خلايا HuH7: بوابة لأبحاث سرطان الكبد وفيروس التهاب الكبد الوبائي سي
يمثل خط الخلايا HuH7، المستمد من ورم الكبد البشري، مجموعة خالدة من الخلايا الشبيهة بالخلايا الظهارية المسببة للأورام. ويُستخدم هذا الخط، إلى جانب مشتقاته HuH7.5 و HuH7.5.1، كبديل عملي للخلايا الكبدية الأولية في السياقات التجريبية. ويستخدم بشكل أساسي في نماذج زراعة الخلايا لدراسة عدوى فيروس التهاب الكبد C (HCV) والفيزيولوجيا المرضية لسرطان الكبد.
- وسط النمو
- انظر صفحة المنتج
- وقت التضاعف
- انظر صفحة المنتج
- نوع النمو
- ملتصق
- مستوى السلامة الحيوية
- BSL-1
- متوفر من
- Cytion — طلب HuH7
أصل وخصائص خلايا HuH7
من الضروري فهم أصول خط الخلايا HuH7 وخصائصه الرئيسية وظروف الاستزراع المثلى له قبل استخدامه في الأبحاث.
تم إنشاء خط الخلايا HuH7 بواسطة Sato, J و Nakabayshi, H في عام 1982، وهو مشتق من سلالة سرطانية من خلايا الكبد عالية التمايز. وقد تم الحصول عليه في الأصل من سرطان الخلايا الكبدية لدى رجل ياباني يبلغ من العمر 57 عامًا. تتميز خلايا HuH7 بقدرتها على إنتاج مواد مختلفة ذات صلة فسيولوجية، مثل الألبومين والبروتين ألفا-فيتوبروتين، وتُظهر هذه الخلايا قابلية عالية للإصابة بفيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV)، مما يجعلها مناسبة للاستخدام في أنظمة تكاثر فيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV). هذه الميزة تجعل خط الخلايا ذا قيمة كبيرة لفحص وتطوير علاجات مضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV). تظهر خلايا HuH7 شكلاً شبيهاً بالخلايا الظهارية، مع شكل سداسي، وتلتصق بالأسطح لتشكل طبقات أحادية ثنائية الأبعاد أثناء النمو. في المتوسط، يبلغ قطر خلايا HuH7 21.9 ميكرومتر، وتميل إلى مظهر أكبر ومسطح. يتميز خط الخلايا HuH7 بعدد كروموسومات غير متجانس، يتراوح عادةً بين 55 و63، مما يعكس التباين الجيني داخل مجموعة الخلايا. هذا التباين هو نتيجة للضغوط الانتقائية التي تواجهها الخلايا أثناء زراعتها، وقد يختلف باختلاف ظروف المختبر.
تحليل مقارن: سلالات الخلايا HuH7 مقابل HuH7.5
يختلف خط الخلايا HuH7.5، وهو مشتق من HuH7، بشكل أساسي بسبب طفرة خاطئة في جين RIG-I (DDX58)، وهو أمر بالغ الأهمية للاستجابة المضادة للفيروسات داخل الخلايا. تعزز هذه الطفرة قدرة خلايا HuH7.5 على تكاثر الحمض النووي الريبي (RNA) الجيني ودون الجيني لفيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV)، مما يميزها عن خط الخلايا الأم HuH7 من حيث فائدتها في الأبحاث الفيروسية.
زراعة خلايا HuH7: البروتوكولات الأساسية لتحقيق النمو الأمثل
تتطلب خلايا HuH7، التي تعد جزءًا لا يتجزأ من عدد لا يحصى من الدراسات البحثية، ظروفًا دقيقة للاستزراع حتى تنمو بشكل جيد. يتعمق هذا القسم في الجوانب الأساسية لاستزراع خلايا HuH7، مما يضمن الحفاظ على أهميتها الفسيولوجية في الأبحاث العلمية.
ديناميكيات وقت التضاعف
عادةً ما يكون وقت التضاعف لخلايا HuH7 هو 24 ساعة، على الرغم من أن الاختلافات في وسائط زراعة الخلايا يمكن أن تطيل هذه الفترة إلى 36-48 ساعة، مما يسلط الضوء على تأثير الظروف البيئية على تكاثر الخلايا.
خصائص الالتصاق
تشكل خلايا HuH7 في الغالب طبقة أحادية ثنائية الأبعاد، تلتصق بأسطح أطباق وقوارير الاستزراع، مما يؤكد تفضيلها لركيزة مادية مستقرة على الاستزراع المعلق.
الكثافة المثلى للزرع
يعد الحفاظ على تراصف خلايا HuH7 في نطاق 30-90٪ أمرًا بالغ الأهمية لمنع انخفاض معدلات التكاثر إلى ما يزيد عن 90٪ من التراصف. تسهل إعادة الاستزراع باستخدام أكوتاز عملية الانفصال، مما يتيح البذر بكثافات مخصصة لاحتياجات التجربة، تتراوح من المستويات المثلى (2×10⁴ خلية/سم²) إلى مستويات التشبع (6×10⁴ خلية/سم²).
المتطلبات الغذائية
يوفر وسط Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) ذو المحتوى العالي من الجلوكوز والمكمل بـ 10٪ من مصل الأبقار الجنينية (FBS) بيئة غذائية مثالية لخلايا HuH7. يعد تجديد الوسط بانتظام، ويفضل أن يكون ذلك 2-3 مرات أسبوعيًا، أمرًا بالغ الأهمية للحفاظ على صحة الخلايا.
الظروف البيئية
تدعم الحاضنة المرطبة والمضبوطة على 5٪ CO₂ و37 درجة مئوية زراعة خلايا HuH7 بشكل مثالي، حيث تحاكي الظروف الفسيولوجية المواتية للأنشطة الخلوية.
التخزين طويل الأمد
للحفظ لفترات طويلة، يجب تخزين خلايا HuH7 في المرحلة البخارية من النيتروجين السائل، مما يحافظ على قابليتها للحياة من أجل الأبحاث المستقبلية.
الحفظ بالتبريد والاستعادة
يعد استخدام تقنية التجميد التدريجي أمرًا بالغ الأهمية للحفاظ على حيوية الخلايا أثناء الحفظ بالتبريد. يجب تعليق الخلايا في وسط تجميد مصمم خصيصًا، مثل CM-1، لضمان انتقال سلس إلى التخزين بالتبريد. عند الذوبان، من الضروري إعادة إحياء الخلايا بسرعة ولكن بلطف في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية، يلي ذلك الطرد المركزي للتخلص من وسط التجميد، وإعادة تعليقها في وسط نمو جديد، من أجل إعادة إنشاء مزارع الخلايا.
اعتبارات السلامة الحيوية
يُنصح بالالتزام ببروتوكول السلامة الحيوية من المستوى 1 عند التعامل مع خط الخلايا HuH7 وتكاثره، بما يتماشى مع معايير السلامة والأخلاقيات في بيئات المختبرات.
من خلال الالتزام بشروط الاستزراع الموضحة بدقة، يمكن للباحثين ضمان النمو القوي والأهمية الفسيولوجية لخلايا HuH7 في استكشافاتهم العلمية، مما يمهد الطريق لاكتشافات رائدة في أبحاث سرطان الكبد وفيروس التهاب الكبد C.
اكتشف خلايا HuH7 لتحقيق إنجازاتك العلمية
خلايا HuH7: المزايا والعيوب
يقدم خط الخلايا HuH7 مزايا وقيودًا في الوقت نفسه. دعونا نستعرض الإيجابيات والسلبيات المحتملة لهذا الخط الخلوي، حيث قد يساعدك ذلك في تحديد ما إذا كان مناسبًا لتجاربك.
مزايا خط الخلايا HuH7
تتمتع خلايا HuH7 بالعديد من السمات المميزة التي تجعلها جذابة للاستخدام في الأبحاث.
- سهولة التكاثر: على عكس سلالات الخلايا الكبدية البشرية الأخرى، يمكن زراعة سلالة الخلايا HuH7 بسهولة دون إضافة مصل؛ ومع ذلك، توصي CLS باستخدام RPMI 1640 مع 10% FBS و2 ملم L-glutamine. تفرز خلايا HuH-7 عامل نمو يساعد الخلايا على النمو دون مصل.
- مرونة التحويل الجيني: يستخدم خط الخلايا HuH7 على نطاق واسع لأغراض التحويل الجيني نظرًا لاستجابته العالية لجينوم فيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV). لذلك، تعد هذه الخلايا محورية لفحص وتطوير الأدوية المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV).
- بديل لخلايا الكبد البشرية: خط الخلايا HuH7 هو بديل ممتاز لخلايا الكبد البشرية. يمكن أن يساعد الباحثين في دراسة ناقلات الأدوية الكبدية وفهم تفاعل بعض الأدوية مع MRPs (البروتينات المرتبطة بمقاومة الأدوية المتعددة).
- تطوير نموذج الفأر المزروع: تم استخدام خلايا HuH7 لإنتاج نموذج الفأر المزروع المنشأ من خط الخلايا. قد يوفر هذا النموذج الحيواني رؤى قيمة للباحثين حول مثبطات بروتين كيناز والعلاجات المضادة للسرطان.
- أبحاث السرطان: خط الخلايا HuH7 هو خط خلايا سرطان الكبد البشري، والذي يساعد الباحثين على إجراء دراسات حول سرطان الكبد.
محدودية خط الخلايا HuH-7
هناك بعض القيود المرتبطة بزراعة خط الخلايا HuH7.
التلوث الميكروبي: يعد التلوث البكتيري المشكلة الأكثر شيوعًا في زراعة الخلايا. عند حدوث عدوى، يمكن تمييزها من خلال تغير درجة الحموضة (pH) وعكارة وسط الاستزراع. من بين أنواع التلوث البكتيري، عادةً ما يكون التلوث بالميكوبلازما غير واضح. ومع ذلك، فإنه يؤثر ببطء على الشكل المورفولوجي والتعبير الجيني وخصائص أخرى لسلسلة الخلايا.
فترة الاستزراع: على الرغم من أن خط الخلايا HuH7 خالد، إلا أن تجاوز فترة الاستزراع يمكن أن يؤثر على صحة الخلايا تدريجيًا. وقد يؤثر ذلك على معدل التكاثر والتعبير الجيني، مما قد يقلل من قابلية تكرار النتائج. بالنسبة لخط الخلايا HuH7، يجب أن يظل عدد المرات أقل من 20-25.
تطبيقات خلايا HuH-7
يوفر خط الخلايا هذا المشتق من ورم الكبد البشري العديد من التطبيقات البحثية. نصف هنا بعض مجالات البحث التي تستخدم خط الخلايا HuH7.
مقاومة الأدوية: HuH7 هو خط خلوي لسرطان الخلايا الكبدية (HCC) يمكن استخدامه لدراسة مقاومة الأدوية ضد علاجات سرطان الكبد المحتملة. استخدمت دراسة أجريت في عام 2021 خلايا HuH7، التي تم جعلها تجريبيًا مقاومة للسورافينيب، لتطوير علاجات جديدة وفعالة، أي الببتيدات ذاتية التجميع المتراكمة في الميتوكوندريا.
رؤى وراثية وتوصيف جزيئي من خلال خلايا HuH7: مكنت سلالات خلايا HuH7 المتميزة، بما في ذلك المشتقات والمتغيرات المختلفة، من فهم أعمق للتعبير الجيني ودور علامات جينومية محددة في المرض. تم تطبيق تقنيات مثل التحليل الطيفي بالرامان، التي دافع عنها باحثون مثل إيفجيني جلاديلين، على خلايا HuH7 للتوصيف الجزيئي والخلوي، مما كشف عن رؤى حول الاستجابة الخلوية للعدوى الفيروسية. وقد سهّلت إمكانات التحليل الطيفي بالرامان، جنبًا إلى جنب مع طرق مثل البروتيوميات الكمية، استكشاف استجابات الخلايا المضيفة، بما في ذلك استجابة الإنترفيرون والتغيرات في قطرات الدهون، والتي تعتبر حاسمة لفهم تكاثر فيروس التهاب الكبد الوبائي (HCV) وتأثير متلازمة الالتهاب الرئوي الحاد (SARS). يمكن دراسة التعبير عن العلامات المسببة للسرطان المختلفة لفهم سلوكها استجابةً لأي علاج، كما في دراسة استخدمت خلايا HuH7 لدراسة تأثير مركب الكامبفيرول على نمط التعبير عن جينات مسار MMP9 وAKT. تنظم هذه المسارات ورم خبيث الكبد وانتشاره. كما بحثت دراسة حديثة أخرى دور جين سلسلة إشارات Wnt/β-catenin في بقاء ونمو خلايا سرطان الخلايا الكبدية.
تطوير الأدوية: تُستخدم خلايا HuH7 على نطاق واسع في دراسات فحص وتطوير الأدوية المضادة لسرطان الكبد. وقد أُجريت دراسات متعددة للتحقيق في الإمكانات المثبطة للعديد من المستخلصات النباتية والمركبات النباتية والجسيمات النانوية والعوامل العلاجية الأخرى ضد سرطان الخلايا الكبدية. أجريت دراسة في عام 2022 لبحث الخصائص المؤدية إلى موت الخلايا المبرمج والمضادة للسرطان لنويدات مشعة ضد سرطان الخلايا الكبدية باستخدام خط خلايا HuH7.
خلايا HuH7: نقطة محورية في أبحاث الفيروسات والتحليل الخلوي أصبحت خلايا HuH7 حجر الزاوية في دراسة العدوى الفيروسية والأمراض المعدية، ولا سيما فيروس التهاب الكبد C (HCV) وتفاعلاته مع فيروسات كورونا مثل SARS-CoV-2، المسؤول عن مرض فيروس كورونا 2019 (COVID-19). وقد أدى تطوير أنظمة زراعة الخلايا التجريبية لفيروس التهاب الكبد C (HCVcc) باستخدام خلايا HuH7 إلى تقدم كبير في قدرتنا على دراسة عملية التكاثر المعقدة لفيروس التهاب الكبد C والعوامل المضيفة الضرورية لعدوى فيروس التهاب الكبد C. ويشمل ذلك فحص كفاءة تكاثر الحمض النووي الريبي لفيروس التهاب الكبد C وإنتاج الفيروسات المعدية. توفر سلالات خلايا HuH7 المتميزة، بما في ذلك المتغيرات المتقادمة والمصابة، مجموعة متنوعة لدراسة تعدد العدوى، وانتشار الفيروسات، وآليات التثبيط ضد فيروسات مثل SARS.
باختصار، تشمل دراسة خلايا HuH7 نطاقًا واسعًا من الاستفسارات العلمية، بدءًا من الآليات الجزيئية التي تقوم عليها العدوى الفيروسية وصولاً إلى الاستجابات الخلوية التفصيلية التي تثيرها هذه العوامل الممرضة. من خلال عدسة أبحاث HuH7، تواصل الأوساط العلمية الكشف عن الديناميات المعقدة للتفاعلات بين المضيف والفيروس، مما يساهم في تطوير استراتيجيات مضادة للفيروسات وفهمنا للعوامل الخلوية المحددة للأمراض الفيروسية.
منشورات HuH-7
هناك عدد كبير من المنشورات التي تستخدم خط الخلايا HuH7 لأغراض مختلفة. هنا، ذكرنا بعض المنشورات الحديثة والمهمة.
نُشرت هذه الدراسة في مجلة Nature Scientific Reports في عام 2021. استخدمت الدراسة خلايا سرطان الكبد المقاومة للسورافينيب (سلسلة خلايا HuH7) التي تم تحفيزها تجريبياً لدراسة التأثيرات المؤدية إلى موت الخلايا المبرمج والمضادة للأورام لـ Mito-FF (الببتيدات ذاتية التجميع المتراكمة في الميتوكوندريا) التي تم تطويرها مؤخراً.
نُشرت هذه المقالة في مجلة Environmental Toxicology بواسطة Po-Chung Ju وزملاؤه في عام 2021. في هذه الدراسة، استكشف الباحثون الإمكانات المضادة للانتشار لمركب نباتي، وهو الكامفيرول، ضد خلايا سرطان الخلايا الكبدية (HuH7). بالإضافة إلى ذلك، درسوا أيضًا مسارات الإشارات التي تنظم انتشار وغزو خلايا سرطان الكبد.
نُشرت هذه الورقة البحثية في مجلة Drug Development Research في عام 2022. تشرح هذه الدراسة الدور المضاد للسرطان لمركب دافنيتين ضد سرطان الخلايا الكبدية. يثبط هذا المركب المشتق من النبات إشارات Wnt/β-catenin لتقييد نمو الخلايا السرطانية.
تصف هذه الورقة البحثية، التي نُشرت في مجلة "تصميم الأدوية وتطويرها وعلاجها"، دور إشارات EGFR في نمو سرطان الخلايا الكبدية وانتشاره. استخدمت الدراسة خلايا HuH7 لدراسة التأثير المثبط لـ RGFP966، وهو مثبط لـ histone deacetylase 3 (HDAC3)، ضد سرطان الكبد عن طريق تثبيط جينات مسار EGFR.
تشير هذه الدراسة المنشورة في مجلة Cells إلى استخدام خلايا HuH7 في دراسة الإمكانات المضادة لسرطان الخلايا الكبدية لنويدات مشعة، مثل بيرينات الرينيوم.
نُشرت هذه الدراسة في مجلة International Journal of Nanomedicine. استخدمت الدراسة خلايا HuH7 لاستكشاف النشاط المضاد للفيروسات لجسيمات النانو من مادة الكيتوزان المحتوية على الكركمين ضد النمط الجيني 4a لفيروس التهاب الكبد C.
موارد HuH-7: بروتوكولات ومقاطع فيديو والمزيد
هناك العديد من الموارد المتاحة لزراعة خط الخلايا HuH7 وصيانته. هنا، ستتعرف على الموارد المتاحة لشرح بروتوكولات زراعة الخلايا والتحويل الجيني لـ HuH7 ومقاطع الفيديو التعليمية.
بروتوكولات زراعة الخلايا
يمكن أن تساعدك الموارد التالية على البدء في زراعة خط الخلايا HuH7 وصيانته.
معلومات وموارد حول زراعة خلايا HuH-7: يحتوي هذا الموقع على الكثير من المعلومات المفيدة، بما في ذلك بروتوكول إعادة زراعة خط الخلايا HuH7، وتخزينه، والتعامل معه.
- بروتوكول زراعة الخلايا HuH7
بروتوكولات نقل الجينات لخلايا HuH7
يتم نقل الخلايا HuH7 بعدة طرق. توفر الموارد التالية قدرًا كبيرًا من المعلومات المتعلقة ببروتوكولات النقل، والمواد الكيميائية والكواشف المطلوبة، والنصائح المفيدة، والاحتياطات.
- تحويل جيني لـ HUH-7: يقدم هذا الموقع تفاصيل حول الكواشف المستخدمة في التحويل الجيني لسلسلة الخلايا HuH7. علاوة على ذلك، يوفر أيضًا الروابط التالية لبروتوكول التحويل الجيني البسيط لـ Huh7 وبروتوكول التحويل الجيني لـ Huh7 CRISPR/Cas9.
مقاطع فيديو متعلقة بسلسلة خلايا HuH7
هناك العديد من مقاطع الفيديو التعليمية المتاحة حول بروتوكولات الاستزراع الفرعي الأساسية، والتلقيح، والتحويل الجيني، والمزيد.
- تمرير الخلايا: أساسيات زراعة الخلايا: يتناول هذا الفيديو بروتوكول الزراعة الأساسي لسلسلة الخلايا.
نتوقع أن تساعدك المعلومات الواردة في هذه المقالة في اكتساب المعرفة الأساسية والمتقدمة حول خط الخلايا HuH7 قبل العمل عليه. إذا كنت ترغب في استخدام هذه الخلايا في عملك البحثي، يمكنك طلبها منا.