وسط زراعة الخلايا
تتطلب الخلايا المزروعة تحكماً بيئياً دقيقاً لنموها وصيانتها بنجاح. يتضمن النهج الشامل ضمان العقم وتوفير المغذيات واستقرار الأس الهيدروجيني والتحكم في درجة الحرارة.
الظروف المعقمة وتوفير المغذيات
لمنع التلوث وضمان صلاحية الخلايا، فإن البيئة المعقمة أمر بالغ الأهمية. ويتم تحقيق ذلك عادةً من خلال تقنيات التعقيم والمعدات المتخصصة مثل أغطية التدفق الصفحي. يتم توفير المغذيات عن طريق وسائط الاستزراع، والتي تحتوي على مزيج من المكونات الأساسية، بما في ذلك:
- الأملاح غير العضوية: حيوية للحفاظ على التوازن التناضحي وتوفير الأيونات الضرورية للأنشطة الخلوية.
- الكربوهيدرات: تعمل كمصادر للطاقة، والجلوكوز هو السكر الأكثر استخدامًا.
- الأحماض الأمينية: لبنات بناء البروتينات؛ بعضها ضروري ولا يمكن للخلايا تصنيعها.
- الفيتامينات: تعمل كعوامل مساعدة للتفاعلات الأنزيمية؛ فيتامينات ب ضرورية لعملية الأيض الخلوي.
- الأحماض الدهنية والدهون: مكونات أساسية لسلامة غشاء الخلية ووظيفتها.
- البروتينات والببتيدات: في الوسائط الخالية من المصل، تحل محل عوامل النمو والبروتينات الرابطة التي يوفرها المصل عادةً.
- المصل: غالبًا ما يتم تضمينها كمصدر لعوامل النمو، على الرغم من أن البدائل الخالية من المصل تكتسب شعبية لتقليل التباين ومخاطر التلوث.
- استقرار الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة: تتطلب الخلايا عادةً نطاق أس هيدروجيني يتراوح بين 7.2 و7.4 للنمو الأمثل. يتم تنظيم ذلك من خلال أنظمة التخزين المؤقت، والتي يمكن أن تكون إما قائمة على ثاني أكسيد الكربون/بيكربونات أو كيميائيًا باستخدام عوامل مثل HEPES. يتم الحفاظ على درجة الحرارة حوالي 37 درجة مئوية لمحاكاة الظروف الفسيولوجية.
متغيرات الوسائط والتحسين
على مر السنين، تم تطوير وسائط قاعدية مختلفة لتلبية أنواع معينة من الخلايا:
- المحاليل الملحية المتوازنة: تشكل أساس تركيبات وسائط أكثر تعقيدًا.
- الوسائط القاعدية، مثل الوسط الأساسي الأدنى (MEM)، وتستخدم للمزارع الأولية والخلايا ثنائية الصبغيات.
- الوسائط المعقدة: مثل RPMI 1640، وهي مناسبة لمجموعة أوسع من خلايا الثدييات.
- الوسائط الخالية من المصل: مصممة خصيصاً لتطبيقات محددة، مما يقلل من خطر التلوث من المكونات المشتقة من الحيوانات.
تحضير الوسائط ومراقبة الجودة
يمكن تحضير الوسائط داخلياً من المكونات الأساسية أو شراؤها كمحاليل جاهزة. تتضمن مراقبة الجودة ضمان عدم وجود ملوثات والتركيز المناسب للمكونات. وتتطلب إعادة تكوين الوسائط المسحوقة ماءً عالي الجودة، ويجب تعقيم الوسائط المحضرة عادةً عن طريق الترشيح.
استخدام المصل واعتبارات السلامة
يعد استخدام المصل، وخاصة مصل البقر الجنيني (FBS)، شائعًا بسبب محتواه الغني بعوامل النمو. ومع ذلك، وبسبب المخاوف المتعلقة بأمراض مثل جنون البقر، يتم اتباع بروتوكولات صارمة للاختبار والتوريد لضمان السلامة.
الإرشادات والاتجاهات التنظيمية
توجّه اللوائح التنظيمية المواد المشتقة من الحيوانات في المستنبتات، مع التأكيد على أهمية تحديد المصادر والاختبارات. وينعكس الاتجاه نحو الاستغناء عن هذه المواد حيثما أمكن في تطوير بدائل لوسائط خالية من المصل وخالية من الحيوانات.
وفي الختام، تلعب وسائط زراعة الخلايا دورًا أساسيًا في نمو الخلايا والحفاظ عليها في المختبر. يتم اختيار كل مكون بعناية وتحسينه لمحاكاة البيئة داخل الجسم الحي، مما يضمن للخلايا ظروف النمو والبقاء والوظائف.
ما يميز DMEM عن الوسائط الأخرى هو تركيبته الفريدة. فهو يحتوي على زيادة مذهلة بمقدار أربعة أضعاف في تركيز الأحماض الأمينية والفيتامينات مقارنةً بوسيط النسر الأساسي الأدنى الأصلي. تم تطوير DMEM في البداية باستخدام جلوكوز منخفض (1 جم/لتر) وبيروفات الصوديوم، وكثيراً ما يستخدم DMEM بمستويات جلوكوز أعلى، إما مع أو بدون بيروفات الصوديوم. وتجدر الإشارة إلى أن DMEM لا يحتوي على بروتينات أو دهون أو عوامل نمو، مما يستلزم استخدام مكملات. ولتحقيق النمو الأمثل، يتمثل أحد الأساليب الشائعة في تكميل DMEM بمصل بقري جنيني (FBS) بنسبة 10%. بالإضافة إلى ذلك، يستخدم DMEM نظام مخزن بيكربونات الصوديوم العازل الذي يتطلب بيئة من 5-10% من ثاني أكسيد الكربون للحفاظ على درجة الحموضة الفسيولوجية.
يُعتبر وسط النسر المعدل (DMEM) من بين الوسائط المحددة لزراعة الخلايا والأنسجة، حيث يلبي احتياجات النمو لمختلف الأنماط الظاهرية للخلايا الملتصقة. وهو يتفوق على وسط النسر الأصلي، الذي تم تطويره في الخمسينيات من القرن الماضي لزراعة خلايا الدجاج، من خلال التركيبة التكميلية المحسنة المعروفة باسم تعديل ديلبيكو. ويؤدي هذا التعديل إلى رفع محتوى أحماض أمينية وفيتامينات مختارة إلى أربعة أضعاف مقارنةً بالوسط الأصلي.
في مجال زراعة الخلايا، يؤدي وسط DMEM دورًا حيويًا كوسيط نمو لأنواع مختلفة من الخلايا، بما في ذلك الخلايا الأولية والخلايا الجذعية والخلايا المتحولة. كما يستخدم الباحثون النسخة المعدلة من وسط DMEM في مجموعة واسعة من التطبيقات البحثية، مثل اكتشاف الأدوية وهندسة الأنسجة ودراسة مسارات إشارات الخلايا.
مراقبة الجودة
مصفاة معقمة ومعقمة
التخزين ومدة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية، مع حمايته من الضوء.
بمجرد فتحه، يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم خلال 6-8 أسابيع.
ظروف الشحن
درجة الحرارة المحيطة
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. تجنب التجميد والتسخين المتكرر إلى +37 درجة مئوية، لأنه يقلل من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسيط أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة غير منضبطة مثل أجهزة الميكروويف.
في حالة استخدام جزء فقط من الوسيط، يجب إزالة الكمية المطلوبة وتسخينه إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
التركيب
الفئة
المكونات
التركيز (ملغم/لتر)
الأحماض الأمينية
الجلايسين
30.00
إل-أرجينين حمض الهيدروكلوريك
84.00
إل-سيستين 2 حمض الهيدروكلوريك
62.57
ل-جلوتامين
584.00
إل-هيستيدين H2OH2O
42.00
ل-إيسولوسين
105.00
ل-ليوسين
105.00
إل-ليسين حمض الهيدروكلوريك
146.00
ل-ميثيونين
30.00
ل-فينيل ألانين
66.00
ل-سيرين
42.00
ل-ثريونين
95.00
ل-تريبتوفان
16.00
ل-تيروزين 2 صوديوم 2H2O
103.79
ل-فالين
94.00
فيتامينات
كلوريد الكولين
4.00
د-بانتوثينات الكالسيوم
4.00
حمض الفوليك
4.00
ميو-إينوزيتول
7.20
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
4.00
البيريدوكسال حمض الهيدروكلوريك
4.00
ريبوفلافين
0.40
ثيامين حمض الهيدروكلوريك
4.00
أملاح غير عضوية
CaCl2 2 H2O
265.00
Fe(NO3)3 3 9 H2O
0.10
كلوريد الكالسيوم
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
كلوريد الصوديوم
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 NaH2PO4 2H2O
141.73
مكونات أخرى
د-الجلوكوز
4500.00
ملح الصوديوم الفينول الأحمر الفينول
15.90
بيروفات الصوديوم
110.00
ماذا يوجد في EMEM؟
EMEM هو نسخة معدلة من وسط إيجل الأساسي الأدنى، ويحتوي على محلول الملح المتوازن من إيرل والأحماض الأمينية غير الأساسية وL-الجلوتامين وبيروفات الصوديوم وبيكربونات الصوديوم. من المهم ملاحظة أن هذا المستوى من بيكربونات الصوديوم مخصص للاستخدام في الهواء بنسبة 5% من ثاني أكسيد الكربون. وللحفاظ على فعاليته، يوصى بتخزين الوسط في درجة حرارة تتراوح بين 2 درجة مئوية و8 درجات مئوية في الظلام عند عدم الاستخدام.
فيما يُستخدم EMEM؟
وسط إيجل الأساسي الأدنى (EMEM) هو وسط زراعة الخلايا الذي يمكنه الحفاظ على الخلايا في مزرعة الأنسجة. يحتوي هذا الوسط على تركيزات أعلى من الأحماض الأمينية، مما يسمح بتقريب أكثر دقة للتركيب البروتيني لخلايا الثدييات المستزرعة. يمكن استخدام EMEM لزراعة خلايا مختلفة، بما في ذلك الخلايا الليفية وخلايا خط خلايا سرطان الكبد البشري (HepG2) وخلايا الخلايا النجمية المشتقة من الخلايا الجنينية المشتقة من الدماغ البشري (PDA). ويُستخدم عادةً في وجود مصل بقري جنيني (FBS) أو مصل العجل أو مصل الحصان.
كيف يختلف EMEM عن وسائط زراعة الخلايا الأخرى؟
بينما يتشارك كل من وسط EMEM ووسط النسر المعدل (DMEM) في دولبيكو في بعض أوجه التشابه، إلا أنهما يختلفان أيضًا. فكلا الوسطين يفتقران إلى البروتين ويحتويان على الأحماض الأمينية والأملاح والجلوكوز والفيتامينات اللازمة لتزويد الخلية بالطاقة والحفاظ عليها في مزرعة الأنسجة. ومع ذلك، يتم تعديل تركيبة DMEM لتحتوي على ما يصل إلى أربعة أضعاف الفيتامينات والأحماض الأمينية وما بين ضعفين إلى أربعة أضعاف الجلوكوز مقارنةً بالوسط المتغير المتنوع EMEM. ومن الجدير بالذكر أن EMEM يختلف أيضًا عن تركيبة MEM الأصلية.
مراقبة الجودة
معقمة ومفلترة
التخزين ومدة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية، مع حمايته من الضوء.
بمجرد فتحه، يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم خلال 6-8 أسابيع.
ظروف الشحن
درجة الحرارة المحيطة
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. تجنب التجميد والتسخين المتكرر إلى +37 درجة مئوية، لأنه يقلل من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسيط أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة غير منضبطة مثل أجهزة الميكروويف.
في حالة استخدام جزء فقط من الوسيط، يجب إزالة الكمية المطلوبة وتسخينه إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
التركيب
الفئة
المكونات
التركيز (ملغم/لتر)
الأحماض الأمينية
إل-أرجينين حمض الهيدروكلوريك
126.00
إل-سيستين 2 حمض الهيدروكلوريك
31.30
ل-جلوتامين
292.00
إل-هيستيدين H2OH2O
42.00
ل-إيسولوسين
52.00
ل-ليوسين
52.00
ل-ليسين حمض الهيدروكلوريك
72.50
ل-ميثيونين
15.00
ل-فينيل ألانين
32.00
ل-ثريونين
48.00
ل-التريبتوفان
10.00
ل-تيروزين 2 صوديوم 2 ه2و2أو
51.90
ل-فالين
46.00
فيتامينات
كلوريد الكولين
1.00
فيتامينات
بانثوثينات الكالسيوم د-كالسيوم
1.00
حمض الفوليك
1.00
ميو-إنوزيتول
2.00
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
1.00
البيريدوكسال حمض الهيدروكلوريك
1.00
ريبوفلافين
0.10
ثيامين حمض الهيدروكلوريك
1.00
أملاح غير عضوية
CaCl2 2 H2O
265.00
أملاح غير عضوية
كلوريد الكالسيوم
400.00
MgSO4
97.67
كلوريد الصوديوم
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
مكونات أخرى
د-الجلوكوز
1000.00
مكونات أخرى
ملح الصوديوم الفينول الأحمر الفينول
11.00
ومن مزاياه البارزة القدرة على دعم نمو الخلايا دون الحاجة إلى مكملات المصل. وهذا يزيل التداخل المحتمل الناجم عن مكونات المصل، مما يضمن نتائج تجريبية متسقة وموثوقة. ومن خلال توفير بيئة مزرعة خالية من المصل، يوفر وسيط هام F-12 للباحثين تحكمًا أكبر في تحقيقاتهم.
ومن السمات الرئيسية الأخرى لمتوسط هام F-12 هي ملاءمته لطلاء الخلية الواحدة. وهذا يجعله خيارًا ممتازًا لمجموعة متنوعة من خطوط الخلايا، بما في ذلك خلايا CHO وخلايا الرئة وخلايا الفأر L. وتسهل تركيبة المغذيات المحسّنة للوسيط من الارتباط والنمو الفعال للخلايا المنفردة، مما يتيح إنشاء مزارع خلايا متجانسة مع تحسين قابلية التكرار.
وعلاوة على ذلك، اكتسب وسيط هام F-12 اعترافاً بأنه الوسيط المفضل لفحص السمية النسيلية (CTA). يلعب هذا الفحص دورًا حاسمًا في تقييم التأثيرات السامة للخلايا للمواد على الخلايا. ومن خلال استخدام وسيط هام F-12 في اختبار السمية النسيلية (CTA)، يمكن للباحثين تقييم تأثير مختلف المركبات أو العلاجات على الخلايا الفردية بدقة، مما يوفر رؤى قيمة حول السميات.
مراقبة الجودة
الأس الهيدروجيني = 7.2 +/
- 0.02 عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية.
تم اختبار كل دفعة للتأكد من العقم وغياب الميكوبلازما والبكتيريا.
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. يقلل التجميد والتسخين حتى +37 درجة مئوية من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسط إلى أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة لا يمكن التحكم فيها (مثل أجهزة الميكروويف).
إذا كنت تريد استخدام جزء فقط من الوسيط، أخرج هذه الكمية من الزجاجة وقم بتسخينها في درجة حرارة الغرفة.
مدة الصلاحية لأي وسيط باستثناء الوسيط الأساسي هي 8 أسابيع من تاريخ التصنيع.
التركيب
المكونات
ملغم/لتر
الأملاح غير العضوية
كلوريد الكالسيوم × 2H2O
44,00
كبريتات النحاس(II) × 5H2O
0,00
كبريتات الحديد (II) x 7H2O
0,83
كلوريد المغنيسيوم x 6H2O
122,00
كلوريد البوتاسيوم
223,65
كلوريد الصوديوم
7599,00
فوسفات هيدروجين ثنائي الصوديوملا مائي
142,04
كبريتات الزنك × 7H2O 7H2O
0,86
مكونات أخرى
د(+)
- جلوكوز لا مائي
1801,60
هايبوكسانثين
4,08
حمض اللينوليك
0,08
حمض الليبويك DL-α-Lipoic
0,21
الفينول الأحمر
1,20
بوتريسين × 2HCl
0,16
بيروفات الصوديوم
110,00
ثيميدين
0,73
NaHCO3
1176,00
الأحماض الأمينية
ل-ألانين
8,91
إل-أرجينين × حمض الهيدروكلوريك
210,70
إل-أسباراجين × H2O
15,01
ل-حمض الأسبارتيك
13,31
إل-سيستين × حمض الهيدروكلوريك × H2O
35,12
ل-ألانيل-أل-جلوتامين
217,30
حمض ل-جلوتاميك-إل-جلوتاميك
14,71
جلايسين
7,51
ل-هيستيدين × حمض الهيستيدين × حمض الهيدروكلوريك × H2O
20,96
ل-إيسولوسين
3,94
ل-لوسين
13,12
ل-ليسين × حمض الهيدروكلوريك
36,54
ل-ميثيونين
4,48
ل-فينيل ألانين
4,96
ل-برولين
34,53
ل-سيرين
10,51
ل-ثريونين
11,91
ل-تريبتوفان
2,04
ل-تيروزين
5,44
ل-فالين
11,71
فيتامينات
د(+)-بيوتين
0,01
د-كالسيوم بانتوثينات الكالسيوم
0,24
كلوريد الكولين
13,96
حمض الفوليك
1,32
ميو إينوزيتول
18,02
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
0,04
البيريدوكسين x حمض الهيدروكلوريك
0,06
ريبوفلافين
0,04
ثيامين × حمض الهيدروكلوريك
0,34
فيتامين B12
1,36
وتجمع هذه التركيبة الفريدة من نوعها بين وسط النسر المعدل من دولبيكو المعدل (DMEM) ومزيج مغذيات هام F-12 (خليط مغذيات هام F-12) بنسبة 1:1 دقيقة. وتعزز إضافة L-الجلوتامين من تركيبته.
يوفر DMEM، المشتق من وسط إيجل الأساسي الأدنى (EMEM)، تركيزًا متزايدًا من الأحماض الأمينية والفيتامينات مقارنةً بسابقه. وعلى النقيض من ذلك، يعتمد وسط هام F-12 على وسط هام F-10، مما يوفر مجموعة تكميلية من المكونات الأساسية.
لدعم النمو الأمثل للخلايا، من الممارسات الشائعة إضافة وسط DMEM:Ham's F12 بتركيز نموذجي يتراوح بين 5-10%. وتُعد هذه الإضافة ضرورية لأن الوسط يفتقر إلى هرمونات النمو والدهون والبروتينات الضرورية للنمو الخلوي.
ويتضمن DMEM:F12 لحم الخنزير F12 نظامًا عازلًا للأس الهيدروجيني وغالبًا ما يُستكمل بالفينول الأحمر، وهو مؤشر للأس الهيدروجيني. تتطلب الخلايا المستزرعة في DMEM:Ham's F12، أو أي وسط يستخدم نظام مخزن بيكربونات العازل، بيئة محكومة من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5-10% للحفاظ على مستويات الأس الهيدروجيني المناسبة.
مراقبة الجودة
معقمة ومفلترة
التخزين ومدة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية، مع حمايته من الضوء.
بمجرد فتحه، يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم خلال 6-8 أسابيع.
ظروف الشحن
درجة الحرارة المحيطة
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. تجنب التجميد والتسخين المتكرر إلى +37 درجة مئوية، لأنه يقلل من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسيط أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة غير منضبطة مثل أجهزة الميكروويف.
في حالة استخدام جزء فقط من الوسيط، يجب إزالة الكمية المطلوبة وتسخينه إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
التركيب
الفئة
المكونات
التركيز (ملغم/لتر)
الأحماض الأمينية
الجلايسين
18.75
ل-ألانين
4.45
إل-أرجينين حمض الهيدروكلوريك
147.50
إل-أسباراجين H₂O↩O
7.50
ل-حمض الأسبارتيك
6.65
ل-سيستين حمض الهيدروكلوريك H₂O
17.56
إل-سيستين 2 حمض الهيدروكلوريك
31.29
ل-حمض الجلوتاميك
7.35
ل-جلوتامين
365.00
ل-هيستيدين هيدروكلوريد الهيدروجين H₂O↩O
31.48
ل-إيسولوسين
54.47
ل-ليوسين
59.05
ل-ليسين حمض الهيدروكلوريك
91.25
ل-ميثيونين
17.24
ل-فينيل ألانين
35.48
ل-برولين
17.25
ل-سيرين
26.25
ل-ثريونين
53.45
ل-تريبتوفان
9.02
ل-تيروزين ملح ثنائي الصوديوم
48.10
ل-فالين
52.85
فيتامينات
د-بيوتين
0.0035
كلوريد الكولين
8.98
د-بانتوثينات الكالسيوم
2.24
حمض الفوليك
2.66
ميو إينوزيتول
12.60
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
2.02
البيريدوكسين حمض الهيدروكلوريك
0.031
بيريدوكسال حمض الهيدروكلوريك
2.00
ريبوفلافين
0.219
ثيامين حمض الهيدروكلوريك
2.17
فيتامين B12
0.68
الأملاح غير العضوية
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
الحديد(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
كلوريد الكالسيوم
311.80
مغ كلوريد المغنيسيوم 6 H₂O
61.20
المغنيسيوم المغنيسيوم₄
48.84
كلوريد الصوديوم
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄HPO₄
71.02
NaH₂PO₄PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
مكونات أخرى
د-الجلوكوز
3151.00
هايبوكسانثين
2.40
هيبيس
3574.50
حمض اللينوليك
0.042
حمض الليبويك
0.105
ملح الصوديوم الفينول الأحمر الفينول
8.63
بوتريسين 2 حمض الهيدروكلوريك
0.081
بيروفات الصوديوم
55.00
ثيميدين
0.365
صُمم وسط هام F-12K (Kaighn's) بعناية لتحسين ظروف زراعة الخلايا. وهو يتميز بتركيبة غنية توفر مستويات مرتفعة من المكونات الأساسية مثل الأحماض الأمينية وبيروفات الصوديوم، بالإضافة إلى عناصر إضافية تشمل البوتريسين والثيميدين والهايبروكسانثين والزنك. تُمكِّن هذه الإضافات الباحثين من استكمال الوسط بالحد الأدنى من المصل أو المكونات المحددة لأنواع معينة من الخلايا، مما يسهل الظروف التجريبية الدقيقة.
والجدير بالذكر أن وسط هام F-12K (Kaighn's) لا يحتوي على بروتينات أو عوامل نمو. وبالتالي، غالباً ما تكون المكملات بعوامل النمو ومصل البقر الجنيني (FBS) ضرورية، مما يسمح للباحثين بتكييف الوسط مع متطلبات خطوط الخلايا الخاصة بهم. ولتحقيق الأداء الأمثل، يجب تحسين تركيز FBS بعناية لكل خط خلوي لضمان النمو والوظائف المثلى.
وللحفاظ على الأس الهيدروجيني الفسيولوجي، يستخدم وسط هام F-12K (Kaighn's) نظام مخزن بيكربونات الصوديوم (2.5 جم/لتر)، مما يستلزم التحكم في بيئة من 5-10% من ثاني أكسيد الكربون أثناء الزراعة. ويضمن ذلك بقاء الأس الهيدروجيني للوسط ضمن النطاق المثالي لنمو الخلايا وحيويتها
مراقبة الجودة
الأس الهيدروجيني = 7.2 +/
- 0.02 عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية.
تم اختبار كل دفعة للتأكد من العقم وغياب الميكوبلازما والبكتيريا.
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. يقلل التجميد وكذلك التسخين حتى +37 درجة مئوية من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسط إلى أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة لا يمكن التحكم فيها (مثل أجهزة الميكروويف).
إذا كنت تريد استخدام جزء فقط من الوسيط، أخرج هذه الكمية من الزجاجة وقم بتسخينها في درجة حرارة الغرفة.
مدة الصلاحية لأي وسيط باستثناء الوسيط الأساسي هي 8 أسابيع من تاريخ التصنيع.
التركيب
المكونات
ملغم/لتر
الأملاح غير العضوية
كلوريد الكالسيوم x 2H2O
135,24
كبريتات النحاس(II) × 5H2O
0,00
كبريتات الحديد (II) x 7H2O
0,83
كلوريد المغنيسيوم x 6H2O
105,72
كبريتات المغنيسيوم × 7H2O
394,49
كلوريد البوتاسيوم
283,29
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم
58,52
كلوريد الصوديوم
7597,20
فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوملا مائي
115,02
كبريتات الزنك × 7H2O 7H2O
0,14
مكونات أخرى
د(+)
- جلوكوز لا مائي
1260,00
هايبوكسانثين
4,08
حمض الليبويك DL-α-Lipoic
0,21
الفينول الأحمر
3,00
بوتريسين × 2HCl
0,32
بيروفات الصوديوم
220,00
NaHCO3
2500,00
ثيميدين
0,73
الأحماض الأمينية
ل-ألانين
17,82
ل-أرجينين × حمض الهيدروكلوريك
421,40
إل-أسباراجين × H2O
30,02
ل-حمض الأسبارتيك
26,62
إل-سيستين × حمض الهيدروكلوريك × H2O
70,24
ل-جلوتامين
292,20
حمض ل-جلوتاميك
29,42
جلايسين
15,01
ل-هيستيدين × حمض الهيستيدين × حمض الهيدروكلوريك × H2O
41,92
ل-إيسولوسين
7,87
ل-لوسين
26,24
ل
- ليسين × حمض الهيدروكلوريك
73,04
ل-ميثيونين
8,95
ل-فينيل ألانين
9,91
ل-برولين
69,06
ل-سيرين
21,02
ل-ثريونين
23,82
ل-تريبتوفان
4,08
ل-تيروزين
10,87
ل-فالين
23,42
فيتامينات
د(+)-بيوتين
0,07
د-كالسيوم بانتوثينات الكالسيوم
0,48
كلوريد الكولين
13,96
حمض الفوليك
1,32
ميو إينوزيتول
18,02
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
0,04
البيريدوكسين x حمض الهيدروكلوريك
0,06
ريبوفلافين
0,04
ثيامين × حمض الهيدروكلوريك
0,34
فيتامين B12
1,36
- 0.02 عند 20-25 درجة مئوية. تم اختبار كل دفعة للتأكد من تعقيمها وخلوها من الميكوبلازما والبكتيريا. الصيانة يحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية في مكان مظلم. يؤدي التجميد والتسخين إلى +37 درجة مئوية إلى تقليل جودة المنتج. لا تسخن الوسط إلى أكثر من 37 درجة مئوية ولا تستخدم مصادر حرارة لا يمكن التحكم فيها (مثل أجهزة الميكروويف). إذا كان سيتم استخدام جزء فقط من الوسط، فقم بإزالة هذه الكمية من الزجاجة وقم بتسخينها في درجة حرارة الغرفة. مدة الصلاحية لأي وسط باستثناء الوسط الأساسي هي من 6 إلى 8 أسابيع من تاريخ الفتح. التركيب المكونات مليغرام/لتر أملاح غير عضويةكلوريد الكالسيوم × 2H2O132 كبريتات المغنيسيوم97 كلوريد البوتاسيوم400 كلوريد الصوديوم6,460 هيدروجين فوسفات الصوديوم (لا مائي)504 مكونات أخرىD(+)-جلوكوز (لا مائي)3,000 الجلوتاثيون (مخفض)0 بيبتون اللحم600 ملح الصوديوم الأحمر الفينولي11 الأحماض الأمينيةL-ألانين13 L-أرجينين × HCl42.14 L-أسباراجين × H2O45 حمض L-أسبارتيك19.9 L-سيستين × HCl × H2O31.7 L-جلوتامين (مستقر)219.1 حمض L-جلوتاميك22 جلايسين7 L-هيستيدين × HCl × H2O20.9 L-هيدروكسيبرولين19.6 L-إيسولوسين39 L-لوسين39.36 L-ليسين × HCl36.54 L-ميثيونين14.9 L-فينيل ألانين16.5 L-برولين17.27 L-سيرين26.28 L-ثريونين17.87 L-تريبتوفان3 ملح ثنائي الصوديوم L-تيروزين26.10 L-فالين17.5 فيتاميناتحمض p-أمينوبنزويك1 حمض الأسكوربيك0 D(+)-بيوتين0 D-بانتوثينات الكالسيوم0 كلوريد الكولين5 حمض الفوليك10 ميو-إينوزيتول36 نيكوتيناميد0 حمض النيكوتينيك0 بيريدوكسال هيدروكلوريد0 بيريدوكسين هيدروكلوريد0.5 ريبوفلافين0 ثيامين هيدروكلوريد0 فيتامين ب122
ويُعد IMDM مناسباً تماماً لمزارع الخلايا عالية الكثافة وسريعة التكاثر، بما في ذلك خلايا Jurkat وCOS-7 والخلايا البلعمية الكبيرة. يمكن العثور على التعديلات المختلفة ل IMDM المتاحة لمجموعة من تطبيقات مزارع الخلايا باستخدام أداة اختيار الوسائط. توفر الوسائط السائلة العناصر الغذائية الأساسية لجميع تطبيقات زراعة الخلايا. يتم تصنيع كل وسيط من وسائط زراعة الخلايا عالية الجودة لدينا وفقًا للصيغة المنشورة في البداية أو التعديلات اللازمة للأداء المتسق والاستقرار لوسط المزرعة.
IMDM مقابل DMEM
يحتوي IMDM على نترات البوتاسيوم بدلاً من نترات الحديديك و HEPES وبيروفات الصوديوم. إن المكونات الإضافية في IMDM تجعله أكثر ملاءمة لأنواع خلايا متخصصة وتطبيقات محددة من DMEM.
IMDM مقابل RPMI
يحتوي كل من IMDM وRPMI على تركيبات مختلفة قد تكون ذات صلة بتحفيز PMA/ionomycin. يتمثل أحد الاختلافات المهمة في تركيز Ca2+. فبينما يحتوي RPMI على 0.42 ملي مولار من Ca2+، يحتوي IMDM على 1.49 ملي مولار.
مراقبة الجودة
الأس الهيدروجيني = 7.2 +/
- 0.02 عند درجة حرارة 20-25 درجة مئوية.
تم اختبار كل دفعة للتأكد من العقم وغياب الميكوبلازما والبكتيريا.
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند +2 درجة مئوية إلى +8 درجة مئوية في الظلام. يقلل التجميد والتسخين حتى +37 درجة مئوية من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسط إلى أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة لا يمكن التحكم فيها (مثل أجهزة الميكروويف).
إذا كنت تريد استخدام جزء فقط من الوسيط، أخرج هذه الكمية من الزجاجة وقم بتسخينها في درجة حرارة الغرفة.
مدة الصلاحية لأي وسيط باستثناء الوسيط الأساسي هي 8 أسابيع من تاريخ التصنيع.
التركيب
المكونات
ملغم/لتر
الأملاح غير العضوية
كلوريد الكالسيوم × 2 H2O
219,00
كلوريد البوتاسيوم
330,00
نترات البوتاسيوم
0.076
كبريتات المغنيسيوم اللامائية
97,73
كلوريد الصوديوم
4,505.00
فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم اللامائية
109,00
سيلينيت الصوديوم
0,02
مكونات أخرى
د(+)-جلوكوز ثنائي هيدروجين الصوديوم اللامائي
4,500.00
هيبيس
5,958.00
بيروفات الصوديوم
110,00
الفينول الأحمر
15,00
الأحماض الأمينية
ل-ألانين
25,00
ل-أرجينين × حمض الهيدروكلوريك
84,00
إل-أسباراجين × H2O
25,00
ل-حمض الأسبارتيك
30,00
إل-سيستين × 2HCl
91,24
ل-جلوتامين
584,00
إل-غلوتاميك أسيد
75,00
جلايسين
30,00
ل-هيستيدين × حمض الهيستيدين × حمض الهيدروكلوريك × H2O
42,00
ل-إيسولوسين
104,80
ل-لوسين
104,80
ل-ليسين × حمض الهيدروكلوريك
146,20
ل-ميثيونين
30,00
ل-فينيل ألانين
66,00
ل-برولين
40,00
ل-سيرين
42,00
ل-ثريونين
95,20
ل-تريبتوفان
16,00
إل-تيروزين × 2Na
104,20
ل-فالين
93,60
فيتامينات
د(+)-بيوتين
0.013
د-كالسيوم بانتوثينات الكالسيوم
4,00
كلوريد الكولين
4,00
حمض الفوليك
4,00
ميو-إينوزيتول
7,20
تم تصميمه في البداية لدعم نمو خلايا سرطان الدم البشري في كل من مزارع المعلقات والطبقات الأحادية الطبقة، وقد تطور هذا الوسيط RPMI 1640 من خلال التعديلات التي أجراها الباحثون والموردون التجاريون ليصبح مناسباً لمجموعة متنوعة من خلايا الثدييات. وهو متوافق بشكل استثنائي مع خطوط الخلايا مثل HeLa وJurkat وMCF-7 وPC12 وPC12 وBBC والخلايا النجمية والخلايا السرطانية.
يتميز RPMI 1640 Medium عن وسائط زراعة الخلايا الأخرى بسبب تركيبته الفريدة. فهو يحتوي على كمية كبيرة من الفوسفات والأحماض الأمينية والفيتامينات. والجدير بالذكر أنه يحتوي على البيوتين وفيتامين B12 وPABA، وهي غير موجودة في وسط النسر الأساسي الأدنى أو وسط النسر المعدل في ديلبيكو. علاوة على ذلك، يُظهر وسط RPMI 1640 تركيزات مرتفعة بشكل ملحوظ من فيتامينات الإينوزيتول والكولين. ومع ذلك، فإنه لا يحتوي على بروتينات أو دهون أو عوامل نمو. وبالتالي، يلزم عادةً إضافة 10% من مصل البقر الجنيني (FBS) لتوفير الظروف المثلى لنمو الخلايا.
يعتمد نظام التخزين المؤقت في RPMI 1640 Medium على بيكربونات الصوديوم ويتطلب بيئة من 5-10% من ثاني أكسيد الكربون للحفاظ على درجة حموضة مناسبة من الناحية الفسيولوجية. كما أن تضمين عامل الاختزال الجلوتاثيون يميز هذا الوسط عن غيره.
مراقبة الجودة
معقمة ومفلترة
التخزين ومدة الصلاحية
يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين +2 درجة مئوية و+8 درجات مئوية، مع حمايته من الضوء.
بمجرد فتحه، يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية ويستخدم خلال 6-8 أسابيع.
ظروف الشحن
درجة الحرارة المحيطة
الصيانة
يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة +2 درجة مئوية إلى +8 درجات مئوية في الظلام. تجنب التجميد والتسخين المتكرر إلى +37 درجة مئوية، لأنه يقلل من جودة المنتج.
لا تقم بتسخين الوسيط أكثر من 37 درجة مئوية أو استخدام مصادر حرارة غير منضبطة مثل أجهزة الميكروويف.
في حالة استخدام جزء فقط من الوسيط، يجب إزالة الكمية المطلوبة وتسخينه إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.
التركيب
الفئة
المكونات
التركيز (ملغم/لتر)
الأحماض الأمينية
الجلايسين
10.00
إل-ألانيل-إل-جلوتامين
434.40
ل-أرجينين
200.00
ل-أل-أسباراجين H2O
56.82
ل-حمض الأسبارتيك
20.00
إل-سيستين 2HCl
65.20
ل-حمض الجلوتاميك
20.00
ل-هيستيدين حمض الهيستيدين H2O
20.27
ل-هيدروكسي-ل-برولين
20.00
إل-إيسولوسين
50.00
ل-لوسين
50.00
إل-ليسين حمض الهيدروكلوريك
40.00
ل-ميثيونين
15.00
ل-فينيل ألانين
15.00
ل-برولين
20.00
ل-سيرين
30.00
ل-ثريونين
20.00
ل-تريبتوفان
5.00
إل-تيروزين 2Na 2H2O
28.83
ل-فالين
20.00
فيتامينات
ب-حمض أمينو بنزويك
1.00
د-بيوتين
0.20
كلوريد الكولين
3.00
د-كالسيوم البانتوثينات
0.25
حمض الفوليك
1.00
ميو إينوزيتول
35.00
نيكوتيناميد النيكوتيناميد
1.00
البيريدوكسين حمض الهيدروكلوريك
1.00
ريبوفلافين
0.20
ثيامين حمض الهيدروكلوريك
1.00
فيتامين B12
0.005
أملاح غير عضوية
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
كلوريد الكالسيوم
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
كلوريد الصوديوم
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
مكونات أخرى
د-الجلوكوز
2000.00
ل-جلوتاثيون مختزل
1.00
ملح الصوديوم الفينول الأحمر الفينول
5.30