Komórki P19 - Badania nad rakiem zarodkowym z wykorzystaniem komórek P19
P19 to linia komórek mysiego raka zarodkowego. Jest ona szeroko stosowana w badaniach biomedycznych, głównie do badania biologii rozwoju, biologii komórek macierzystych, różnicowania komórek i badań przesiewowych leków. Ponieważ komórki P19 mają zdolność różnicowania, mogą być przydatne w badaniu złożonych procesów biologicznych, takich jak tworzenie tkanek i wczesny rozwój embrionalny. W tym artykule omówimy podstawy mysich komórek P19.
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek P19
Wiedza na temat ogólnej charakterystyki i pochodzenia linii komórkowej jest niezbędna przed rozpoczęciem pracy z nią. W tej sekcji omówione zostaną następujące kwestie: Czym jest linia komórkowa P19? Jaki jest rozmiar komórki P19? Jakie jest pochodzenie komórek P19?
- P19 to rodzaj pluripotencjalnych embrionalnych komórek rakowych pierwotnie uzyskanych z potworniaka rozwiniętego u myszy C3H/He. Linia komórkowa została po raz pierwszy stworzona w 1982 roku przez McBurneya i Rogersa.
- Komórki P19 mogą stale rosnąć w pożywce hodowlanej uzupełnionej surowicą. Mogą one różnicować się w inne typy komórek pod wpływem nietoksycznych leków, takich jak kwas retinowy i dimetylosulfotlenek (DMSO) [1].
- Te mysie komórki rakowe mają morfologię podobną do nabłonka.
- Linia komórkowa P19 ma euploidalny kariotyp męski (n=40; XY).
Informacje na temat hodowli komórek P19
Linia komórkowa P19 jest powszechnie hodowana w laboratoriach badawczych ze względu na swoje unikalne właściwości. Jej hodowla jest łatwa i łatwa w zarządzaniu. W tej sekcji wymieniono wszystkie kluczowe informacje potrzebne do utrzymania i hodowli komórek P19. Dowiemy się: Jaki jest czas podwojenia komórek P19? Jak hodować linię komórkową P19? Czy P19 jest adherentną linią komórkową?
Kluczowe punkty dotyczące hodowli komórek P19
|
Czas podwojenia: |
Czas podwojenia dla linii komórkowej P19 wynosi około 2 do 3 dni. |
|
Przylegające lub w zawiesinie: |
Linia komórek raka zarodkowego P19 jest adherentna. |
|
Współczynnik podhodowli: |
Komórki P19 powinny być subkulturowane co 48 godzin, a stosunek podziału dla tych komórek powinien wynosić 1:10. Komórki adherentne są przemywane 1 X solą fizjologiczną buforu fosforanowego i inkubowane z Accutase do momentu dysocjacji komórek. Komórki dodaje się do podłoża hodowlanego i zbiera przez odwirowanie. Zebrane komórki są ostrożnie zawieszane i dozowane do nowych kolb. |
|
Podłoże hodowlane: |
Do hodowli komórek P19 stosuje się pożywkę DMEM/Ham's F12 zawierającą 5% płodowej surowicy bydlęcej, 3,1 g/l glukozy, 1,6 mM L-glutaminy, 1,0 mM pirogronianu sodu, 15 mM HEPES i 1,2 g/l NaHCO3. |
|
Warunki wzrostu: |
Nawilżany inkubator ustawiony na 37°C z 5% podażą CO2 jest niezbędny do wzrostu i hodowli linii komórek raka zarodkowego P19. |
|
Przechowywanie: |
Zamrożone fiolki z komórkami P19 powinny być przechowywane w temperaturze poniżej -150°C w zamrażarce lub w fazie gazowej ciekłego azotu, aby zachować żywotność komórek przez dłuższy czas. |
|
Proces zamrażania i pożywka: |
Pożywki CM-1 lub CM-ACF mogą być używane do zamrażania komórek P19 przy użyciu metody powolnego zamrażania, która chroni komórki przed szokiem i zachowuje ich żywotność. |
|
Proces rozmrażania: |
Zamrożone komórki P19 można rozmrozić w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, szybko mieszając fiolkę przez 40 do 60 sekund. Komórki są dodawane do świeżej pożywki i odwirowywane w celu usunięcia zamrożonych elementów pożywki. Paleta komórek jest ponownie zawieszana, a komórki są przelewane do nowej kolby w celu wzrostu. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego: |
Dla linii komórkowej P19 wymagane są ustawienia laboratoryjne na poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1. |
Linia komórkowa P19: Zalety i wady
W tej sekcji omówione zostaną zalety i wady linii komórkowej P19.
Zalety
- Potencjał różnicowania: Komórki P19 mogą różnicować się w różne typy komórek, w tym kardiomiocyty, neurony i komórki mikrogleju. Do różnicowania wymagają nietoksycznych leków, takich jak kwas retinowy i dimetylosulfotlenek (DMSO). Kwas retinowy indukuje rozwój neuronów, mikrogleju i astrogleju, podczas gdy DMSO inicjuje rozwój bijących kardiomiocytów i komórek mięśni gładkich. Komórki P19 są zatem przydatne w badaniu różnicowania komórek i procesów rozwojowych
- System modelowy: Pluripotencjalna linia komórek raka embrionalnego P19 jest cennym modelem do badania wczesnego rozwoju embrionalnego. Naukowcy wykorzystują komórki P19 do wyjaśnienia szlaków sygnalizacji komórkowej oraz mechanizmów komórkowych i molekularnych zaangażowanych w te procesy
Wady
- Pochodzenie mysie: P19 to mysia linia komórek raka zarodkowego. W związku z tym wyniki badań z wykorzystaniem tych komórek mogą nie przekładać się w pełni na biologię i procesy zachodzące u ludzi
Zastosowania badawcze komórek P19
Komórki P19 mają wiele zastosowań badawczych ze względu na ich zdolność do różnicowania i znaczenie dla biologii rozwoju i badań nad komórkami macierzystymi. Niektóre z ważnych zastosowań badawczych embrionalnych komórek rakowych P19 obejmują:
- Badania nad różnicowaniem komórek: Jak wiadomo, komórki P19 mogą różnicować się w neurony, mikroglej, komórki mięśni gładkich i kardiomiocyty; dlatego są szeroko stosowane do badania procesów różnicowania komórek. Ponadto pomagają one w badaniach nad rozwojem neuronów i serca oraz mechanizmami leżącymi u ich podstaw. Badanie przeprowadzone w 2018 roku wykazało, że reaktywne formy tlenu (ROS) kierują różnicowaniem komórek P19 w określone typy komórek i zapobiegają indukcji innych [3]. W innym badaniu zbadano proces różnicowania neuronalnego za pośrednictwem kwasu retinowego i stwierdzono zaangażowanie szlaku sygnałowego PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia rozwoju: Komórki P19 są nieocenionym modelem do badania wczesnego rozwoju embrionalnego. Pomagają naukowcom zrozumieć złożone procesy biologiczne, takie jak tworzenie tkanek podczas rozwoju zarodka. W badaniach wykorzystano komórki P19 i zbadano czynniki molekularne przyczyniające się do powstawania ubytku przegrody międzykomorowej (VSD). Odkrycia ujawniły, że długi niekodujący RNA SNHG6 przyczynia się do VSD poprzez negatywną regulację miRNA-101 i aktywację szlaku Wnt/β-katenina [5].
- Testowanie leków: Linia komórkowa mysiego raka zarodkowego P19 jest również wykorzystywana do badania potencjalnych kandydatów na leki. W badaniu wykorzystano zróżnicowane neurony komórkowe P19 i zbadano neuroprotekcyjne działanie hamujące acetylocholinoesterazę syntetycznej L-Dopy i wodnego ekstraktu z nasion Mucuna pruriens. Wyniki wykazały, że ekstrakt roślinny wykazywał obiecujące wyniki w porównaniu z L-Dopą [6].
Kup swoją linię komórkową P19 już dziś
Komórki P19: Publikacje badawcze
Ta sekcja artykułów obejmuje kilka interesujących publikacji naukowych dotyczących komórek P19.
Ten artykuł został opublikowany w Oncology Reports w 2017 roku. W badaniu zaproponowano, że hormony płciowe przysadki mózgowej napędzają adhezję, proliferację i migrację linii komórkowych teratocarcinoma, w tym komórek P19.
Długi niekodujący RNA uc. 4 wpływa na różnicowanie komórek poprzez szlak sygnałowy TGF-beta
W publikacji opublikowanej w czasopiśmie Experimental & Molecular Medicine (2018) wykorzystano komórki P19 i zbadano funkcję długiego niekodującego RNA uc.4. Odkrycia ujawniły, że uc.4 wpływa na różnicowanie komórek poprzez modulowanie szlaku sygnałowego TGF beta.
Ten artykuł badawczy został opublikowany w 2018 roku w Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Badanie wykazało, że naturalny ekstrakt z tkanki mózgowej i hodowla komórkowa 3D mogą przyspieszyć różnicowanie komórek raka zarodkowego P19 w komórki nerwowe.
Badanie to zostało opublikowane w Journal of Ethnopharmacology w 2020 roku. W badaniu zaproponowano, że ekstrakt z liści Cichorium intybus L. może indukować różnicowanie komórek raka zarodkowego P19 w komórki β trzustki produkujące insulinę.
Badanie to zostało opublikowane w Molecules (2022). W badaniu tym zbadano neuroprotekcyjne i hamujące acetylocholinoesterazę działanie ekstraktu z nasion Mucuna pruriens na neurony komórkowe P19.
Zasoby dla linii komórkowej P19: Protokoły, filmy i inne
Poniżej znajduje się kilka zasobów dotyczących komórek P19.
- Protokół różnicowania neuronalnego komórek P19: Ten artykuł zawiera protokół różnicowania neuronalnego komórek P19 i inne przydatne informacje na temat różnicowania komórek P19.
- Transfekcja komórek P19: Ten link pomoże ci zapoznać się z protokołem transfekcji komórek P19.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek P19.
- Komórki P19: Ta strona zawiera wszystkie przydatne informacje na temat linii komórkowej P19, w tym warunki jej hodowli, pożywki dla komórek P19, podział komórek i wiele innych.
Eksploracja linii komórkowej P19: Często zadawane pytania
Odniesienia
- McBurney, M.W., P19 embryonal carcinoma cells. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonic Carcinoma Cell Line: A Model To Study Gene-Environment Interactions. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, and G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., Kwas all-trans-retinoidowy indukuje różnicowanie komórek P19 w neurony zaangażowane w szlak sygnałowy PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Długi niekodujący RNA SNHG6 przyczynia się do powstawania ubytków przegrody międzykomorowej poprzez negatywną regulację miR-101 i aktywację szlaku Wnt/β-katenina. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Wodny ekstrakt z nasion Mucuna pruriens poprawił działanie neuroprotekcyjne i hamujące acetylocholinoesterazę w porównaniu z syntetyczną L-dopą. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.