Bunky U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 €*
Produkty sa dodávajú zmrazené na suchom ľade v kryotrubkách. Každá kryotrubka obsahuje zvyčajne 3 × 10 6 buniek pre adhezívne línie alebo 5 × 106 buniek pre suspenzné línie (podrobnosti nájdete v certifikáte analýzy šarže).
Všeobecné informácie
| Popis | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 je génovo upravená ľudská osteosarkómová bunka odvodená z buniek U2OS, v ktorej bol endogénny gén SEH1L (SEH1) modifikovaný pomocou technológie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAPf tag. SEH1 je súčasťou komplexu Y (známeho aj ako komplex NUP107-160), základného štrukturálneho modulu komplexu jadrových pórov (NPC), ktorý prispieva k zostaveniu a stabilite pórového lešenia. Vložením kódujúcej sekvencie SNAPf do endogénneho lokusu sa označený proteín SEH1 exprimuje pod pôvodnou regulačnou kontrolou, čím sa zachovávajú fyziologické hladiny expresie a minimalizujú sa poruchy zloženia jadrových pórov. Značka SNAPf je umelo vytvorená, rýchlo reagujúca varianta značky SNAP, ktorá kovalentne viaže substráty konjugované s benzylguanínom, čo umožňuje selektívne a stabilné fluorescenčné značenie v živých alebo fixovaných bunkách. V bunkách U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 sa fúzny proteín lokalizuje do jadrovej membrány v bodkovitom vzore charakteristickom pre distribúciu NPC. Keďže značenie prebieha na úrovni endogénnych proteínov, tento systém je vhodný na kvantitatívnu fluorescenčnú mikroskopiu, zobrazovanie s vysokým rozlíšením a analýzy sledovania jednotlivých častíc zamerané na rozbor organizácie a stechiometrie NPC. Plochá morfológia a veľké jadrá buniek U2OS ďalej uľahčujú vizualizáciu štruktúr jadrovej membrány s vysokým rozlíšením. SEH1 sa podieľa na biogenéze NPC a je tiež zapojený do procesov spojených s kinetochórom počas mitózy. Táto bunková línia preto poskytuje robustnú platformu na skúmanie montáže a demontáže NPC závislej od bunkového cyklu, priestorovej organizácie Y-komplexu v rámci pórovitej kostry a potenciálnej dvojitej úlohy SEH1 v jadrovej membráne a mitotických kinetochóroch. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 umožňuje mechanistické štúdie architektúry a dynamiky jadrových pórov za fyziologicky relevantných podmienok expresie. |
|---|---|
| Organizmus | Ľudské |
| Tkanivo | Kosti |
| Choroba | Osteosarkóm |
Charakteristika
| Vek | 15 rokov |
|---|---|
| Pohlavie | Ženy |
| Etnická príslušnosť | Kaukazský |
| Morfológia | Epitelu podobné |
| Rastové vlastnosti | Adherent |
Regulačné údaje
| Citácie | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (katalógové číslo Cytion 300664) |
|---|---|
| Úroveň biologickej bezpečnosti | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Vkladateľ | Ellenbergova laboratória (EMBL) |
| Status GMO | GMO-S1: Táto línia ľudských osteosarkómových buniek (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) obsahuje fúziu SNAPf-SEH1 sprostredkovanú CRISPR, ktorá umožňuje selektívne značenie nukleoporínu SEH1. Modifikácia je stabilne prítomná. Táto klasifikácia platí len v Nemecku a môže sa líšiť v iných krajinách. |
Biomolekulárne údaje
| Expresia proteínov | SEH1, značka SNAPf |
|---|
Spracovanie
| Kultúrne médium | McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukóza, w: stabilný glutamín, w: 2,0 mM pyruvát sodný, w: 2,2 g/l NaHCO3 (číslo článku Cytion 820200a) |
|---|---|
| Doplnky | Doplňte médium o 10 % FBS, 3,0 g/l glukózy, stabilný glutamín, 2,0 mM pyruvát sodný, 2,2 g/l NaHCO3, 1 % NEAA |
| Disociačné činidlo | Accutase |
| Subkultivácia | Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium. |
| Zmrazovacie médium | Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie regenerácie a zníženie stresu spôsobeného kryo. |
| Rozmrazovanie a kultivácia buniek |
|
| Inkubačná atmosféra | 37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra. |
| Povrchová úprava banky | Na dosiahnutie optimálneho uchytenia a životaschopnosti po rozmrazení odporúčame používať banky alebo platne s kolagénom. |
| Postup zmrazovania | Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu. |
| Podmienky prepravy | Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu. |
| Podmienky skladovania | Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka. |
Kontrola kvality / Genetický profil / HLA
| Sterilita | Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii. Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú. |
|---|