клетки и ретината на мишки. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: стр. 622-631.