SH-SY5Y Hücreleri - Nöroblastom Araştırmaları ve SH-SY5Y Hücrelerinin Nörobilimsel Önemi

İnsan nöroblastomundan elde edilen SH-SY5Y hücre hattı, nörodejeneratif hastalıkların araştırılması ve ilaç geliştirilmesi amacıyla tıbbi araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar bu hücreleri orijinal, farklılaşmamış halleriyle kullanmakta ya da onları nöronlara benzeyen hücrelere farklılaştırmaktadır.

SH-SY5Y hücre hattı hakkında genel bilgiler ve kökeni

Bu bölümde, kökeni, tanımı ve hücresel yapısı dahil olmak üzere SH-SY5Y hücre hattı hakkında temel bilgiler ele alınacaktır. Morfolojisi ve hücrelerin kökeni gibi sorular ele alınacaktır.

• SH-SY5Y, 1970 yılında SK-N-SH nöroblastom hücre hattının alt klonlanmasıyla elde edilen, insan kaynaklı bir hücre hattıdır.
• Ana hücre hattı olan SK-N-SH, dört yaşındaki bir kız çocuk nöroblastom hastasının kemik iliği biyopsisinden geliştirilmiştir.
• SH-SY5Y hücreleri fenotipik olarak adrenerjiktir ve dopaminerjik belirteçleri eksprese eder; bu da onları nörodejeneratif hastalıklar, nörojenez ve beyin hücresi özelliklerini incelemek için yararlı bir in vitro model haline getirir [1].
• SH-SY5Y hücreleri, nöritlere sahip canlı nöroblastik hücre kümeleri halinde büyür ve gevşek bir şekilde yapışır.
• SH-SY5Y hücrelerinin boyutu 12 μm'dir.
• SH-SY5Y hücrelerinin modal kromozom sayısı 47'dir ve bu hücreler, 1. kromozomun uzun koluna 1q segmentinin fazladan bir kopyasının eklenmesinden kaynaklanan, 1. kromozomun nadir bir belirteci olan 1q trisomisine sahiptir.

SH-SY5Y Hücrelerinin Kültürü

Nörobiyolojik araştırma laboratuvarlarında, SH-SY5Y hücreleri en sık kültürlenen nöroblastom hücreleridir. Bu hücrelerle çalışmak için, kültürleri için hangi tür büyüme ortamının uygun olduğunu, büyüme özelliklerini, optimal tohumlama yoğunluğunu ve dondurma için uygun yöntemi anlamak çok önemlidir. Bu bölüm, bu konularda size yardımcı olmak amacıyla SH-SY5Y hücrelerinin kültürlenmesi hakkında temel bilgileri sunacaktır.

SH-SY5Y Hücrelerinin Kültürüyle İlgili Önemli Noktalar

Popülasyon İkiye Katlanma Süresi: SH-SY5Y hücreleri için ortalama popülasyon ikiye katlanma süresi yaklaşık 3 ila 4 gündür.

Yapışkan mı, Süspansiyon Halinde mi: SH-SY5Y hücreleri gevşek yapışkan hücrelerdir. Yüksek yoğunlukta ekildiğinde kümeler halinde büyürler.

Ekme Yoğunluğu: SH-SY5Y için optimal ekme yoğunluğu 1 x 10⁴ hücre/cm²'dir. SH-SY5Y kültürleri hem yapışkan hem de yüzen hücrelerden oluşur.

Büyüme Ortamı: 3,1 g/L glikoz, %10 FBS ve 1,6 mM L-glutamin ile takviye edilmiş DMEM:Ham's F12 besiyeri, SH-SY5Y hücre hattının yetiştirilmesi için idealdir.

Büyüme Koşulları (Sıcaklık, CO₂): SH-SY5Y hücreleri, %5 CO₂ beslemesi olan nemlendirilmiş bir inkübatörde 37°C sıcaklıkta büyütülür.

Saklama: SH-SY5Y hücrelerinin canlılığını korumak için, bu hücreler -150°C'nin altındaki sıcaklıkta sıvı azotun buhar fazında saklanır.

Dondurma Süreci ve Ortamı: SH-SY5Y hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamları kullanılır. Bu nöroblastom hücre hattını dondurmak için, sıcaklığı kademeli olarak 1°C düşüren yavaş dondurma yöntemi tercih edilir.

Çözme Süreci: SH-SY5Y hücrelerini içeren dondurulmuş şişeler, 37°C sıcaklığa ayarlanmış bir su banyosuna yerleştirilir. Hücreler çözülene ve geriye sadece küçük bir buz topakçığı kalana kadar şişe hızlı bir şekilde çalkalanır.

Biyogüvenlik Seviyesi: SH-SY5Y hücreleri, biyogüvenlik seviyesi 1 olan bir laboratuvarda kültürlenebilir.

SH-SY5Y hücreleri: Avantajlar ve Sınırlamalar

Avantajlar

• Nöronlara Farklılaşma: SH-SY5Y hücreleri, belirli bileşikler kullanılarak işlevsel nöronlara farklılaştırılabilir; bu da birincil nöronlara göre daha uygun bir alternatif sunar ve bunların kullanımıyla ilişkili etik endişeleri ortadan kaldırır [2].
• Nörodejeneratif Hastalıklar için İn Vitro Model: Dopaminerjik nöral belirteçler de dahil olmak üzere moleküler belirteçlerin ekspresyonu, SH-SY5Y hücrelerini Parkinson gibi nörodejeneratif hastalıkların incelenmesi için uygun hale getirir.

Sınırlamalar

• Senkronize Olmayan Hücre Döngüsü: SH-SY5Y hücre kültürleri, farklılaşmamış durumda senkronize olmayan hücre döngüleri sergiler [3].
• Tanımlanmamış Farklılaşma Durumu: SH-SY5Y hücreleri, tümör oluşturucu nöroblastom durumundan postmitotik nöronlara veya nöral progenitör hücrelere kadar uzanan, tanımlanmamış bir farklılaşma durumuna sahiptir. Bu hücreler, olgun nöron hücrelerinin eksprese ettiği moleküler belirteçleri eksprese etmez [4].

İn Vitro Nörofarmakoloji ve İlaç Keşfi için SH-SY5Y Hücreleri

SH-SY5Y hücrelerinin kullanım alanları

Nörodejeneratif Hastalık Araştırmaları: SH-SY5Y hücreleri, Alzheimer ve Parkinson hastalığı gibi nörodejeneratif bozuklukları incelemek için kullanılır. Örneğin, bir çalışmada SH-SY5Y hücreleri, Alzheimer hastalığının in vitro modelini oluşturmak amacıyla amiloid β peptid 1-42 ile işlenmiştir. Daha sonra, geliştirilen hücre hattına pcDNA-17A ve 17A shRNA transfüze edilerek, uzun kodlamayan RNA 17A'nın Alzheimer hastalığına benzer hücreler üzerindeki etkisi incelenmiştir. Çalışma, LncRNA-17A'nın SH-SY5Y hücrelerinin apoptozunu ve otofajisini düzenlediğini ve AD'yi taklit ettiğini göstermiştir [5].

İlaç Geliştirme: SH-SY5Y hücreleri, nörodejeneratif hastalıklara karşı terapötik etkileri açısından ilaçları taramak ve doğrulamak için kullanılır. Örneğin, 2021 yılında yapılan bir çalışmada, bir herbisit (Paraquat) kullanılarak SH-SY5Y hücrelerinde parkinsonizm indüklendi ve ardından bu hücreler, bir flavonoid olan Naringenin'in terapötik potansiyelini araştırmak için kullanıldı. Bu bileşik, hücre modellerinde Parkinson hastalığına bağlı nörodejenerasyon ve nörotoksisiteye karşı koruyucu bir etki göstermiş ve bu da PD tedavilerinin geliştirilmesinde potansiyelini ortaya koymuştur [6].

SH-SY5Y Hücrelerini Konu Alan Araştırma Yayınları

SH-SY5Y hücreleri üzerine çok sayıda araştırma çalışması bulunmaktadır. Bu bölümde birkaç önemli örnek ele alınacaktır.

• LncRNA17A, Alzheimer hastalığı için bir in vitro model olarak SH-SY5Y hücre hattının otofajisini ve apoptozunu düzenler: Bu yayında, LncRNA17A'nın deneysel olarak Alzheimer hastalığı modeline dönüştürülen SH-SY5Y hücrelerinin apoptoz ve otofajisini aracılık ettiği öne sürülmüştür.
• Naringenin, SH-SY5Y hücrelerinde ve Parkinson hastalığı sıçan modelinde paraquat kaynaklı dopaminerjik nöron kaybını hafifletir: Bu çalışma, deneysel olarak geliştirilmiş Parkinson hastalığı hücresel ve hayvan modellerine karşı bir nöroprotektif ajan olarak Naringenin bileşiklerini önermiştir.
• Parkinson hastalığı modeli olarak proliferatif ve farklılaşmış SH-SY5Y hücre hattının biyokimyasal karakterizasyonu: Farklılaşmış SH-SY5Y hücreleri, Parkinson hastalığında sıklıkla incelenen çeşitli biyokimyasal süreçleri karakterize etmek ve değerlendirmek için kullanılmıştır.
• Acitretin'in insan nöronal SH-SY5Y hücreleri üzerindeki in vitro etkileri: Nöronal farklılaşmayı incelemek için SH-SY5Y hücreleri kullanılmıştır. Araştırmacılar, Acitretin'in nöron farklılaşmasını teşvik ettiğini ve nörodejeneratif ve nörogelişimsel bozuklukları ile beyin tümörlerini tedavi ettiğini araştırmışlardır.
• SH-SY5Y hücre hattının nöron benzeri hücrelere dönüşümü: Elektrofizyolojik ve biyomekanik değişikliklerin incelenmesi: Bu çalışmada, SH-SY5Y nöral blastom hücreleri, retinoik asit ve Beyinden Kaynaklanan Nörotrofik Faktör (BDNF) molekülleriyle işlenerek nöronlara dönüştürülmüş ve bu süreçteki biyokimyasal ve elektrofizyolojik değişiklikler incelenmiştir.

SH-SY5Y Hücreleri İçin Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası

Bu ünlü nöroblastom hücre hattı hakkında çeşitli çevrimiçi kaynaklar mevcuttur. Bu kaynaklar, SH-SY5Y kültürlerinin kullanımı ve bakımı konusunda size bilgi verebilir.

Hücre kültürü protokolleri

Aşağıdaki web sitesi makaleleri, SH-SY5Y hücrelerinin kültürlenmesi, dondurulması ve çözülmesi yöntemlerini öğrenmenize yardımcı olabilir.

• SH-SY5Y hücrelerinin kültürü: Hücrelerin çözülmesi, dondurulması ve alt kültürlenmesi dahil olmak üzere SH-SY5Y hücreleri hakkında temel bilgiler.
• SH-SY5Y alt kültürleme: SH-SY5Y hücreleri için kullanılan büyüme ortamları ve alt kültürleme adımları hakkında bilgiler sunar.
• SH-SY5Y hücrelerinin transfeksiyonu: Bu belge, SH-SY5Y hücre hattı için geçici bir transfeksiyon protokolünü açıklamaktadır.
• Farklılaşma protokolü: Bu videoda, SH-SY5Y hücrelerinin farklılaşması için izlenecek protokol açıklanmaktadır.

Bu makalenin, SH-SY5Y hücrelerinin işlenmesi, kültürü ve araştırma çalışmalarında kullanımı konusunda faydalı bilgiler sunacağını umuyoruz; bu nöroblastom hücre hattı üzerinde çalışmak istiyorsanız, bizden sipariş vermeyi düşünün.

SH-SY5Y Hücre Hattı: Sıkça Sorulan Sorular