SH-SY5Y Hücreleri - Nöroblastom Araştırmaları ve SH-SY5Y Hücrelerinin Sinirbilimsel Önemi
İnsan nöroblastomundan türetilen SH-SY5Y hücre hattı, nörodejeneratif hastalıkları araştırmak ve ilaç geliştirmek için tıbbi araştırmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar bu hücreleri orijinal farklılaşmamış formlarında kullanmakta veya nöronlara benzeyen hücrelere farklılaştırmaktadır.
SH-SY5Y hücre hattının genel bilgileri ve kökeni
Bu bölümde SH-SY5Y hücre hattı hakkında kökeni, tanımı ve hücresel yapısı dahil olmak üzere temel bilgiler ele alınacaktır. Morfolojisi ve hücrelerin kökeni gibi soruları ele alacağız.
- SH-SY5Y, 1970 yılında SK-N-SH nöroblastom hücre hattının alt klonlanmasından ortaya çıkan insan kaynaklı bir hücre hattıdır.
- Ana hücre hattı olan SK-N-SH, dört yaşındaki bir kadın nöroblastom hastasının kemik iliği biyopsisinden geliştirilmiştir.
- SH-SY5Y hücreleri fenotipik olarak adrenerjiktir ve dopaminerjik belirteçleri ifade eder, bu da onları nörodejeneratif hastalıklar, nörogenez ve beyin hücresi özelliklerini incelemek için yararlı bir in vitro model haline getirir [1].
- SH-SY5Y hücreleri nöritlere sahip canlı nöroblastik hücre kümeleri olarak büyür ve gevşek bir şekilde yapışıktır.
- SH-SY5Y hücrelerinin hücre boyutu 12 μm'dir.
- SH-SY5Y hücreleri için modal kromozom sayısı 47'dir ve 1q segmentinin fazladan bir kopyasının kromozom 1'in uzun koluna eklenmesinden kaynaklanan nadir bir kromozom numarası 1 işaretine, 1q trizomisine sahiptirler.
SH-SY5Y Hücrelerinin Kültürlenmesi
Nörobiyolojik araştırma laboratuvarlarında SH-SY5Y hücreleri en çok kültüre alınan nöroblastom hücreleridir. Bu hücrelerle çalışmak için, kültürleri için hangi tür büyüme ortamının uygun olduğunu, büyüme özelliklerini, optimum ekim yoğunluğunu ve onları dondurmak için uygun yöntemi anlamak çok önemlidir. Bu bölümde, SH-SY5Y hücrelerinin kültüre alınmasıyla ilgili temel bilgiler verilerek bu konularda size yardımcı olunacaktır.
SH-SY5Y Hücrelerinin Kültüre Alınması için Önemli Noktalar
|
Popülasyon İkiye Katlanma Süresi: SH-SY5Y hücreleri için ortalama popülasyon ikiye katlanma süresi yaklaşık 3 ila 4 gündür. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: SH-SY5Y gevşek yapışık hücrelerdir. Yüksek yoğunlukta tohumlandıklarında kümeler halinde büyürler. |
|
Tohumlama Yoğunluğu: SH-SY5Y için optimum ekim yoğunluğu 1 x 104 hücre/cm2'dir. SH-SY5Y kültürleri hem yapışık hem de yüzen hücrelerden oluşur. |
|
Büyüme Ortamı: DMEM: 3,1 g/L glukoz, %10 FBS ve 1,6 mM L-glutamin ile desteklenmiş Ham's F12 ortamı SH-SY5Y hücre hattını büyütmek için idealdir. |
|
Büyüme Koşulları (Sıcaklık, CO2): SH-SY5Y hücreleri %5 CO2 beslemesi ile nemlendirilmiş bir inkübatörde 37°C sıcaklıkta büyütülür. |
|
Depolama: SH-SY5Y hücrelerinin canlılığını korumak için -150°C sıcaklığın altında sıvı nitrojenin buhar fazında saklanırlar. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: SH-SY5Y hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF dondurma ortamı kullanılır. Bu nöroblastom hücre hattını dondurmak için sıcaklığı kademeli olarak 1°C düşüren yavaş dondurma yöntemi tercih edilir. |
|
Çözdürme İşlemi: SH-SY5Y hücrelerini içeren dondurulmuş flakonlar 37°C sıcaklığa ayarlanmış bir su banyosuna yerleştirilir. Hücreler çözülene ve sadece küçük bir buz kümesi kalana kadar flakon hızla çalkalanır. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: SH-SY5Y hücreleri biyogüvenlik seviyesi 1 olan bir laboratuvarda kültürlenebilir. |
SH-SY5Y hücreleri: Avantajlar ve Sınırlamalar
Avantajlar
- Nöronlara Farklılaşma: SH-SY5Y hücreleri spesifik bileşikler kullanılarak fonksiyonel nöronlara farklılaştırılabilir, bu da primer nöronlara daha uygun bir alternatif sağlar ve kullanımlarıyla ilgili etik kaygıları ortadan kaldırır [2].
- Nörodejeneratif Hastalıklar için İn Vitro Model: Dopaminerjik nöral belirteçler de dahil olmak üzere moleküler belirteçlerin ifadesi, SH-SY5Y hücrelerini Parkinson gibi nörodejeneratif bozuklukları incelemek için uygun hale getirir.
Sınırlamalar
- Senkronize Olmayan Hücre Döngüsü: SH-SY5Y hücre kültürleri farklılaşmamış bir durumda senkronize olmayan hücre döngüleri sergiler [3].
- Tanımlanmamış Farklılaşma Durumu: SH-SY5Y hücreleri, tümörijenik nöroblastom durumundan postmitotik nöronlara veya nöral progenitör hücrelere kadar değişen tanımlanmamış bir farklılaşma durumuna sahiptir. Olgun nöron hücrelerinin yaptığı moleküler belirteçleri ifade etmezler [4].
İn Vitro Nörofarmakoloji ve İlaç Keşfi için SH-SY5Y Hücreleri
SH-SY5Y hücrelerinin uygulamaları
Nörodejeneratif Hastalık Araştırması: SH-SY5Y hücreleri, Alzheimer ve Parkinson hastalığı gibi nörodejeneratif bozuklukları incelemek için kullanılmaktadır. Örneğin, bir çalışmada Alzheimer hastalığının in vitro modelini oluşturmak için SH-SY5Y hücreleri amiloid β peptid 1-42 ile muamele edilmiştir. Geliştirilen hücre hattı daha sonra uzun kodlamayan RNA 17A'nın Alzheimer hastalığı benzeri hücreler üzerindeki etkisini incelemek için pcDNA-17A ve 17A shRNA ile transfekte edildi. Çalışma, LncRNA-17A'nın SH-SY5Y hücrelerinin apoptozunu ve otofajisini düzenleyerek AD'yi taklit ettiğini göstermiştir [5].
İlaç Geliştirme: SH-SY5Y hücreleri, nörodejeneratif hastalıklara karşı terapötik etkileri için ilaçları taramak ve doğrulamak için kullanılır. Örneğin, 2021 yılında yapılan bir çalışmada SH-SY5Y hücrelerinde bir herbisit (Paraquat) kullanılarak parkinsonizm indüklenmiş ve daha sonra bu hücreler bir flavonoid olan Naringenin'in terapötik potansiyelini araştırmak için kullanılmıştır. Bileşik, hücre modellerinde Parkinson hastalığı aracılı nörodejenerasyon ve nörotoksisiteye karşı koruyucu bir etki göstererek PH tedavileri geliştirme potansiyeline işaret etmiştir [6].
SH-SY5Y Hücrelerini İçeren Araştırma Yayınları
SH-SY5Y hücreleri üzerine çok sayıda araştırma çalışması bulunmaktadır. Bu bölümde birkaç önemli örnek ele alınacaktır.
- LncRNA17A, Alzheimer hastalığı için in vitro bir model olarak SH-SY5Y hücre hattının otofajisini ve apoptozunu düzenler: Bu yayında, LncRNA17A'nın deneysel olarak Alzheimer hastalığı modeline dönüştürülen SH-SY5Y hücrelerinin apoptoz ve otofajisine aracılık ettiği öne sürülmüştür.
- Naringenin, SH-SY5Y hücrelerinde ve bir sıçan Parkinson hastalığı modelinde paraquat kaynaklı dopaminerjik nöronal kaybı hafifletir: Bu çalışma, Naringenin bileşiklerini deneysel olarak geliştirilen bir hücresel ve hayvan Parkison hastalığı modeline karşı bir nöroprotektan olarak önerdi.
- Parkinson hastalığı için bir model olarak proliferatif ve farklılaşmış SH-SY5Y hücre hattının biyokimyasal karakterizasyonu: Farklılaştırılmış SH-SY5Y hücreleri, Parkinson hastalığında sıklıkla incelenen çeşitli biyokimyasal süreçleri karakterize etmek ve değerlendirmek için kullanılmıştır.
- Asitretinin İnsan Nöronal SH-SY5Y Hücreleri Üzerindeki İn Vitro Etkileri: SH-SY5Y hücreleri nöronal farklılaşmayı incelemek için kullanıldı. Araştırmacılar, Asitretinin nöron farklılaşmasını desteklediğini ve nörodejeneratif ve nörogelişimsel bozuklukları ve beyin tümörlerini tedavi ettiğini araştırdı.
- SH-SY5Y hücre hattının nöron benzeri hücrelere dönüşümü: Elektrofizyolojik ve biyomekanik değişikliklerin incelenmesi: Bu çalışmada SH-SY5Y nöral blastoma hücreleri retinoik asit ve Beyin Kaynaklı Nörotrofik Faktör (BDNF) molekülleri ile muamele edilerek nöronlara dönüştürülmüş ve biyokimyasal ve elektrofizyolojik değişimleri incelenmiştir.
SH-SY5Y Hücreleri için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Bu ünlü nöroblastom hücre hattı hakkında çeşitli çevrimiçi kaynaklar mevcuttur. Bu kaynaklar sizi SH-SY5Y kültürlerinin kullanımı ve bakımı konusunda eğitebilir.
Hücre kültürü protokolleri
Aşağıdaki web sitesi makaleleri SH-SY5Y hücrelerini kültüre alma, dondurma ve çözme yöntemlerini öğrenmenize yardımcı olabilir.
- SH-SY5Y hücrelerinin kültüre alınması:Hücre çözme, dondurma ve alt kültürleme dahil olmak üzere SH-SY5Y hücreleri hakkında temelbilgiler.
- SH-SY5Y alt kültürleme: SH-SY5Y hücreleri için kullanılan büyüme ortamı ve alt kültürleme adımları hakkında bilgi gösterir.
- SH-SY5Y hücrelerini transfekte etme: Bu belgede SH-SY5Y hücre hattı için geçici transfeksiyon protokolü açıklanmaktadır.
- Farklılaştırma protokolü: Bu video SH-SY5Y hücrelerini farklılaştırma protokolünü açıklamaktadır.
Bu makalenin SH-SY5Y hücre işleme, kültürleme ve araştırma çalışmalarında kullanımına ilişkin faydalı bilgiler sağlayacağını umuyoruz; bu nöroblastom hücre hattı üzerinde çalışmak istiyorsanız, bizden sipariş vermeyi düşünün.
SH-SY5Y Hücre Hattı: Sıkça Sorulan Sorular
Referanslar
- Carvajal-Oliveros, A., ve diğerleri, BE (2)-M17 hücre hattı, çoğunlukla serotonerjik olan Parkinson araştırmaları için geleneksel olarak kullanılan SH-SY5Y'den daha iyi bir dopaminerjik fenotipe sahiptir. IBRO Neuroscience Reports, 2022. 13: p. 543-551.
- Kovalevich, J. ve D. Langford, Nörobiyolojide SH-SY5Y nöroblastoma hücrelerinin kullanımına ilişkin hususlar. Nöronal hücre kültürü: yöntemler ve protokoller, 2013: s. 9-21.
- Martin, E.-R., J. Gandawijaya ve A. Oguro-Ando, B-27 takviyesi kullanarak glutamaterjik SH-SY5Y nöron benzeri hücreler üretmek için yeni bir yöntem. Frontiers in Pharmacology, 2022: s. 4042.
- Feles, S., et al., Nöroblastom hücre hattı SH-SY5Y için kültür koşullarının kolaylaştırılması: fonksiyonel çalışmalar için bir ön koşul. Yöntemler ve Protokoller, 2022. 5(4): p. 58.
- Wang, X., M. Zhang ve H. Liu, LncRNA17A, Alzheimer hastalığı için in vitro bir model olarak SH-SY5Y hücre hattının otofajisini ve apoptozunu düzenler. Biyobilim, biyoteknoloji ve biyokimya, 2019. 83(4): p. 609-621.
- Ahmad, M.H., et al., Naringenin, SH-SY5Y hücrelerinde ve bir sıçan Parkinson hastalığı modelinde paraquat kaynaklı dopaminerjik nöronal kaybı hafifletir. Nörofarmakoloji, 2021. 201: p. 108831.
