Células B16 – Guia fundamental sobre as células de melanoma B16 na pesquisa oncológica

B16 é uma linhagem celular de câncer de pele (melanoma) de origem murina. Essa linhagem celular é um modelo in vitro eficaz para o estudo de cânceres de pele em humanos. É frequentemente utilizada para investigar a formação de tumores sólidos e a metástase de células cancerosas.

📋 Linha celular B16 — Informações rápidas

Meio de crescimento: As células B16 são cultivadas no meio EMEM (Meio Essencial Mínimo de Eagle) contendo 10 % de soro fetal bovino (FBS). O meio de crescimento deve ser renovado 2 a 3 vezes por semana.
Tempo de duplicação: Estima-se que o tempo médio de duplicação populacional das células B16 seja de 24 horas.
Tipo de crescimento: As células B16 são aderentes e crescem em monocamadas.
Nível de biossegurança: BSL-1
Disponível na: Cytion — Encomende B16

Este artigo ajudará você a compreender os conceitos básicos da linhagem celular de melanoma B16. Especificamente, ele abordará o seguinte:

📋 Índice

Características gerais e origem da linha celular B16
Informações sobre o cultivo da linha celular B16
Linha celular B16: vantagens e desvantagens
Aplicações das células B16
5. Publicações científicas sobre as células B16
Recursos para a linha celular B16: protocolos, vídeos e muito mais
Perguntas frequentes

Características gerais e origem da linha celular B16

Esta seção do artigo abordará as características da linhagem celular de melanoma B16. Você encontrará respostas para as seguintes perguntas frequentes, tais como: O que é a linhagem celular cancerosa B16? De onde derivam as células B16? Qual é o tamanho das células B16?

A linhagem celular B16 foi estabelecida em 1954. Essas células foram derivadas de camundongos C57BL/6J que desenvolveram espontaneamente um tumor na pele nos Laboratórios Jackson, no Maine.
Trata-se de células epiteliais produtoras de melanina, com capacidade de metastatizar no baço, no fígado e nos pulmões.
As células do melanoma B16 crescem em monocamadas e apresentam morfologia celular semelhante à epitelial e fusiforme.
O tamanho das células da linhagem B16 é de aproximadamente 15,4 μm.
Existem subclones distintos das células B16, incluindo B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 e B16F10. Essas sublinhas diferem das células B16 parentais e mantêm algumas características específicas. Por exemplo, elas apresentam diferenças na morfologia, no tamanho celular e em outras propriedades. A B16F10 possui alta capacidade de metástase pulmonar, e a B164A5 é a linhagem celular de câncer de pele mais agressiva em comparação com a B16F10, a B16-GMCSF e a B16FLT3 [1].

Animação em 3D de um close-up de um câncer de pele em desenvolvimento, como o melanoma maligno, que causa inflamação no tecido circundante.

Informações sobre o cultivo da linhagem celular B16

Antes de manter ou cultivar uma linha celular, é possível que você precise de informações essenciais sobre o tempo de duplicação, o tipo de célula, os meios de crescimento, as condições de cultura etc. Esta seção contém todas as informações necessárias para a cultura de células B16.

Pontos-chave para a cultura de células B16

Tempo de duplicação da população:: Estima-se que o tempo médio de duplicação populacional das células B16 seja de 24 horas.
Adesivas ou em suspensão:: As células B16 são aderentes e crescem em monocamadas.
Densidade de semeadura:: Recomenda-se que as células B16 sejam semeadas a uma densidade celular de 1 a 2 x 10^⁴ células/cm². As células B16 aderentes são enxaguadas com PBS 1x e dissociadas da superfície usando solução de Accutase. As células são centrifugadas, e o sedimento celular é ressuspenso no meio de crescimento. Posteriormente, essas células são transferidas para um novo frasco para crescimento.
Meio de crescimento:: As células B16 são cultivadas no meio EMEM (Meio Essencial Mínimo de Eagle) contendo 10 % de soro fetal bovino (FBS). O meio de crescimento deve ser renovado 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:: Utiliza-se uma incubadora umidificada com suprimento de 5% _de CO_₂ e temperatura de 37 °C para o cultivo da linhagem celular B16.
Armazenamento:: Essas células são armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C ou na fase de vapor do nitrogênio líquido para proteger a viabilidade celular.
Processo e meio de congelamento:: Utiliza-se o meio de congelamento CM-1 ou CM-ACF para congelar as células B16 por meio de um processo de congelamento lento.
Processo de descongelamento:: As células B16 congeladas são descongeladas a 37 °C em um banho-maria contendo um agente antimicrobiano. As células descongeladas podem ser cultivadas diretamente, dispensando-as em frascos contendo meio de crescimento. Além disso, essas células podem ser centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento e, em seguida, cultivadas em novos meios.
Nível de biossegurança:: A linhagem celular B16 deve ser manuseada ou mantida em laboratório de nível de biossegurança 1.

B16 cells

Camada semiconfluente de células de melanoma B16 sob ampliação de 10x e 20x.

Linha celular B16: Vantagens e desvantagens

Assim como outras linhas celulares, a B16 possui uma combinação única de vantagens e desvantagens. Alguns prós e contras significativos dessa linha celular de melanoma estão listados nesta seção.

Vantagens

A B16 é a primeira ferramenta murina eficaz amplamente utilizada na pesquisa sobre metástase devido às vantagens que oferece. Algumas vantagens dessa linha celular de câncer de pele são:

Fácil de cultivar: A linha celular B16 é fácil de cultivar em laboratórios de pesquisa. É amplamente utilizada para estudar a biologia das células cancerosas, vias de sinalização e muito mais.
Crescimento rápido: A linhagem celular de melanoma B16 apresenta uma alta taxa de proliferação, tornando-a adequada para o estudo dos processos de divisão e crescimento celular.
Tumorigenicidade: A B16 é uma linha celular tumorigênica com propriedades semelhantes às de um tumor, como invasão, migração e proliferação. É valiosa para o estudo da formação, progressão e metástase de tumores.

Desvantagens

As desvantagens associadas à linha celular B16 são:

Falta de relevância para o ser humano: Como a B16 é uma linhagem celular de melanoma de camundongo, ela pode não representar com precisão a biologia do câncer de pele humano, limitando a aplicabilidade dos resultados da pesquisa.
Heterogeneidade: As células B16 são heterogêneas, apresentando propriedades genéticas e fenotípicas variadas dentro da mesma cultura. Isso pode afetar a confiabilidade e a reprodutibilidade dos resultados.

Aplicações das células B16

A linhagem celular B16 é amplamente utilizada em estudos de pesquisa. Algumas aplicações promissoras dessa linhagem celular são:

Biologia tumoral: essa linhagem celular de câncer de pele murino é tumorigênica e amplamente utilizada para compreender a biologia tumoral. Vários estudos foram realizados para explorar os mecanismos celulares por trás do crescimento, da proliferação e da metástase das células tumorais utilizando células B16. Um estudo de pesquisa realizado em 2020 utilizou células B16 para investigar o papel do RNA não codificante longo, o LncRNA MEG3, na formação, no crescimento e na metástase do melanoma. Essa pesquisa descobriu que o RNA não codificante modula o eixo miRNA-21/E-caderina para estimular esses eventos celulares [2]. Da mesma forma, foi realizada uma pesquisa para investigar o papel potencial da sinalização de Notch1 na imunossupressão induzida por tumores utilizando células B16 [3].
Descoberta de medicamentos: as células B16 são utilizadas para validar e testar os possíveis efeitos terapêuticos de candidatos a medicamentos. Um estudo avaliou o efeito antitumoral do ácido neogambogico, um composto natural, utilizando uma linhagem celular B16. Os resultados do estudo revelaram que esse composto modula a via de sinalização PI3K/Akt/mTOR para causar a morte das células cancerosas [4]. Outro estudo investigou o efeito antimalinoma do ginsenosídeo Rg3, uma saponina, utilizando a linhagem celular B16. A pesquisa sugeriu que esse composto natural exerceu atividade antitumoral por meio da regulação negativa das vias ERK e Akt [5].

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5. Publicações científicas que utilizam as células B16

Aqui estão algumas publicações científicas importantes que abordam a linhagem celular de melanoma B16.

O LncRNA MEG3 promove o crescimento, a metástase e a formação do melanoma por meio da modulação do eixo miR-21/E-caderina

Esta publicação na revista Cancer Cell International (2020) propôs que o RNA não codificante longo MEG3 potencia a formação, o crescimento e a metástase das células de melanoma B16 por meio da modulação do eixo miRNA-21/E-caderina.

Um novo derivado do psoraleno — o MPFC — potencializa a melanogênese por meio da ativação das vias de sinalização p38 MAPK e PKA em células B16

Este artigo foi publicado na revista International Journal of Molecular Medicine em 2018. Este estudo investigou o efeito melanogênico e os mecanismos de um derivado do psoraleno — 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g]cromen-2-ona (MPFC) — em células B16. O estudo propôs que esse derivado promove a melanogênese ao estimular as vias de sinalização celular da PKA e da p38 MAPK.

A sinalização de Notch1 em células de melanoma promoveu a imunossupressão induzida pelo tumor por meio da regulação positiva do TGF-β1

Essa pesquisa foi publicada em 2018 no Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Os resultados do estudo sugerem que a ativação da sinalização de Notch1 nas células B16 pode impedir a imunidade antitumoral ao aumentar a expressão do gene TGF-β1.

O ácido neogambogico induz a apoptose das células B16 de melanoma por meio da via de sinalização PI3K/Akt/mTOR

Este estudo foi conduzido por Chunlan Wu e seus colegas em 2020 e publicado na revista Acta Biochimica Polonica. A pesquisa afirma que o ácido neogambogico, um composto natural, pode causar a morte das células de melanoma B16 ao modular a cascata de sinalização PI3K/Akt/mTOR.

Um complexo de irídio (III), como potente agente anticâncer, induz a apoptose e a autofagia em células B16 por meio da inibição da via AKT/mTOR

Este artigo científico foi publicado no European Journal of Medicinal Chemistry em 2018. Neste estudo, os pesquisadores investigaram a atividade anticâncer de um composto, o complexo de irídio (III), utilizando células de melanoma B16.

A ailantona induz a parada do ciclo celular e a apoptose em células de melanoma B16 e A375

Este estudo propôs que um bioativo vegetal, a ailantona, possui potencial anticâncer, pois pode induzir a apoptose e a parada do ciclo celular em células de melanoma B16 e A375. Este artigo foi publicado na revista Biomolecules em 2019.

Recursos para a linhagem celular B16: protocolos, vídeos e muito mais

Existem poucos recursos sobre a linhagem celular B16 que expliquem seus protocolos de cultura e transfecção.

Cultivo de células de melanoma: este vídeo oferece dicas valiosas para o cultivo de linhagens celulares de melanoma.
Subcultivo de uma linha celular: este vídeo explica um protocolo geral de subcultivo para uma linha celular.
Transfecção da linha celular B16F10: este vídeo explica o protocolo de transfecção para uma sublinha de células de melanoma B16. Ele pode ajudá-lo a otimizar o protocolo de transfecção para células B16.

A seguir, apresentamos alguns protocolos de cultura celular para células B16.

Cultivo de células B16: Este site contém todas as informações necessárias para o cultivo de células B16, incluindo meios de crescimento, subcultura, descongelamento e congelamento de células.

Referências

Danciu, C., et al., Comportamento de quatro sublinhagens diferentes de células de melanoma murino B16: pele de C57 BL/6J. International Journal of Experimental Pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., O LncRNA MEG3 promove o crescimento, a metástase e a formação do melanoma por meio da modulação do eixo miR-21/E-caderina. Cancer Cell International, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., A sinalização de Notch1 em células de melanoma promoveu a imunossupressão induzida pelo tumor por meio da regulação positiva do TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., O ácido neogambogico induz a apoptose das células de melanoma B16 por meio da via de sinalização PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Atividade antitumoral do ginsenosídeo Rg3 no melanoma por meio da regulação negativa das vias ERK e Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.