פורסם: 2023 | נבדק לאחרונה: מאי 2026

טכניקות פירוק תרבית תאים

פירוק תרבית תאים הוא שלב קריטי בתחזוקת תרבית תאים. הוא כרוך בהפרדת התאים ממשטח הגידול שלהם כדי לאפשר תרבית משנה או קציר. סעיף זה מתאר שתי שיטות עיקריות: שימוש במאגרים לפירוק ללא אנזימים ושימוש בחומרים אנזימטיים.

שימוש במאגרים לפירוק תאים ללא אנזימים

שיטה זו עדינה ושומרת על שלמות התאים ללא שימוש באנזימים:

1. הכנה
   • יש לוודא שכל החומרים מחוממים ל-37°C לפני השימוש, כדי למנוע הלם לתאים.
2. הסרת מצע הגידול:
   • יש לרוקן את מצע הגידול הישן מכלי התרבית.
3. שטיפה
   • יש לשטוף את שכבות התאים החד-תאיות ב-5 מ"ל של PBS נטול סידן ומגנזיום לכל בקבוק T75 או צלחת 100 מ"מ.
   • נערו את הכלי בעדינות במשך 30 עד 60 שניות בטמפרטורת החדר.
   • שאבו את תמיסת השטיפה וזרקו אותה.
   • חזור על שלב השטיפה פעם נוספת.
4. פירוק
   • הוסף לכלי כ-5 מ"ל של תמיסת דיסוציאציה לתאים נטולת אנזימים.
   • נער בעדינות בטמפרטורת החדר במשך 1 עד 2 דקות ובדוק את הפירוק תחת מיקרוסקופ.
   • הקישו את הבקבוק או הצלחת על כף היד כדי לשחרר את התאים במידת הצורך.
   • אם התאים דבוקים, השאר אותם בטמפרטורת החדר למשך 2 עד 5 דקות נוספות, והקש שוב במידת הצורך, תוך שימוש בכמות נוספת של תמיסת פירוק.
   • ברגע שהתאים התנתקו, הוסף לפחות 5 מ"ל של מצע גידול מלא כדי לנטרל את תמיסת הדיסוציאציה ולהחזיר את התאים לתמיסה.
5. בדיקת חיוניות
   • עקבו אחר חיוניות התאים במהלך התרבית המשנית, והקפידו שהיא תישאר מעל 90%.

שימוש בחומרים אחרים לדיסוציאציה

שיטה זו מאפשרת שימוש במגוון ריאגנטים לפירוק:

1. הסרת המדיום המשומש
   • יש להשליך את התווך הישן מכלי התרבית.
2. שטיפת תאים
   • יש לשטוף את התאים בתמיסת מלח מאוזנת נטולת סידן ומגנזיום, או להשתמש ב-EDTA.
   • הוסף את תמיסת השטיפה בעדינות לצד הנגדי לתאים ונער את הכלי במשך 1 עד 2 דקות לפני השלכת תמיסת השטיפה.
3. פירוק
   • יש להוסיף 2 עד 3 מ"ל של תמיסת הפירוק הנבחרת לכל 25 סמ"ר של משטח גידול, תוך הקפדה על כיסוי מלא של יריעת התאים.
   • הכניסו את הכלי לאינקובטור בטמפרטורה של 37°C ונערו בעדינות. הפירוק מתרחש בדרך כלל תוך 5 עד 15 דקות, בהתאם לקו התאים.
   • במקרה של תאים עקשניים, טפיחה קלה על הכלי עשויה לזרז את התהליך.
   • יש להתבונן בתאים בזהירות כדי למנוע חשיפה יתר ונזק פוטנציאלי.
4. קצירת תאים
   • ברגע שהתאים התנתקו לחלוטין, יש לאפשר להם להתאסף בתחתית הכלי על ידי העמדתו במצב אנכי.
   • הוסף מצע מלא, ולאחר מכן פזר ואסוף את התאים באמצעות פיפטה מעל שכבת התאים.
   • ספרו את התאים והמשיכו בתרבית משנה.

בשתי השיטות, חשוב לקבוע את התנאים האופטימליים עבור כל קו תאים באמצעות תצפית אמפירית. התהליך צריך לשמר את חיוניות התאים, אשר יש לבדוק באופן שגרתי כדי לוודא שהיא עולה על 90% במהלך התרבית המשנית. נהלים אלה מספקים בסיס לחוקרים להתאמה בהתאם לדרישות ולמאפיינים הספציפיים של קווי התאים שלהם.

סקירה כללית של טכניקות לריבוי תאים דבקים

תרבית משנה יעילה של תאים דבקים מחייבת ניתוקם מכלי התרבית. נעשה שימוש בשיטות שונות, שכל אחת מהן מתאימה לסוגי תאים ותנאים שונים. בבחירת שיטת ניתוק, חשוב ביותר לקחת בחשבון את הצרכים הספציפיים של קו התאים ואת מטרות הניסוי. ניטור קבוע של חיוניות התאים, במטרה להגיע ליותר מ-90% בעת התרבית המשנית, חיוני לבריאות ולפריון המתמשכים של התרבית. להלן סקירה כללית של נהלים אלה: