Клетъчна линия A375 – Ръководство за изследвания върху меланома

A375 е клетъчна линия от човешки меланом, широко използвана в токсикологичните и имуноонкологичните изследвания. Изследователите използват тази клетъчна линия за изучаване на биологията на рака и сигналните пътища, за тестване или скрининг на потенциални противоракови средства, както и за разработване на нови и ефективни терапевтични средства.

Произход и общи характеристики на клетките A375

Знанието за произхода и общите характеристики на клетъчната линия може да ви помогне да планирате нейното използване в научните изследвания. Тази част от статията ще обхване произхода и характеристиките на клетъчната линия A375. Например, какво представлява клетъчната линия A375? Какви са характеристиките на клетъчната линия A375? Откъде произхождат клетките A375? Каква е морфологията на меланомните клетки A375? Какъв е размерът на клетките A375?

• Клетъчната линия A375 за рак на кожата произхожда от експлантатна култура на солиден тумор на 54-годишна жена с малигнен меланом [1].
• Клетките A375 имат епителиоподобна морфология.
• Размерът на клетките A375 е относително по-малък в сравнение с други клетъчни линии. Те имат диаметър от около 12 µm.
• Меланомните клетки A375 са хипотриплоидни. Модалният брой хромозоми за тази клетъчна линия е 62. Обикновено всяка клетка има девет маркерни хромозоми и по една копия от нормалните хромозоми N2, N6 и N22.

Клетки A375: Информация за клетъчната култура

Клетъчните култури A375 са лесни за поддържане. Те нямат специфични изисквания за клетъчна култура. Тази секция ще ви помогне да научите необходимата информация за клетъчната култура. Например, какво е времето за удвояване на A375. Каква е средата за клетъчната линия A375? Каква е плътността на засяване на A375? Клетките на меланома A375 прилепват ли?

Ключови моменти при култивирането на клетки A375

Време за удвояване на популацията:

Времето за удвояване на A375 е 20 часа.

Прилепващи или в суспензия:

A375 е адхезивна клетъчна линия на човешки меланом.

Плътност на засяване:

Плътност от 1 x 10⁴ клетки/cm² е идеална за клетъчни култури A375. Адхезивните клетки се изплакват с 1 x фосфатен буферен разтвор (PBS) и се инкубират с разтвор за пасажиране (Accutase). След това към клетките се добавя културална среда и се центрофугират. Събраните клетки се ресуспендират в културална среда и се разпределят в нови колби за растеж.

Среда за растеж:

DMEM се препоръчва като идеална среда за A375, когато е допълнена с 10% фетално телешко серум (FBS), 4,5 g/L глюкоза, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-глутамин и 1,0 mM натриев пируват. Средата за A375 трябва да се подменя 2-3 дни в седмицата.

Условия за отглеждане:

Меланомните клетки A375 се отглеждат във влажен инкубатор (37 °C) с 5% CO2.

Съхранение:

Замразените A375 клетки трябва да се съхраняват при температура под -150 °C във фазата на пари на течен азот или в електрически фризер.

Процес на замразяване и среда:

За замразяване на клетъчната линия A375 се използват среди CM-1 или CM-ACF. Избран е процес на бавно замразяване, който позволява постепенно понижаване на температурата с 1 °C, за да се защити жизнеспособността на клетките.

Процес на размразяване:

Флаконът със замразени меланомни клетки A375 се разклаща бързо във водна баня в продължение на 40 до 60 секунди, докато остане само малък леден буцик. Клетките се добавят към свежа среда и се центрофугират, за да се отстранят елементите на средата за замразяване. Полученият клетъчен пелетен остатък се ресуспендира отново и се изсипва в нови колби.

Ниво на биологична безопасност:

Културите A375 се обработват и поддържат в лабораторни условия с ниво на биологична безопасност 1.

Приложения на клетъчната линия A375 в научните изследвания

Клетъчната линия A375 има широко приложение в изследванията в областта на рака. Ето някои от най-често срещаните области, в които се използват клетки A375.

• Изследвания в областта на рака: Клетките A375 имат широко приложение в изследванията на меланома. Изследователите използват тези клетки, за да проучват биологията на рака на кожата, процесите и основните механизми на клетъчната сигнализация, включително клетъчната пролиферация, миграция и инвазия. Това може да помогне на изследователите да идентифицират нови молекулярни терапевтични цели. Проучване, проведено от Лин Жу и колеги през 2019 г., използва силно агресивни меланомни клетки A375 и установи ролята на микроРНК-3662 за растежа и инвазията на меланомните клетки A375. Резултатите от проучването сочат, че микроРНК-3662 се насочва към гена ZEB1 и регулира растежа на меланомните клетки in vitro и in vivo в туморния модел A375 [2]. По подобен начин, проучване, проведено през 2018 г., установи, че PI3K/AKT и MAPK/ERK пътищата са свързани с пролиферацията и метастазирането на клетъчната линия A375 [3].
• Откриване и тестване на лекарства: Клетъчната линия A375 е полезен in vitro туморен модел за тестване и скрининг на потенциални противоракови средства. Изследователите оценяват токсичността и ефикасността на нови химиотерапевтични лекарства, съединения и други терапии, като използват тези A375 меланомни клетки. Например, едно проучване изследва противораковите свойства на микро- и нановезикули, извлечени от грейпфрут, върху човешки меланомни ракови клетки A375. Резултатите разкриха, че микро- и нановезикулите предизвикват спиране на клетъчния цикъл и апоптоза и възпрепятстват генната експресия при клетъчната пролиферация, миграция и инвазия [4].

Клетки A375: Публикации

Тук са споменати някои значими научни публикации, в които се разглеждат клетките A375.

Витамин D и неговите аналози с ниско калциево съдържание модулират противораковите свойства на цисплатин и дакарбазин в клетъчната линия A375 на човешки меланом

Това проучване беше публикувано в Journal of Oncology през 2019 г. Проучването предложи, че съвместното лечение с витамин D и неговите аналози подобрява противораковата активност на цисплатина и дакарбазина в клетките на меланом A375.

In vitro оценка на антимеланомните ефекти (клетъчна линия A375) на гела и екстрактите от цели листа на избрани видове алое

Това проучване беше публикувано в списанието „Journal of Herbal Medicine“ през 2022 г. Проучването изследва антимеланомните ефекти на гела от алое вера върху меланомни клетки A375.

Член 2 на семейството на фермитинът спомага за прогресията на меланома чрез усилване на свързването на p-α-Pix с Rac1 за активиране на MAPK пътя

Това проучване, публикувано в списанието „Oncogene“ (2021 г.), предлага хипотезата, че членът на семейството на фермитин 2 (FERMT2 или kindlin-2) насърчава прогресията на меланома чрез активиране на MAPK посредством свързване с p-α-Pix и Rac1.

FARP1 улеснява клетъчната пролиферация чрез модулиране на MAPK сигналния път при кожен меланом

Това проучване, публикувано в The American Journal of Dermatopathology (2019), предлага, че FARP1 може да улеснява развитието и прогресията на кожния меланом. По този начин той може да бъде полезна терапевтична мишена.

Цитотоксичен и апоптотичен потенциал на екстракти от Phyllodium elegans върху човешки ракови клетъчни линии

Тази научна статия е публикувана в Bioengineered (2019). Това проучване изследва цитотоксичната и апоптотичната активност на екстракт от растението Phyllodium elegans върху човешки карциномни клетъчни линии, включително A375.

Ресурси за клетъчната линия A375: протоколи, видеоклипове и др.

По-долу са изброени няколко онлайн ресурса, посветени на клетките A375.

• Трансфекция на клетки A375: Това видео урок ще ви помогне да научите стъпка по стъпка как се извършва трансфекция на клетки A375.
• Клетъчна култура: Това видео съдържа много полезна информация относно култивирането на клетъчни линии.

Протоколите за клетъчна култура за клетки A375 са изброени тук.

• Клетъчна линия A375: Този линк съдържа полезна информация за култивирането и поддържането на клетъчната линия A375, включително среди за A375 и работа с замразени и пролифериращи култури A375.

Източници

1. Avram, S., et al., Стандартизация на модели на човешки меланом A375 върху хориоалантоичната мембрана на пилешки ембриони и голи мишки Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): стр. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 се насочва към ZEB1 и отслабва инвазията на високоагресивната клетъчна линия на меланом A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: стр. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Оксифадихалкон С инхибира пролиферацията и метастазирането на меланомни клетки A375 чрез потискане на PI3K/Akt и MAPK/ERK пътищата. Life sciences, 2018. 206: стр. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Микро- и нановезикулите, извлечени от грейпфрут, показват отличителни метаболомни профили и противоракови дейности в клетъчната линия на човешки меланом A375. Cells, 2020. 9(12): стр. 2722.