เผยแพร่: 2023 | ตรวจสอบล่าสุด: พฤษภาคม 2026
เซลล์ HeLa: การปฏิวัติการวิจัย
นับตั้งแต่การค้นพบในปี 1951 เซลล์ Hela ซึ่งเป็นสายพันธุ์ของเซลล์อมตะที่ตั้งชื่อตาม Henrietta Lacks ได้ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์ Henrietta Lacks เป็นหญิงชาวแอฟริกัน-อเมริกันวัย 31 ปี แม่ของลูกห้าคน ซึ่งได้รับการวินิจฉัยว่าเป็นมะเร็งปากมดลูกในปีเดียวกับที่เธอเสียชีวิต จอร์จ อ็อตโต เกย์ ผู้อำนวยการห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อที่โรงพยาบาลจอห์นส์ ฮอปกินส์ ได้เก็บรวบรวมและขยายเซลล์มะเร็งปากมดลูกของเธอ ซึ่งพิสูจน์แล้วว่ามีความทนทานและสามารถขยายพันธุ์ได้อย่างยอดเยี่ยม ทำให้สามารถนำไปใช้ในงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์ได้อย่างกว้างขวาง แตกต่างจากเซลล์มนุษย์ชนิดอื่น ๆ เซลล์ HeLa สามารถคงสภาพและขยายพันธุ์ในหลอดทดลองได้ ซึ่งถือเป็นความก้าวหน้าครั้งสำคัญในการวิจัยทางการแพทย์
- อาหารเลี้ยงเชื้อ
ดูหน้าสินค้า - เวลาสองเท่า
ดูหน้าสินค้า - ประเภทการเติบโต
ยึดติด - ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ
BSL-1 - มีจำหน่ายจาก
ไซเทียน — สั่งซื้อเซลล์ HeLa
ประวัติและลำดับเหตุการณ์ของเซลล์เฮลา
เฮนรีเอตตา แล็กส์, ชาวไร่ยาสูบผิวสี, ถูกนำตัวไปยังโรงพยาบาลจอห์นส์ ฮอปกินส์ ในปี 1951 เนื่องจากมีอาการเลือดออกทางช่องคลอดผิดปกติ และต่อมาได้รับการรักษาโรคมะเร็งปากมดลูก การรักษาครั้งแรกของเธอประกอบด้วยการเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อจากปากมดลูกของเธอโดยไม่ได้รับความยินยอมจากเธอ การตัดชิ้นเนื้อจากปากมดลูกได้ตัวอย่างเนื้อเยื่อสำหรับการตรวจทางคลินิกของจอร์จ ออตโต เกย์ ซึ่งถูกศึกษาในห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ แตกต่างจากตัวอย่างก่อนหน้านี้ ผู้ช่วยในห้องปฏิบัติการของเกย์สังเกตว่าเซลล์เพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าทุก 20–24 ชั่วโมงและขยายตัวอย่างรวดเร็ว เกย์ได้แพร่กระจายเซลล์มะเร็งปากมดลูกของแล็กส์ก่อนที่เธอจะเสียชีวิต และเซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์มนุษย์ในหลอดทดลองที่สามารถดำรงชีวิตได้เป็นครั้งแรก เซลล์เหล่านี้ถูกตั้งชื่อตามตัวอักษรสองตัวแรกของชื่อและนามสกุลของเฮนรีเอตตา แล็กส์ และถูกมอบให้กับนักวิทยาศาสตร์ทุกคนที่ขอเพื่อความก้าวหน้าในการวิจัย
แม้ว่าเซลล์จะถูกเก็บรวบรวมโดยไม่ได้รับความยินยอมจากแล็กส์หรือครอบครัวของเธอ แต่ในขณะนั้นการขออนุญาตไม่จำเป็นและไม่เป็นที่ต้องการ ไม่มีหน้าที่ต้องแจ้งเตือนผู้ป่วยหรือสมาชิกในครอบครัวว่าวัสดุที่ถูกทิ้งหรือได้มาจากการผ่าตัดนั้นเป็นทรัพย์สินของแพทย์หรือสถานพยาบาล ในช่วงทศวรรษ 1970 มีการเปิดเผยต่อสาธารณะโดยไม่ได้ตั้งใจว่าชื่อจริงของเฮนรีเอตตาคืออะไร และครอบครัวแล็กส์ถูกขอตัวอย่างดีเอ็นเอเพื่อช่วยในการระบุสายพันธุ์เซลล์ที่ปนเปื้อน สายพันธุ์เซลล์ HeLa มีต้นกำเนิดจากตัวอย่างเนื้อเยื่อปากมดลูกของ Lacks และถูกขยายจำนวนในวัฒนธรรมเซลล์จนมีจำนวนมากกว่าเซลล์ทั้งหมดในร่างกายของเธออย่างมาก มีสายพันธุ์ของเซลล์ HeLa หลายสายเนื่องจากพวกมันยังคงกลายพันธุ์ในวัฒนธรรมเซลล์ แต่ทั้งหมดเป็นลูกหลานของเซลล์เนื้องอกที่ถูกสกัดจาก Lacks
การแก้ไขความผิดพลาดทางประวัติศาสตร์
เรื่องราวเกี่ยวกับเฮนรีเอตตา แล็กส์ และการสกัดเซลล์ HeLa โดยไม่ได้รับความรู้หรือความยินยอมจากเธอ ได้จุดประกายการถกเถียงเกี่ยวกับจริยธรรมของการวิจัยทางการแพทย์และการคุ้มครองสิทธิส่วนบุคคล โดยเฉพาะอย่างยิ่งในเรื่องการใช้สิ่งมีชีวิตทางชีวภาพของมนุษย์ในทางวิทยาศาสตร์ เฮนรีเอตตา แล็กส์ ได้กลายเป็นแหล่งกำเนิดของเซลล์ไลน์มนุษย์ที่ไม่มีวันตายเป็นครั้งแรกโดยไม่รู้ตัว ซึ่งต่อมาได้นำไปสู่การค้นพบทางวิทยาศาสตร์มากมายนับไม่ถ้วน การตระหนักถึงการกระทำที่ผิดศีลธรรมนี้ได้กระตุ้นให้เกิดการเปลี่ยนแปลงไปสู่กระบวนการให้ความยินยอมที่เข้มงวดมากขึ้น และเพิ่มความตระหนักในหน้าที่ทางศีลธรรมของนักวิจัย กรณีนี้ไม่เพียงแต่เน้นย้ำถึงความจำเป็นในการปฏิรูปแนวปฏิบัติด้านการวิจัยเท่านั้น แต่ยังจุดประกายให้เกิดการสนทนาในวงกว้างเกี่ยวกับความยุติธรรม ความเคารพ และการยอมรับในวงการวิจัยทางการแพทย์ นำไปสู่ความพยายามในการแก้ไขความอยุติธรรมในอดีต และรับรองว่าผู้ที่มีส่วนร่วมในการพัฒนาทางวิทยาศาสตร์จะได้รับการยอมรับและปฏิบัติด้วยศักดิ์ศรี
เทอร์โม ฟิชเชอร์ และเซลล์ HeLa
คดีความต่อบริษัทเทคโนโลยีชีวภาพ Thermo Fisher Scientific ที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ HeLa มีรากฐานมาจากข้อถกเถียงทางจริยธรรมและกฎหมายที่ลึกซึ้งยิ่งขึ้นเกี่ยวกับการค้าวัสดุชีวภาพที่ได้มาจากบุคคลโดยไม่ได้รับความยินยอมจากบุคคลนั้น คดีนี้มุ่งเน้นไปที่สายพันธุ์เซลล์ HeLa ซึ่งนำไปสู่ความก้าวหน้าทางวิทยาศาสตร์ที่สำคัญ รวมถึงการพัฒนาวัคซีนโปลิโอและความก้าวหน้าในการรักษามะเร็ง
คดีความนี้ได้เปิดเผยประเด็นทางจริยธรรมหลายประการ ได้แก่ สิทธิของบุคคลและครอบครัวในการควบคุมวัสดุทางชีวภาพของตนเอง บริบททางประวัติศาสตร์ของการเก็บตัวอย่างจากบุคคลชายขอบโดยไม่ได้รับความยินยอม และความรับผิดชอบของบริษัทที่ได้รับประโยชน์จากวัสดุดังกล่าว คดีความต่อ Thermo Fisher Scientific ได้เน้นย้ำถึงความจำเป็นในการมีนโยบายและมาตรฐานทางจริยธรรมที่ชัดเจนยิ่งขึ้นเกี่ยวกับการใช้วัสดุชีวภาพของมนุษย์ในงานวิจัยและการค้า เพื่อให้มั่นใจว่ามีการเคารพสิทธิของบุคคลและการแบ่งปันผลประโยชน์อย่างเป็นธรรมจากการค้นพบทางวิทยาศาสตร์
สำหรับการสำรวจอย่างละเอียดเกี่ยวกับต้นกำเนิด, การต่อสู้ทางกฎหมาย, และการแก้ไขปัญหาที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ HeLa, โปรดอ่านบทความของเรา "เซลล์ HeLa: ประวัติศาสตร์, คดีความ, และการไกล่เกลี่ย "
ลักษณะที่น่าสนใจของเซลล์ HeLa
เซลล์ HeLa ปลูกเลี้ยงได้ง่ายและเพิ่มจำนวนอย่างรวดเร็ว อีกทั้งยังเป็นที่รู้จักในด้านความไวต่อการติดเชื้อไวรัสสูงเป็นพิเศษ โดยเฉพาะไวรัสอะดีโนของมนุษย์ชนิดที่ 3 ไวรัสเอนเซฟาโลไมโอคาร์ไดติส และไวรัสโปลิโอ 1, 2 และ 3 ลักษณะนี้ทำให้เซลล์ HeLa มีความสำคัญอย่างยิ่งในการศึกษาการจำลองแบบ การประกอบ และการก่อโรคของไวรัสเหล่านี้ รวมถึงการพัฒนาวิธีการต้านไวรัสใหม่ๆ นอกจากนี้ เซลล์ HeLa ยังถูกใช้อย่างแพร่หลายเป็นโฮสต์สำหรับการถ่ายโอนยีนเพื่อศึกษาการทำงานและการควบคุมของยีน การผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ และการบำบัดด้วยยีน
- แม้แต่สำหรับเซลล์มะเร็ง เซลล์ HeLa มีอัตราการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่สูงผิดปกติและมีอายุขัยไม่จำกัด ทำให้เป็นเซลล์ที่ยอดเยี่ยมสำหรับการวิจัยทางวิทยาศาสตร์
- เซลล์ HeLa มีรูปแบบเทโลเมอเรสที่ทำงานอยู่ ทำให้สามารถแบ่งตัวได้อย่างไม่จำกัดและคงอยู่เป็นอมตะ
- เซลล์ HeLa สามารถเอาชนะขีดจำกัดของ Hayflick ซึ่งเป็นจำนวนการแบ่งตัวของเซลล์สูงสุดที่เซลล์ปกติส่วนใหญ่สามารถทำได้ก่อนที่จะเข้าสู่ภาวะชรา
- เซลล์ HeLa มีจำนวนโครโมโซมที่เพิ่มเป็นสามเท่า (3n+) โดยเฉลี่ยแล้วเซลล์ HeLa จะมีจำนวนโครโมโซม 82 ตัว แต่สามารถมีได้ตั้งแต่ 70 ถึง 164 ตัว (ซึ่งแตกต่างจากจำนวนโครโมโซมมาตรฐานของสิ่งมีชีวิตสองชุดที่ 46 ตัว) โครโมโซมเหล่านี้เรียกว่า "โครโมโซมลายเซ็นของเซลล์ Hela" เซลล์ Hela มีลักษณะทางโครโมโซมที่ซับซ้อนซึ่งมีลักษณะเด่นคือมีจำนวนโครโมโซมผิดปกติในระดับสูงและการจัดเรียงโครงสร้างใหม่ เซลล์ HeLa มีโครโมโซมเทเลโอเซนทริกขนาดเล็กใน 98% ของเซลล์และมีความผิดปกติของจำนวนโครโมโซม (aneuploidy) 100% ในเซลล์ที่ตรวจสอบจำนวน 1,385 เซลล์ ความผิดปกติของโครโมโซมเหล่านี้มีบทบาทสำคัญในการเพิ่มจำนวนอย่างรวดเร็วและการมีชีวิตอยู่ตลอดไปของเซลล์ HeLa และยังเกี่ยวข้องกับมะเร็งปากมดลูกอีกด้วย
- เนื่องจากการถ่ายโอนยีนในแนวนอนจากไวรัสฮิวแมนแพปพิลโลมาไวรัส 18 (HPV18) ไปยังเซลล์ปากมดลูกของมนุษย์ เซลล์ HeLa จึงมีจีโนมที่แตกต่างจากของเฮนรีเอตตา แล็กส์
โครงสร้างของเซลล์ HeLa
เซลล์ HeLa มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 - 20 ไมโครเมตร ขึ้นอยู่กับสภาพการเพาะเลี้ยง เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่มีเส้นผ่านศูนย์กลางอยู่ระหว่าง 10 ถึง 100 ไมโครเมตร เซลล์มนุษย์ที่มีขนาดเล็กที่สุดชนิดหนึ่งคือเซลล์เม็ดเลือดแดง ซึ่งมีเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 8 ไมโครเมตร ในทางกลับกัน เซลล์กล้ามเนื้อและเซลล์ประสาทสามารถยาวได้เป็นอย่างมาก
ความก้าวหน้าทางการวิจัยด้วย HeLa
เซลล์ HeLa ได้เป็นหัวใจสำคัญของการก้าวหน้าทางการวิจัยที่สำคัญ รวมถึงการค้นพบในทางพันธุศาสตร์ ไวรัสวิทยา และการพัฒนาการรักษา เซลล์ไลน์ HeLa ได้ถูกนำมาใช้ในการศึกษาโรคมะเร็ง โรคเอดส์ ผลกระทบของรังสีและสารพิษ การทำแผนที่ทางพันธุกรรม และการวิจัยทางวิทยาศาสตร์อื่น ๆ อีกมากมาย มีการตีพิมพ์บทความทางวิทยาศาสตร์มากกว่า 60,000 บทความเกี่ยวกับการวิจัย HeLa โดยเพิ่มขึ้นมากกว่า 300 บทความต่อเดือน
การกำจัดโรคโปลิโอ
ในช่วงทศวรรษ 1950 โจนาส ซอลค์ ได้ทดสอบวัคซีนโปลิโอตัวแรกโดยใช้เซลล์ HeLa เซลล์เหล่านี้มีความไวต่อการติดเชื้อโปลิโอไมเอลิติส ส่งผลให้เซลล์ที่ติดเชื้อตาย ด้วยเหตุนี้ เซลล์ HeLa จึงเป็นที่ต้องการสูงสำหรับการทดสอบวัคซีนโปลิโอ เนื่องจากสามารถให้ผลลัพธ์ได้อย่างรวดเร็ว
ไวรัสวิทยา
เซลล์ HeLa ถูกติดเชื้อด้วยไวรัสหลายชนิด รวมถึง HIV, Zika, เริม และคางทูม เพื่อทดสอบและพัฒนายาและวัคซีนใหม่ ดร. ริชาร์ด แอ็กเซล ค้นพบว่าเซลล์ HeLa สามารถติดเชื้อ HIV ได้โดยการเพิ่มโปรตีน CD4 เพื่อให้สามารถศึกษาไวรัสได้ เซลล์ HeLa ถูกใช้ในการวิจัยการแสดงออกของโปรตีน E2 ของไวรัส papillomavirus และการตายของเซลล์แบบ apoptosis และยังมีบทบาทสำคัญในการพัฒนาวัคซีนไวรัส papillomavirus (HPV) ในมนุษย์อีกด้วย
มะเร็ง
เซลล์ HeLa ถูกนำมาใช้ในการศึกษาวิจัยเกี่ยวกับมะเร็งหลายประเภท รวมถึงการศึกษาฮอร์โมนเพศ เช่น เอสตราไดออล เอสโตรเจน และตัวรับเอสโตรเจน รวมถึงสารที่มีคุณสมบัติคล้ายเอสโตรเจน เช่น เควอซิทิน และคุณสมบัติในการป้องกันมะเร็งของเควอซิทิน นอกจากนี้ เซลล์ HeLa ยังถูกใช้ในการศึกษาผลของฟลาโวนอยด์และสารต้านอนุมูลอิสระร่วมกับเอสตราไดออลต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็ง
แอปพลิเคชันที่น่าสนใจอื่น ๆ ได้แก่
- การรักษามะเร็ง: เซลล์เฮลา (Hela cells) มีความสำคัญอย่างยิ่งในการสร้างยาต้านมะเร็ง เช่น แคมโพโทเซทิน (camptothecin) ซึ่งเป็นยาที่ได้รับการรับรองจากองค์การอาหารและยา (FDA) สำหรับรักษามะเร็งรังไข่ มะเร็งปอด และมะเร็งปากมดลูก
- ทาลิโดไมด์และมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดมัลติเพิล มัยอีโลมา: เซลล์ HeLa ถูกนำมาใช้เพื่ออธิบายว่ายาทาลิโดไมด์ ซึ่งถูกใช้ในตอนแรกเพื่อรักษาอาการแพ้ท้อง อาจก่อให้เกิดความพิการแต่กำเนิด และนำไปสู่การใช้ยาชนิดนี้ในการรักษาโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดมัลติเพิล มัยอีโลมา
- การเข้าใจ HIV และ AIDS: การเปิดเผยว่า HIV มีปัญหาในการติดเชื้อในเซลล์ HeLa ช่วยให้นักวิจัยเข้าใจไวรัสได้ดีขึ้น และเปิดประตูสู่การพัฒนาการรักษา HIV และ AIDS
- การแก่ของเซลล์: เซลล์ HeLa ได้ช่วยให้นักวิจัยสามารถสำรวจชีววิทยาของการแก่และโรคที่ทำให้เกิดการแก่ก่อนวัยอันควร ซึ่งนำไปสู่การค้นพบโครโมโซมที่สามารถฟื้นฟูได้ซึ่งช่วยป้องกันการเสื่อมสภาพและความเสียหายของเซลล์เมื่อเวลาผ่านไป
- ความผิดปกติของเลือด: เซลล์ HeLa ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินประสิทธิภาพของไฮดรอกซียูเรียต่อมะเร็งเม็ดเลือดชนิดต่างๆ และภาวะโลหิตจาง; ปัจจุบันไฮดรอกซียูเรียถูกนำมาใช้ในการรักษาโรคโลหิตจางชนิดเซลล์รูปเคียวและมะเร็งเม็ดเลือดขาว
- เอกซเรย์: ในปี 1956 นักวิทยาศาสตร์ได้ใช้เซลล์ HeLa เพื่อศึกษาผลกระทบของรังสีเอกซเรย์ต่อสิ่งมีชีวิต ทำให้เข้าใจถึงอันตรายของรังสีในปริมาณสูงและที่ได้รับซ้ำๆ จากเอกซเรย์ทางการแพทย์ได้ดียิ่งขึ้น
- การค้นพบที่สร้างสรรค์: เซลล์ HeLa มีบทบาทสำคัญอย่างยิ่งในการค้นพบที่สำคัญหลายประการในชีววิทยา ซึ่งนำไปสู่ความก้าวหน้าในยารักษามะเร็ง ความรู้เกี่ยวกับ HIV/AIDS และอื่นๆ อีกมากมาย
- การแก่ของเซลล์: นักวิจัยที่ใช้เซลล์ HeLa ได้รับรางวัลโนเบลจากผลการค้นพบเกี่ยวกับการแก่ของเซลล์ และการป้องกันการเสื่อมสภาพและความเสียหายของเซลล์เมื่อเวลาผ่านไป
สำรวจเซลล์ HeLa และอนุพันธ์ของมัน
เซลล์ที่อาจถูกทำให้เป็นอมตะคืออะไร?
เซลล์ไลน์ที่คงอยู่ตลอดไปคือเซลล์ที่ได้รับการดัดแปลงให้สามารถแบ่งตัวได้อย่างต่อเนื่องและสามารถเพาะเลี้ยงได้เป็นระยะเวลานาน เซลล์เหล่านี้มาจากแหล่งที่มีความผิดปกติของโครโมโซมหรือการกลายพันธุ์ และอาจได้มาจากเนื้องอก เพื่อให้การเจริญเติบโตดำเนินต่อไป นักวิทยาศาสตร์จะแบ่งเซลล์บางส่วนไปยังภาชนะเพาะเลี้ยงเซลล์ใหม่และเพิ่มจำนวนเซลล์เพื่อใช้ในการทดลองต่อไป
เซลล์ HeLa เช่นเดียวกับเซลล์ไลน์อื่น ๆ ถือว่าเป็น "อมตะ" เนื่องจากสามารถแบ่งตัวได้ไม่จำกัดในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ตราบเท่าที่เงื่อนไขหลักสำหรับการอยู่รอดของเซลล์ยังคงอยู่ (กล่าวคือ ได้รับการสนับสนุนและดูแลในสภาพแวดล้อมที่เหมาะสม) มีสายพันธุ์ของเซลล์ HeLa จำนวนมากเนื่องจากพวกมันมีการกลายพันธุ์อย่างต่อเนื่องในวัฒนธรรมเซลล์ แต่ทั้งหมดมีต้นกำเนิดมาจากเซลล์เนื้องอกของ Lacks ตัวเดียวกัน จำนวนเซลล์ HeLa ที่แพร่กระจายในวัฒนธรรมเซลล์มีมากกว่าที่พบในร่างกายของ Henrietta Lacks อย่างมาก
การผลิตเซลล์ HeLa, การควบคุมคุณภาพ, และอายุการเก็บรักษา
เซลล์ HeLa สามารถเพาะเลี้ยงและเก็บเกี่ยวได้โดยใช้วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์มาตรฐานที่ความหนาแน่นประมาณ 80–90% เซลล์เหล่านี้ค่อนข้างง่ายต่อการจัดการและสามารถเพาะเลี้ยงได้ในสภาพแวดล้อมที่หลากหลาย
วิธีละลายน้ำแข็งเซลล์ HeLa ที่แช่แข็ง
- นำขวดแช่แข็งใส่ในอ่างน้ำอุ่นฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 37°C พร้อมน้ำสะอาด
- ละลายอย่างรวดเร็วเป็นเวลา 40 ถึง 60 วินาที จากนั้นนำขวดออกจากบรรจุภัณฑ์และย้ายไปยังตู้ปลอดเชื้อ
- เช็ดขวดด้วยแอลกอฮอล์ 70% และถ่ายเซลล์แขวนลอยลงในหลอดปั่นเหวี่ยงขนาด 15 มิลลิลิตรที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ 8 มิลลิลิตร
- นำเซลล์ที่เตรียมไว้มาผสมให้เข้ากันใหม่ จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 x g เป็นเวลา 3 นาที แล้วเทส่วนใสออก (หรือสามารถเจือจางด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อและนำอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้แช่แข็งออกหลังจาก 24 ชั่วโมง หากไม่ปั่นเหวี่ยงทันที)
- ถ่ายเซลล์ที่แขวนลอยในอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ 10 มิลลิลิตร ไปยังขวดเลี้ยงเซลล์ T25 จำนวนสองขวด
การเพาะเลี้ยงเซลล์ HeLa ในอาหารเลี้ยงเชื้อ
- นำสื่อกลางเก่าออกจากขวดเพาะเลี้ยงเซลล์
- ล้างเซลล์ที่ติดอยู่บนพื้นผิวโดยใช้ PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม ใช้ PBS ปริมาณ 3-5 มิลลิลิตรสำหรับขวดเลี้ยงเซลล์ขนาด T25 และ 5-10 มิลลิลิตรสำหรับขวดเลี้ยงเซลล์ขนาด T75
- เติม Accutase ลงในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ โดยใช้ 1-2 มิลลิลิตรต่อขวด T25 และ 2.5 มิลลิลิตรต่อขวด T75 ตรวจสอบให้แน่ใจว่าแผ่นเซลล์ถูกปกคลุมอย่างทั่วถึง
- บ่มขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาที
- ค่อยๆ ผสมเซลล์กับอาหารเลี้ยงเซลล์ให้เข้ากันอีกครั้ง เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตร แล้วใช้ปิเปตดูดขึ้นและลงเบาๆ เพื่อแยกกลุ่มเซลล์ออกจากกัน
- ปั่นเหวี่ยงเซลล์แขวนลอยเป็นเวลา 3 นาที ที่ความเร็ว 300 x g.
- แขวนเซลล์ในอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่
- นำเซลล์ที่แขวนลอยแล้วไปใส่ในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ใหม่ที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อสด
- เก็บเซลล์ในไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาระยะยาว
โดยการปฏิบัติตามขั้นตอนเหล่านี้ คุณสามารถแยกเซลล์และรักษาสภาพเซลล์เพาะเลี้ยงให้แข็งแรงสำหรับการทดลองในอนาคตได้