Bunky NCH612
1 080,00 €*
Produkty sa dodávajú zmrazené na suchom ľade v kryotrubkách. Každá kryotrubka obsahuje zvyčajne 3 × 10 6 buniek pre adhezívne línie alebo 5 × 106 buniek pre suspenzné línie (podrobnosti nájdete v certifikáte analýzy šarže).
Všeobecné informácie
| Popis | NCH612 je línia oligodendrocytárnych buniek odvodená od pacienta, ktorá pochádza z ľudského mozgového tkaniva a slúži ako relevantný výskumný model pre anaplastický oligodendroglióm (WHO grade III). Táto bunková línia obsahuje mutáciu IDH1 R132H, charakteristickú genetickú zmenu, ktorá sa často spája s oligodendrogliómami. Mutácia vedie k epigenetickým modifikáciám vrátane fenotypu gliómového metylátora ostrovov CpG (G-CIMP), ktorý prispieva k rozvoju a progresii nádoru. NCH612 vykazuje najmä čiastočnú deléciu ramien chromozómu 1p a 19q, čo je genetická charakteristika, ktorá sa bežne vyskytuje u oligodendrogliómov a spája sa s lepšou prognózou a odpoveďou na určité terapie. Štúdie preukázali, že NCH612 je obzvlášť citlivý na inhibítor metyltransferázy DNA decitabín (DAC). Liečba DAC vedie k zníženiu proliferácie buniek a tvorby kolónií, a to predovšetkým prostredníctvom zníženia regulácie TERT (telomerázovej reverznej transkriptázy) a zvýšenia regulácie p21, inhibítora cyklín-dependentnej kinázy, ktorý sa podieľa na reakcii na poškodenie DNA. Zaujímavé je, že táto citlivosť zrejme súvisí s prítomnosťou mutácie IDH1 aj s deléciou kódu 1p/19q, keďže iné bunkové línie gliómov s mutáciou IDH1 bez tejto delécie, ako napríklad NCH1681, vykazujú rezistenciu voči DAC. Tieto zistenia naznačujú, že epigenetické terapie, ako je DAC, by mohli byť obzvlášť účinné pri anaplastických oligodendrogliómoch s mutáciou IDH1 a kodeleciou 1p/19q. Ďalšie molekulárne výskumy odhalili, že liečba DAC v bunkách NCH612 vedie k obohateniu dráh súvisiacich s replikáciou DNA, reguláciou bunkového cyklu a lyzozomálnou funkciou, čo vrhá svetlo na mechanizmus účinku lieku. Represia TERT pomocou DAC je sprostredkovaná p21, čo zdôrazňuje kritickú úlohu tejto dráhy v odpovedi na epigenetickú liečbu. Vzhľadom na dobre definovaný genetický a epigenetický profil predstavuje NCH612 cenný in vitro model na štúdium biológie anaplastických oligodendrogliómov a na vývoj cielenej terapie zameranej na IDH1-mutantné nádory s kodeleciou 1p/19q. |
|---|---|
| Organizmus | Ľudské |
| Tkanivo | Mozog |
| Choroba | Anaplastický oligodendroglióm, WHO stupeň III, mutácia IDH1 (R132H) |
Charakteristika
| Vek | 39 rokov |
|---|---|
| Pohlavie | Muži |
| Etnická príslušnosť | Kaukazský |
| Rastové vlastnosti | Sféroidná kultúra |
Regulačné údaje
| Citácie | NCH612 (katalógové číslo Cytion 300121) |
|---|---|
| Úroveň biologickej bezpečnosti | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_x913 |
Biomolekulárne údaje
Spracovanie
| Kultúrne médium | DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-glutamínu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a) |
|---|---|
| Doplnky | Doplňte médium o 10 % FBS, 5 mg/l heparínu, 20 ng/ml bFGF, 20 mikrogramov/l EGF, 5 mg/l inzulínu, 100 mg/l transferínu, 5,2 mikrogramu/l Na-selenitu, 6,3 mikrogramu/l progesterónu, 161,1 mikrogramu/l putrescínu, 50 mg/l hydrokortínu |
| Subkultivácia | Pri subkultivácii sféroidných kultúr začnite mechanickou disociáciou sféroidov pipetovaním hore a dole 5 až 10-krát pomocou pipety Eppendorf s 1000 μl filtračnými špičkami. Potom zmes odstreďujte pri 300 g počas 5 minút pri izbovej teplote, aby sa bunky peletizovali. Supernatant zlikvidujte a pelety buniek znovu rozpusťte v čerstvom kultivačnom médiu. Nakoniec preneste resuspendované bunky do nových kultivačných nádob, aby ste podporili ďalšiu tvorbu sféroidov. Tento postup zabezpečuje účinný rozpad sféroidov a pripravuje ich na ďalší rast v novom prostredí |
| Hustota výsevu | 1 x 105 buniek/ml |
| Obnova tekutín | Každé 2 až 3 dni sa musí pridať čerstvé médium (2 až 5 ml v závislosti od veľkosti banky s bunkovou kultúrou). |
| Obnova po rozmrazení | Pomalé. Po rozmrazení nechajte bunky zotavovať sa z procesu zmrazovania aspoň 48 hodín. |
| Zmrazovacie médium | Ako kryokonzervačné médium používame 50 % bazálne médium + 40 % FBS + 10 % DMSO alebo CM-1 (katalógové číslo Cytion 800100), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie regenerácie a zníženie stresu spôsobeného kryo. |
| Rozmrazovanie a kultivácia buniek |
|
| Inkubačná atmosféra | 37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra. |
| Povrchová úprava banky | Žiadne |
| Postup zmrazovania | Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu. |
| Podmienky prepravy | Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu. |
| Podmienky skladovania | Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka. |
Kontrola kvality / Genetický profil / HLA
| Sterilita | Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii. Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú. |
|---|---|
| Alely HLA |
A*: '02:01:01
B*: '57:01:01, '57:01:01G
C*: '04:01:01
DRB1*: '11:01:01
DQA1*: '05:05:01
DQB1*: '03:01:01
DPB1*: '04:02:01
E: '01:03:02
|