سلسلة الخلايا Neuro-2a
Neuro-2a هو خط خلايا عصبية مستمدة من الفئران ويستخدم على نطاق واسع في أبحاث علم الأعصاب. وتستخدم هذه الخلايا بشكل أساسي لدراسة النمو العصبي، والتمايز، والسمية العصبية، ومسارات الإشارات الخلوية، ونمو المحاور العصبية. إلى جانب ذلك، تُستخدم لأغراض تطوير الأدوية وفحصها.
يركز هذا المقال على الجوانب المهمة لخلايا الورم العصبي Neuro-2a التي قد تساعدك قبل البدء في العمل بها. وسيتناول المقال بشكل أساسي ما يلي:
- الخصائص العامة وأصل خلايا Neuro-2a
- معلومات حول زراعة سلالة الخلايا Neuro-2a
- مزايا وعيوب خط الخلايا Neuro-2a
- التطبيقات البحثية لسلسلة الخلايا Neuro-2a
- المنشورات البحثية التي تتناول خلايا Neuro-2a
- موارد خلايا Neuro-2a: بروتوكولات ومقاطع فيديو والمزيد
الخصائص العامة وأصل خلايا Neuro-2a
سيتناول هذا الجزء من المقالة الخلفية والخصائص الأساسية لسلسلة الخلايا Neuro-2a التي من الضروري معرفتها قبل العمل بها. هنا، ستتعرف على: ما هي سلسلة الخلايا Neuro-2a؟ ما هو أصل سلسلة الخلايا Neuro-2a؟ ما هو تمايز خلايا Neuro-2a؟ ما هو حجم خلية Neuro-2a؟ ما هي الشكل المورفولوجي لخلايا Neuro-2a؟
- نشأت خلايا Neuro-2a من ورم عفوي (ورم أرومي عصبي) لفأر ألبينو (السلالة A). تم تأسيس خط الخلايا على يد R.J. Klebe و F.H. Ruddle.
- تُظهر خلايا الورم العصبي Neuro-2a مورفولوجية الخلايا الجذعية العصبية والأميبية.
- يبلغ ارتفاع خلية Neuro-2a 12 ميكرومتر [1].
- قد يتراوح عدد الكروموسومات في خلايا Neuro-2a بين 59 و193، مع عدد نموذجي يبلغ 95. ويكون النمط الكروموسومي لهذه الخلايا غير مستقر ضمن نطاق يتراوح بين 94 و98 كروموسومًا.
معلومات حول زراعة خط الخلايا Neuro-2a
تُستخدم خلايا Neuro-2a على نطاق واسع في مختبرات أبحاث علم الأعصاب. قبل العمل مع هذه الخلايا، يجب أن تتعرف على المعلومات الأساسية حول زراعة الخلايا المذكورة أدناه. قد يساعدك ذلك على التعامل معها بسهولة. ستتعرف على: ما هو Neuro-2a وسط زراعة الخلايا؟ كيف تُزرع خلايا Neuro-2a؟ ما هو زمن تضاعف خلايا Neuro-2a؟ ما هي كثافة زرع خلايا Neuro-2a ؟ ما هو بروتوكول زراعة خلايا Neuro-2a؟ ما هي وسط زراعة خلايا Neuro-2a؟
النقاط الرئيسية لزراعة خلايا Neuro-2a
زمن التضاعف:
يبلغ وقت تضاعف خلايا Neuro-2a حوالي 70 ساعة.
ملتصقة أم معلقة:
Neuro-2a هي سلالة خلوية ملتصقة.
كثافة البذر:
كثافة زرع الخلايا المُحسَّنة لسلالة الخلايا Neuro-2a هي 1 × 10⁴ خلية/سم². للزرع، تُغسل الخلايا بمحلول ملحي فوسفاتي خالٍ من المغنيسيوم والكالسيوم (1x). بعد ذلك، يُضاف محلول التمرير (Accutase)، وتُحضن الخلايا لمدة 8 إلى 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد تفكك الخلايا، تُضاف وسائط جديدة، وتُطرد الخلايا. تُعاد تعليق حبيبات الخلايا المجمعة بعناية، وتُسكب الخلايا في وعاء استزراع للنمو.
وسط النمو:
يُستخدم EMEM لزراعة خلايا Neuro-2a. ويحتوي على 10% من مصل الدم البقري (FBS)، و2 مليمولار من L-جلوتامين، و1.5 غرام/لتر من NaHCO3، وEBSS، و1 مليمولار من بيروفات الصوديوم، وNEAA لنمو الخلايا بشكل مثالي. يجب استبدال الوسط مرة أو مرتين أسبوعيًا.
ظروف النمو:
تُحفظ مزارع Neuro-2a في حاضنة مرطبة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية ومتصلة بمصدر CO₂ بنسبة 5%.
التخزين:
يجب تخزين الخلايا عند درجة حرارة أقل من -150 درجة مئوية في مجمد كهربائي ذي درجة حرارة منخفضة للغاية أو في الطور البخاري للنيتروجين السائل على المدى الطويل.
عملية التجميد والوسط:
تُستخدم وسائط CM-1 أو CM-ACF لتجميد خلايا Neuro-2a. تُجمَّد الخلايا من خلال عملية تجميد بطيئة لا تسمح بانخفاض درجة الحرارة إلا بمقدار 1 درجة مئوية في الدقيقة. وهذا يحمي الخلايا من الصدمة ويحافظ على قابليتها للحياة.
عملية الذوبان:
لإذابة المزارع المجمدة، توضع القارورة في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 40 إلى 60 ثانية حتى يتبقى فقط كتلة صغيرة من الجليد. بعد ذلك، تُضاف وسائط الاستزراع، وتُخضع الخلايا لعملية الطرد المركزي. تساعد هذه الخطوة على إزالة مكونات وسائط التجميد. ثم يُعاد تعليق حبيبات الخلايا، وتُنقل الخلايا إلى قارورة جديدة مملوءة بوسائط الاستزراع. بعد ذلك، تُوضع الخلايا في حاضنة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 24 ساعة.
مستوى السلامة الحيوية:
يُشترط توفر بيئة مختبرية من مستوى السلامة البيولوجية 1 للتعامل مع مزارع Neuro-2a وصيانتها.
مزايا وعيوب خط الخلايا Neuro-2a
تتمتع خلايا Neuro-2a ببعض المزايا والعيوب التي تميزها عن سلالات الخلايا العصبية الأخرى. وفيما يلي قائمة ببعض المزايا والعيوب البارزة لهذه الخلايا.
المزايا
مزايا خط الخلايا العصبية الفئرانية Neuro-2a هي:
-
سهولة الصيانة:
لا يتطلب خط الخلايا Neuro-2a إجراءات معقدة أو صعبة لزراعة الخلايا. فهي سهلة الزراعة والصيانة في مختبرات الأبحاث.
-
نموذج الخلايا العصبية المختبري:
يُعد Neuro-2a نموذجًا مناسبًا للخلايا العصبية يستخدمه الباحثون على نطاق واسع في دراسات تطور الخلايا العصبية وتمايزها.
العيوب
عيوب خلايا Neuro-2a هي:
-
أصل الفئران:
تعود خلايا Neuro-2a إلى الفئران، ويجب على الباحثين توخي الحذر عند استقراء النتائج من الدراسات التي تستند إلى الفئران لتطبيقها على صحة الإنسان وأمراضه، حيث يمكن أن تختلف بيولوجيا الفئران عن بيولوجيا الإنسان بشكل كبير.
التطبيقات البحثية لسلسلة خلايا Neuro-2a
توفر خلايا Neuro-2a العديد من التطبيقات في مجال أبحاث علم الأعصاب. وفيما يلي مناقشة لبعض الاستخدامات الواعدة لهذا الخط الخلوي:
- التطور العصبي: Neuro-2a هو نموذج خلوي عصبي في المختبر يُستخدم على نطاق واسع لدراسة التطور العصبي والعمليات ذات الصلة مثل التمايز ونمو المحاور العصبية وتكوين المشابك العصبية. استخدمت دراسة أُجريت في عام 2020 خلايا Neuro-2a لاستكشاف دور الميكرو آر إن إيه-124 في تمايز الخلايا العصبية المستحث بحمض الريتينويك [2]. بحثت دراسة أخرى في تعبير مستقبل حمض الريتينويك غاما (RARG) و miRNA-124 في خط الخلايا العصبية (N2A). اقترحت هذه الدراسة أن RARG يُستهدف بواسطة miR-124 ويقوم بكبح نمو الامتدادات العصبية [3].
- السمية العصبية: تُستخدم خلايا Neuro-2a أيضًا لتقييم الآثار السامة للأدوية أو المواد الكيميائية أو العوامل البيئية على الخلايا العصبية. على سبيل المثال، بحثت دراسة أجراها Zhihong Yin وزملاؤه في السمية العصبية لمادة البيسفينول أ (BPA)، وهي مادة كيميائية بيئية، باستخدام خلايا Neuro-2a. ولاحظ الباحثون أن مادة BPA تثبط تمايز الخلايا العصبية وتكاثرها عن طريق تعطيل سلامتها الخلوية والمشابكية [4].
- فحص الأدوية: تُستخدم خلايا Neuro-2a أيضًا لتقييم الأنشطة العلاجية للعديد من الأدوية والمركبات والمنتجات الطبيعية. على سبيل المثال، استخدمت إحدى الدراسات خلايا Neuro-2a لدراسة الإمكانات المضادة للأكسدة لمستخلص نبات الجنكة ثنائية الأوراق (Gingko biloba). علاوة على ذلك، أشارت الدراسة إلى أن هذا المستخلص يؤدي إلى انخفاض تراكم بروتين Aβ ويمكن أن يكون علاجًا محتملاً لمرض الزهايمر [5].
5. المنشورات البحثية التي تتناول خلايا Neuro-2a
فيما يلي بعض الأوراق البحثية المثيرة للاهتمام التي تتناول سلالة الخلايا Neuro-2a.
بحثت هذه الدراسة، التي نُشرت في مجلة «Journal of Natural Medicines» عام 2018، في الآثار العلاجية للألكاميدات المعزولة من الفلفل الأبيض (P. nigrum) على الخلايا العصبية من سلالة Neuro-2a.
يلعب انخفاض التعبير الجيني لـ Nkx2.1 دورًا في تشوهات الدماغ الناتجة عن زيادة حمض الريتينويك
اقترحت هذه الدراسة المنشورة في مجلة «أكتا بيوكيميكا إت بيوفيزيكا سينيكا» (Acta Biochimica et Biophysica Sinica) عام 2020 أن جين Nkx2.1 يلعب دورًا مهمًا في نمو دماغ الفئران من خلال تنظيم سلسلة إشارات Shh.
نُشرت هذه المقالة في مجلة Toxicology and Industrial Health (2023)، وأشارت إلى أن مادة البيسفينول أ الكيميائية البيئية تثير سمية عصبية في خلايا neuro-2a وتؤدي إلى اضطراب وظائفها المشبكية والهيكلية الخلوية.
اقترحت هذه الورقة البحثية المنشورة في مجلة «Pharmaceuticals» (2021) أن عقار «هيكساريلين» ينظم تسلسل إنزيمات PI3K/AKT و MAPK في خلايا الورم الأرومي العصبي (Neuro-2a) ويثبط موت الخلايا المبرمج لخلايا Neuro-2a الناجم عن بيروكسيد الهيدروجين.
اقترحت هذه الورقة البحثية المنشورة في مجلة Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) أن مستخلص فاكهة Emblica officinalis يثبط الالتهاب العصبي في خلايا Neuro-2a، وبالتالي يمكن أن يكون مفيدًا في علاج الأمراض الالتهابية العصبية.
موارد حول خلايا Neuro-2a: بروتوكولات ومقاطع فيديو والمزيد
فيما يلي الموارد المتاحة عبر الإنترنت حول خلايا Neuro-2a. وتشمل بروتوكول زراعة خلايا Neuro-2a وإدخال الجينات إليها.
- بروتوكول التحويل الجيني لخلايا Neuro-2a: تعد خلايا Neuro-2a مضيفًا مناسبًا للتحويل الجيني. سيرشدك هذا الرابط إلى بروتوكول التحويل الجيني لسلالة الخلايا هذه. تختلف كفاءة التحويل الجيني لخلايا Neuro-2a من مادة كيميائية إلى أخرى.
يحتوي الرابط التالي على بروتوكول زراعة خلايا Neuro-2a.
- بروتوكول زراعة خلايا Neuro-2a: سيساعدك هذا الرابط على التعرف على بروتوكول إعادة زراعة خلايا Neuro-2a.
- خلايا Neuro-2a: يحتوي الموقع على معلومات شاملة حول وسائط خلايا Neuro-2a، وكثافة البذر، وبروتوكولات إعادة الاستنبات والتعامل مع المزارع المحفوظة بالتبريد والمزارع المتكاثرة.
المراجع
- Lulevich, V., et al., توفر ميكانيكا الخلية الواحدة وسيلة حساسة وكمية لاستكشاف تفاعلات الببتيد بيتا أميلويد والخلايا العصبية. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): ص. 13872-7.
- You, Q., et al., دور miR-124 في تنظيم تمايز خلايا Neuro-2A المستحث بحمض الريتينويك. Neural Regen Res, 2020. 15(6): ص. 1133-1139.
- Su, X.، وآخرون، مستقبلات حمض الريتينويك جاما مستهدفة بواسطة الميكرو آر إن إيه-124 وتثبط نمو الامتدادات العصبية. Neuropharmacology، 2020. 163: ص. 107657.
- Yin, Z.، وآخرون، تسبب التعرض للبيسفينول-أ في حدوث سمية عصبية ويرتبط بالمشابك العصبية والهيكل الخلوي في خلايا Neuro-2A. Toxicology in Vitro، 2020. 67: ص. 104911.
- تشن، ل.، وآخرون، مستخلص الجنكة بيلوبا (EGb) يثبط الإجهاد التأكسدي في خلايا Neuro 2A التي تفرز بروتينات APPsw بكميات زائدة. BioMed research international، 2019. 2019.