Células B16-F10 – Explorando a linhagem celular de melanoma B16-F10 na pesquisa sobre metástase
As células B16-F10 constituem uma linhagem celular de melanoma derivada do camundongo C57BL/6J. Elas são amplamente utilizadas na pesquisa sobre câncer de pele. Os pesquisadores utilizam essas células para estudar o desenvolvimento e a progressão do tumor, bem como intervenções terapêuticas. Este artigo abordará os aspectos fundamentais das células de melanoma B16-F10. Destacam-se os seguintes pontos:
- Meio de crescimento
- As células B16-F10 são cultivadas no meio DMEM. O meio é suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃, 4,5 g/L de glicose e 1,0 mM de piruvato de sódio para o crescimento celular ideal. O meio deve ser trocado de 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células B16-F10 é de aproximadamente 20,1 horas. Pode variar de 17 a 21 horas, dependendo das condições de cultura.
- Tipo de crescimento
- A B16-F10 é uma linhagem celular aderente. As células crescem rapidamente e formam monocamadas.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível na
- Cytion — Encomende a B16-F10
- Origem e características gerais da linha celular B16-F10
- Informações sobre o cultivo das células B16-F10
- Células B16-F10: vantagens e desvantagens
- Aplicações de pesquisa das células B16-F10
- Publicações que mencionam a linha celular B16-F10
- Recursos para a linha celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
- Origem e características gerais da linha celular B16-F10
- Informações sobre o cultivo das células B16-F10
- Células B16-F10: vantagens e desvantagens
- Aplicações de pesquisa das células B16-F10
- 5. Publicações sobre a linha celular B16-F10
- Recursos para a linha celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Origem e características gerais da linhagem celular B16-F10
Esta seção fornecerá informações sobre a origem e as características distintivas das células tumorais de melanoma B16-F10. Isso ajudará você a utilizar a linha celular de maneira eficiente em seu trabalho de pesquisa. Principalmente, você aprenderá: O que são as células B16-F10? De onde a B16-F10 é derivada? Qual é a morfologia da linha celular B16-F10? Qual é o tamanho da célula B16-F10?
- A B16-F10 é um subclone da linhagem celular tumoral B16 derivada do tecido cutâneo de camundongos C57BL/6J. Nesse contexto, as células de melanoma B16F10 foram desenvolvidas após a injeção intravenosa da linhagem B16 em camundongos imunocomprometidos ou singênicos. Essas células foram selecionadas por seu potencial de formar colônias metastáticas no pulmão in vivo e, em seguida, estabelecidas após dez ciclos de formação de colônias pulmonares in vitro [1]. Ela foi desenvolvida por Fidler e colegas em 1976.
- As linhagens celulares B16-F10 apresentam aparência epitelial e forma fusiforme.
- O tamanho aproximado das células B16-F10 é de 15,4 ± 1,4 μm [2].
Células B16-F1 e B16-F10
As células B16-F1 e B16-F10 foram derivadas da linhagem celular parental B16. Ambas têm a mesma origem e apresentam características quase semelhantes. No entanto, a principal diferença está em sua capacidade metastática. As células B16-F10 apresentam alto potencial metastático, enquanto as células B16-F1 apresentam baixo potencial metastático [3].
Informações sobre o cultivo de células B16-F10
Antes de manusear e cultivar uma linhagem celular, é necessário conhecer seu tempo de duplicação, meios de crescimento, condições e protocolos de cultura celular. Esta seção abordará: Qual é o tempo de duplicação das células B16-F10? Como se cultiva as células B16-F10? Qual é o meio de cultura das células B16-F10? Quais são as condições de cultura recomendadas para as células B16-F10?
Pontos-chave para a cultura de células B16-F10
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células B16-F10 é de aproximadamente 20,1 horas. Ele pode variar de 17 a 21 horas, dependendo das condições de cultura.
Adesivas ou em suspensão:
A B16-F10 é uma linhagem celular aderente. As células crescem rapidamente e formam monocamadas.
Proporção de divisão:
As células B16-F10 são subcultivadas em uma proporção de divisão de 1:2 a 1:4. As células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (1x) e, em seguida, incubadas com solução de passagem Accutase por 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. As células recebem meio fresco e são centrifugadas. O sedimento celular coletado é ressuspenso novamente, e as células são distribuídas em um novo frasco contendo meio de cultura fresco, de acordo com a proporção de divisão.
Meio de crescimento:
As células B16-F10 são cultivadas no meio DMEM. O meio é suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO₃, 4,5 g/L de glicose e 1,0 mM de piruvato de sódio para o crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído de 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As células B16-F10 são cultivadas em uma incubadora umidificada a 37 °C com um suprimento de 5% de CO₂.
Armazenamento:
As células congeladas são armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C em um freezer elétrico de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor de nitrogênio líquido para manter a viabilidade celular.
Processo de congelamento e meio:
As células B16-F10 são congeladas em meios CM-1 ou CM-ACF para armazenamento. Para isso, recomenda-se um processo de congelamento lento, que permita apenas uma redução de 1 °C na temperatura por minuto, a fim de evitar qualquer choque nas células.
Processo de descongelamento:
As células B16-F10 congeladas são descongeladas em um banho-maria pré-ajustado a 37 °C por 40 a 60 segundos. Em seguida, as células são adicionadas a um meio fresco e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. As células coletadas são ressuspensas em um meio de crescimento e transferidas para frascos para cultura.
Nível de biossegurança:
É necessário um laboratório de nível 1 de biossegurança para manusear e manter a linhagem celular B16-F10.
Células B16-F10: vantagens e desvantagens
Assim como outras linhagens celulares, a B16-F10 também apresenta algumas vantagens e desvantagens. Nesta seção, são discutidos alguns prós e contras significativos dessa linhagem celular de melanoma cutâneo.
Vantagens
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na pesquisa sobre o câncer. As vantagens das células B16-F10 são:
Potencial metastático
As células B16-F10 de melanoma cutâneo apresentam alto potencial metastático, o que as torna valiosas para o estudo da metástase do câncer e dos mecanismos subjacentes.
Modelo tumoral in vitro
As células B16-F10 servem como modelo in vitro para o estudo da progressão e do crescimento do câncer, ajudando os pesquisadores a compreender os mecanismos celulares e moleculares que impulsionam o câncer.
Desvantagens
As desvantagens associadas à linhagem celular B16-F10 são:
Linha celular derivada de camundongo
A B16-F10 é uma linhagem celular derivada de camundongo, o que limita sua aplicabilidade a estudos específicos para humanos. Os resultados das pesquisas com essas células nem sempre podem ser verdadeiramente transpostos para a biologia humana.
Aplicações de pesquisa das células B16-F10
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na pesquisa sobre câncer. Algumas aplicações promissoras dessa linha celular são discutidas a seguir.
- Pesquisa sobre câncer: A linha celular B16-F10 é um modelo valioso para estudar processos das células cancerosas, incluindo proliferação, invasão, migração e morte celular ou apoptose. Além disso, ela ajuda os pesquisadores a compreender melhor os mecanismos moleculares e as vias que impulsionam esses processos celulares. Um estudo realizado em 2018 explorou o papel do CCR5 (receptor de quimiocina C-C tipo cinco) na transição epitelial-mesenquimal e na metástase de células de melanoma. Os resultados revelaram que a deficiência de CCR5 restringe o crescimento tumoral e a metástase, enquanto a alta expressão leva ao aumento do crescimento e da metástase das células B16-F10. Outras pesquisas relataram que o CCR5 regula a expressão do TGFβ1, que, por sua vez, regula a via de sinalização PI3K/AKT/GSK3β para promover a transição epitelial-mesenquimal e a migração celular [4].
- Testes e desenvolvimento de medicamentos: as células tumorais de melanoma B16F10 são altamente agressivas e, portanto, adequadas para testar potenciais medicamentos e tratamentos antitumorais. Os pesquisadores utilizam essas células e avaliam o efeito de diferentes compostos no crescimento, na proliferação e na metástase celular, auxiliando no desenvolvimento de medicamentos. Um estudo realizado em 2018 por Valentina Nanni e colegas investigou os efeitos terapêuticos do extrato hidroalcoólico de flores de Spartium junceum. O estudo sugeriu que o extrato de flores foi eficaz na indução da senescência nas células B16-F10, o que leva à supressão do crescimento celular e da melanogênese; portanto, ele pode exercer potenciais atividades anticâncer [5].
5. Publicações que apresentam a linhagem celular B16-F10
Aqui estão algumas publicações científicas relevantes que abordam a linha celular de melanoma B16-F10:
Este estudo foi publicado na revista *Nutrients* (2020). Ele propôs que o extrato etanólico de *Sorghum bicolor* possui um efeito antimelanogênico em células de melanoma cutâneo B16-F10.
O calcitriol inibe a proliferação e potencialmente induz a apoptose em células B16–F10
A pesquisa publicada na revista Medical Science Monitor Basic Research (2022) propôs que o medicamento calcitriol exerce efeitos antitumorais nas células de melanoma B16-F10 ao inibir a proliferação e induzir a apoptose.
Este artigo foi publicado na revista Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Os resultados revelaram que os cardóis, lipídios resorcinólicos, exercem intensa citotoxicidade sobre a linhagem celular B16-F10.
O estudo publicado na revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) explorou o potencial antimetastático do extrato do exocarpo de Ginkgo biloba utilizando células B16-F10.
Esta pesquisa publicada na revista *World Neurosurgery* (2018) propôs que a timoquinona pode ser uma terapia eficaz contra lesões metastáticas intracerebrais, uma vez que suprime o crescimento das células B16-F10 e induz a apoptose.
Recursos para a linhagem celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
As células endoteliais B16F10 são amplamente utilizadas na pesquisa sobre câncer de pele. Aqui estão alguns recursos online que explicam seus protocolos de cultura e transfecção:
- Transfecção de células de melanoma B16-F10: este tutorial em vídeo pode ajudá-lo a aprender o protocolo de transfecção para células B16-F10.
- Transfecção de B16-F10: este documento explica o protocolo de transfecção de DNA in vitro para células B16-F10 de melanoma cutâneo.
O link a seguir contém o protocolo de cultura celular para as células B16-F10:
- Subcultura de B16-F10: Este site contém informações úteis sobre as células tumorais de melanoma B16-F10. Inclui meios de crescimento, tempo de duplicação, condições de cultura e protocolo para subcultura de células, além de orientações para o manuseio de culturas criopreservadas e proliferativas.
Referências
- Poste, G., et al., Comparação das propriedades metastáticas de clones de melanoma B16 isolados de linhagens celulares cultivadas, tumores subcutâneos e metástases pulmonares individuais. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono e S. Sugita, “Mecanofenotipagem de variantes de células de melanoma B16 para a avaliação da eficácia do tratamento com (-)-galato de epigalocatequina utilizando um dispositivo microfluídico cônico”. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Comportamento de quatro sublinhagens diferentes de células de melanoma murino B16: pele de C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., A alta expressão de CCR5 no melanoma potencia a transição epitelial-mesenquimal e a metástase por meio do TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., O extrato hidroalcoólico das flores de Spartium junceum L. inibe o crescimento e a melanogênese em células B16-F10 ao induzir a senescência. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.