HK EGFP-Kleisin-beta 细胞
一般信息
| 说明 | HK EGFP-Kleisin-beta细胞系是Hela Kyoto细胞的转基因变体,主要用于研究细胞周期中染色体的内聚力。该细胞系表达与 Kleisin-beta 蛋白融合的增强型绿色荧光蛋白(EGFP),Kleisin-beta 蛋白是凝聚素复合体的重要组成部分,对姐妹染色单体的内聚至关重要。通过表达 EGFP 标记的 Kleisin-beta 蛋白,可以实时观察整个细胞周期中凝聚素的动态和定位,从而有助于在细胞环境中对染色体结构和功能进行详细分析。 这种细胞模型通常用于研究有丝分裂和减数分裂的染色体分离机制,特别是研究凝聚素的调控如何影响遗传稳定性和细胞分裂。通过对 Kleisin-beta 进行荧光标记,可以研究它与其他凝聚素成分和染色体蛋白的相互作用,从而深入了解凝聚素在染色体上的空间和时间装配情况。该细胞系可用于研究凝聚素功能被破坏的遗传疾病和癌症,为了解发病机制和开发治疗策略提供了宝贵的工具。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 子宫颈 |
| 疾病 | 癌症 |
| 同义词 | HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b、HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP |
特点
| 年龄 | 30年 |
|---|---|
| 性别 | 女性 |
| 种族 | 非洲裔美国人 |
| 形态学 | 具有镶嵌石形状的上皮样细胞 |
| 生长特性 | 单层,粘附 |
监管数据
| 引用 | HK EGFP-Kleisin-beta(Cytion 目录号 300674) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_1D64 |
| 存款人 | 艾伦伯格实验室(EMBL) |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该HeLa京都细胞系含有EGFP-kleisin-beta构建体,用于活细胞中粘连蛋白和染色体结构的研究。此分类仅适用于德国境内,其他地区可能存在差异。 |
生物分子数据
| 蛋白质表达 | EGFP-Kleisin-β:位置/基因: 1...589 / Pcmv, 619...645 / Flag-tag, 661...1368 / GFP, 1393...3206 / Kleisin Beta, 4474...5268 KanR/NeoR |
|---|
处理
| 培养基 | DMEM,w:4.5 克/升葡萄糖,w:4 毫摩尔 L-谷氨酰胺,w:3.7 克/升 NaHCO3,w:1.0 毫摩尔丙酮酸钠(Cytion 编号 820300a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 1 × 10⁴ 个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 解冻后恢复 | 解冻后,将细胞以5×10⁴个细胞/平方厘米的密度接种于培养皿中,使细胞从冷冻过程中恢复并至少贴壁24小时。 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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