HK EGFP-α-微管蛋白/H2B-mCherry细胞

US$800.00*

产品采用干冰冷冻运输，装于冷冻管中。每支冷冻管通常含有3×10^⁶ 个贴壁细胞系细胞或5×10^⁶ 个悬浮细胞系细胞（具体详见批次合格证）。

价格不含税，另加运费

cryovial

产品编号 300670

安全数据表

产品介绍

分析证书（CoA）

说明	HK EGFP-α-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto 细胞系是一种精心设计的模型，用于详细观察细胞过程。该克隆系经稳定转染后可表达两种荧光蛋白融合体，从而实现染色质和微管网络的实时成像。红色荧光蛋白 mCherry 与核心组蛋白 H2B 融合，形成 H2B-mCherry。这种融合蛋白由 pH2B-mCherry-IRES-neo3 质粒表达，可作为染色质标记，在活细胞成像中突出显示核 DNA，促进染色质动态和核结构的研究。此外，该细胞系通过 pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b 质粒表达融合了α-微管蛋白的单体增强型 GFP（绿色荧光蛋白）。GFP-α-微管蛋白融合物发出鲜艳的绿色荧光，勾勒出细胞内的微管结构。这一特性对于研究微管的组织、动力学及其在细胞分裂和细胞内运输中的作用至关重要。这些构建体的稳定整合可对这些细胞成分进行连续、长期的观察，而无需重复转染，从而减少了变异性，提高了实验结果的可靠性。转染后的耐药性选择确保了该品系细胞表达的稳定性和一致性。
有机体	人类
组织	子宫颈
疾病	癌症
同义词	HeLa Kyoto EGFP-a-tubulin/H2B-mCherry、HeLa H2B-mRFP 和 mEGFP-α-tubulin

年龄	30年
性别	女性
种族	非洲裔美国人
形态学	具有镶嵌石形状的上皮样细胞
生长特性	单层，粘附

引用	HK EGFP-α-微管蛋白/H2B-mCherry（Cytion 目录号 300670）
生物安全等级	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_L802
存款人	艾伦伯格实验室（EMBL）
转基因生物现状	GMO-S1：该HeLa京都细胞系含有EGFP-α-微管蛋白和H2B-mCherry构建体，可同时实现微管与染色质的成像。此分类仅适用于德国境内，其他地区可能存在差异。

蛋白质表达	EGFP-α-tubulin, H2B-mCherry：位置/基因： 1...589 / Pcmv, 652...1029 H2B, 1042...1752 / mCherry, 2983...3777 / KanR/NeoR
病毒	艾滋病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒阴性。
产品	CMV 促进因子、组蛋白 H2B、新霉素、磷酸转移酶

培养基	DMEM，w：4.5 克/升葡萄糖，w：4 毫摩尔 L-谷氨酰胺，w：3.7 克/升 NaHCO3，w：1.0 毫摩尔丙酮酸钠（Cytion 编号 820300a）。
补充剂	在培养基中添加 10% FBS
解离试剂	Accutase
加倍时间	24 小时
亚培养	去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
播种密度	1 × 10^⁴ 个细胞/^平方厘米
流体更新	每周 2 至 3 次
解冻后恢复	解冻后，将细胞以5×10^⁴个细胞/平方厘米的密度接种于培养皿中，使细胞从冷冻过程中恢复并至少贴壁24小时。
冷冻介质	我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
解冻和培养细胞	确认小瓶在运送时仍处于深度冷冻状态，因为细胞是用干冰运送的，以便在运输过程中保持最佳温度。收到细胞后，立即将冻存瓶保存在低于 -150°C 的温度下，以确保细胞的完整性；如果需要立即培养，则进行步骤 3。如需立即进行培养，可将冻存瓶浸入 37°C 的水浴中，加入清水和抗菌剂，轻轻搅拌 40-60 秒，直至残留一小块冰，迅速解冻冻存瓶。在流动罩内无菌条件下进行所有后续步骤，打开前用 70% 乙醇消毒冷冻瓶。小心打开消毒瓶，将细胞悬浮液转移到装有 8 毫升室温培养基的 15 毫升离心管中，轻轻搅拌。将混合物以 300 x g 离心 3 分钟，分离细胞，小心弃去含有残留冷冻培养基的上清液。用 10 毫升新鲜培养基轻轻重悬细胞团。对于粘附细胞，将悬浮液分装在两个 T25 培养瓶中；对于悬浮培养，将所有培养基转移到一个 T25 培养瓶中，以促进细胞的有效相互作用和生长。坚持既定的亚培养方案，以继续生长和维持细胞系，确保可靠的实验结果。
培养氛围	37°C, 5%_CO2, 加湿环境。
烧瓶涂层	无
冷冻程序	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
运输条件	冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
储存条件	如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

无菌	使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。