Komórki NCI-H1299: Badania i kliniczne implikacje komórek raka płuc NCI-H1299
NCI-H1299 to unieśmiertelniona linia komórek ludzkiego niedrobnokomórkowego raka płuc, szeroko stosowana w onkologii immunologicznej, badaniach nad rakiem i odkrywaniu leków. Co więcej, naukowcy wykorzystywali te komórki do badania wrażliwości na leki, podstawowych szlaków sygnałowych i mechanizmów molekularnych związanych z rakiem płuc. Poza tym, komórki te są wykorzystywane do badania infekcji wirusowych, takich jak SARS-CoV-2.
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek NCI-H1299
Pierwszą rzeczą, jaką należy wiedzieć o linii komórkowej, jest jej pochodzenie i ogólna charakterystyka, ponieważ pomagają one w opracowaniu jej zastosowania w badaniach. Ta sekcja artykułu pomoże ci poznać kilka ważnych informacji na temat pochodzenia i charakterystyki NCI-H1299. Na przykład, czym są komórki raka płuc NCI-H1299? Jakim typem komórek jest NCI-H1299? Jaki jest rozmiar komórek NCI-H1299? Jaka jest różnica między A549 a NCI-H1299?
- Linia komórkowa NCI-H1299 pochodzi z przerzutów do węzłów chłonnych płuc 43-letniego mężczyzny rasy kaukaskiej z rakiem.
- Komórki te posiadają homozygotyczną częściową delecję genu p53; w związku z tym nie wykazują ekspresji białka p53. Brak ekspresji białka p53 w komórkach NCI-H1299 przyczynia się do tendencji proliferacyjnych komórek raka płuc H1299.
- Oprócz białka p53, te immortalizowane komórki mają mutację KRAS NCI-H1299, odpowiedzialną za ich wzrost, proliferację, migrację i właściwości inwazyjne.
- Kariotyp NCI-H1299 jest zbliżony do diploidalnego.
- Komórki NCI-H1299 mają morfologię podobną do komórek nabłonkowych.
- Komórki te są spłaszczone i mają grubość mniejszą niż 5 µm.
NCI-H1299 i A549
NCI-H1299 i A549 to linie komórkowe niedrobnokomórkowego raka płuc. Komórki NCI-H1299 są bardziej agresywne i wrażliwe w porównaniu do A549. Obie mają stosunkowo podobne mutacje, takie jak KRAS. Jednak w przeciwieństwie do komórek NCI-H1299, komórki A549 wyrażają gen P53.
Informacje dotyczące hodowli
Prowadzenie hodowli linii komórkowej nie jest łatwe, dopóki nie zna się wszystkich kluczowych informacji na jej temat, w tym: Jaki jest czas podwojenia NCI-H1299? Jaka jest gęstość wysiewu NCI-H1299? Co to jest pożywka dla komórek NCI-H1299? Jak hodować linie komórkowe NCI-H1299? Ta sekcja pomoże ci poznać odpowiedzi na wszystkie te pytania dotyczące hodowli komórek NCI-H1299.
Kluczowe punkty dotyczące hodowli komórek NCI-H1299
|
Czas podwojenia: |
Czas podwojenia NCI-H1299 wynosi od 22 do 30 godzin. |
|
Adherentne lub w zawiesinie: |
NCI-H1299 jest linią komórek przylegających. |
|
Stosunek podhodowli: |
Komórki NCI-H1299 są podhodowane w zalecanym stosunku od 1:3 do 1:6. Komórki adherentne są płukane 1x PBS i inkubowane z roztworem do pasażowania Accutase przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Odłączone komórki są dodawane do świeżego podłoża hodowlanego i odwirowywane. Osad komórek jest następnie ponownie zawieszany, a komórki są przelewane do nowych kolb zawierających podłoże hodowlane. |
|
Podłoże hodowlane: |
RPM1 1640 jest idealną pożywką dla komórek NCI-H1299. Jest ona uzupełniona 10% płodową surowicą bydlęcą, 4500 mg/l glukozy, 2,0 mM L-glutaminy, 1 mM pirogronianu sodu, 1500 mg/l NaHCO3 i 10 mM HEPES. Pożywka powinna być odnawiana co 2-3 razy w tygodniu. |
|
Warunki wzrostu: |
Hodowle komórek raka płuca NCI-H1299 są utrzymywane w nawilżanym inkubatorze w temperaturze 37°C z 5% podażą CO2. |
|
Przechowywanie: |
Linia komórkowa NCI-H1299 może być przechowywana w fazie gazowej ciekłego azotu lub w zamrażarkach niskotemperaturowych w temperaturze poniżej -150°C przez długi czas. |
|
Proces zamrażania i medium: |
CM-1 lub CM-ACF to pożywki do zamrażania komórek NCI-H1299. Komórki są zamrażane przy użyciu powolnego procesu zamrażania, który pozwala na spadek temperatury tylko o 1 stopień na minutę w celu ochrony żywotności komórek. |
|
Proces rozmrażania: |
Zamrożone komórki NCI-H1299 są szybko mieszane w podgrzanej łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielki kawałek lodu. Rozmrożone komórki są dodawane ze świeżym podłożem i mogą być bezpośrednio hodowane w nowych kolbach lub odwirowane. W pierwszym przypadku pożywkę należy wymienić po 24 godzinach inkubacji. Wirowanie pomaga usunąć zamarznięte elementy pożywki. Następnie zebrane komórki są ponownie zawieszane w świeżej pożywce i dozowane do nowej kolby w celu hodowli. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego: |
Do prowadzenia hodowli komórek NCI-H1299 wymagane jest laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1. |
Zakup linii komórkowej NCI-H1299: wysokiej jakości narzędzie badawcze do badania biologii raka płuc
Zalety i wady komórek NCI-H1299
Podobnie jak inne ludzkie linie komórkowe raka, NCI-H1299 również posiada pewne charakterystyczne cechy związane z określonymi zaletami i wadami. Poniżej podsumowaliśmy kilka istotnych z nich.
Zalety
Główne zalety linii komórkowej niedrobnokomórkowego raka płuc NCI-H1299 są następujące:
-
Model raka płuc in vitro
Linie komórkowe NCI-H1299 zostały opracowane z przerzutów raka płuc do węzłów chłonnych, a zatem mają stosunkowo podobne właściwości. Dlatego też komórki te mogą służyć jako model in vitro do badania biologii raka płuc, mechanizmów komórkowych i molekularnych oraz badań przesiewowych i testowania potencjalnych środków terapeutycznych.
-
Łatwość hodowli
Komórki NCI-H1299 są łatwe w hodowli i utrzymaniu w laboratorium badawczym. Nie ma żadnych skomplikowanych wymagań i procedur dotyczących hodowli komórek.
-
NCI-H1299 P53 i NCI-H1299 mutacja KRAS
Komórki NCI-H1299 nie posiadają ekspresji genu p53, co pozwala komórkom na intensywną proliferację. Co więcej, posiadają one mutację KRAS, która przyczynia się do wzrostu, proliferacji, inwazji i migracji komórek. Biorąc to pod uwagę, naukowcy wykorzystują komórki H1299 do badania mechanizmów molekularnych związanych z mutacjami KRAS i P53.
Wady
Wady komórek NCI-H1299 są następujące:
-
Specyficzność tkankowa
Komórki NCI-H1299 pochodzą z tkanki płucnej. W związku z tym jego zastosowanie ogranicza się głównie do badań nad rakiem płuc. Mogą one nie w pełni reprezentować heterogeniczność i ogólną charakterystykę innych typów nowotworów.
Zastosowania badawcze komórek NCI-H1299
Linia komórkowa NCI-H1299 jest szeroko stosowana w badaniach nad rakiem płuc. Poniżej wymieniono kilka obiecujących zastosowań tej linii komórkowej.
- Biologia nowotworów: Komórki NCI-H1299 służą jako doskonałe narzędzie badawcze do badania rozwoju raka, progresji i powiązanych mechanizmów komórkowych i molekularnych. Komórki te są wyposażone w pewne mutacje, co pozwala naukowcom badać powiązane zachowania komórek nowotworowych, szlaki sygnalizacyjne i profile ekspresji genów. W kilku badaniach wykorzystano linię komórkową niedrobnokomórkowego raka płuc NCI-H1299 do badania biologii raka płuc. Na przykład w badaniu przeprowadzonym w 2018 r. zbadano szlak sygnałowy zaangażowany w apoptozę komórek raka płuc przy użyciu komórek NCI-H1299. Naukowcy odkryli, że szlak PI3K/AKT przyczynia się do proliferacji komórek, a jego zahamowanie może powodować śmierć komórek nowotworowych [1]. Podobnie, inne badanie dotyczyło mechanizmów zaangażowanych w przejście nabłonkowo-mezenchymalne (EMT) komórek NCI-H1299. W badaniu tym zaproponowano, że zewnątrzkomórkowe białko SPARC (wydzielane białko kwaśne i bogate w cysteinę) przyczynia się do EMT i migracji NCI-H1299, a tym samym promuje nowotworzenie w komórkach - białko SPARC działa jako mediator sygnalizacji TGF-β1 [2].
- Odkrywanie i badanie przesiewowe leków: NCI-H1299, ludzka linia komórkowa raka płuc, jest szeroko stosowana do oceny toksyczności i skuteczności potencjalnych leków. Ponadto jest ona wykorzystywana przez naukowców do badania mechanizmu działania leków przeciwnowotworowych. Badania wykorzystały również te komórki do zidentyfikowania potencjalnych celów leków i mechanizmów oporności. Przykładowo, badania przeprowadzone przez Xiao-Yun Shen i współpracowników dotyczyły potencjału przeciwnowotworowego naturalnego związku bruceiny D (BD). Wyniki wykazały, że BD znacząco hamuje proliferację, inwazję i migrację komórek NCI-H1299. W związku z tym można go uznać za potencjalną terapię adiuwantową w leczeniu niedrobnokomórkowego raka płuc [3]. Podobnie, w badaniu oceniano cytotoksyczne działanie samego ksantohumolu i w połączeniu z lekiem chemioterapeutycznym cisplatyną na komórki raka płuc NCI-H1299 [4].
Publikacje badawcze dotyczące komórek NCI-H1299
Niektóre z najważniejszych i najczęściej cytowanych publikacji naukowych dotyczących linii komórkowej raka płuca NCI-H1299 znajdują się tutaj.
Ten artykuł został opublikowany w czasopiśmie Human and Experimental Toxicology (2021). W badaniu zaproponowano, że indolo-3-karbinol indukuje apoptozę w komórkach H1299 poprzez podniesienie poziomu reaktywnych form tlenu (ROS).
Badania te zostały opublikowane w 2018 roku w czasopiśmie Cellular Physiology and Biochemistry. Wyniki badań wykazały, że połączenie kwasu kawowego i paklitakselu wywiera synergistyczne działanie przeciwnowotworowe w linii komórkowej niedrobnokomórkowego raka płuc NCI-H1299.
Ten artykuł badawczy został opublikowany w Molecular Medicine Reports (2018). W badaniu oceniano działanie przeciwnowotworowe tubimozydu-1, saponiny triterpenoidowej, oraz mechanizmy leżące u jego podstaw w linii komórkowej NCI-H1299.
Pristimerina indukuje apoptozę i hamuje proliferację, migrację w komórkach raka płuc H1299
W artykule opublikowanym w Journal of Cancer (2020) zaproponowano, że Pristimerin, naturalny związek, hamuje proliferację i migrację komórek NCI-H1299.
Mechanizm regulacji genu VIPR1 w komórkach ludzkiego gruczolakoraka płuc H1299
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie Medical Oncology (2019) zbadano potencjalny wpływ nadekspresji genu VIPR1 na linię komórek gruczolakoraka NCI-H1299.
Zasoby dla linii komórkowej NCI-H1299: Protokoły, filmy i nie tylko
Oto kilka zasobów internetowych dotyczących komórek NCI-H1299.
- Transfekcja NCI-H1299: Ten film wyjaśnia protokół przejściowej transfekcji dla linii komórkowych NCI-H1299.
- Subkultura adherentnej linii komórkowej: Ten film pomoże ci nauczyć się ogólnej procedury subhodowli dla adherentnej linii komórkowej.
Poniższy link zawiera informacje na temat hodowli komórek NCI-H1299.
- Linia komórkowa NCI-H1299: Ten link może pomóc w zapoznaniu się z protokołem pasażowania i transfekcji komórek NCI-H1299.
Często zadawane pytania dotyczące linii komórkowej NCI-H1299
Piśmiennictwo
- Gu, J., et al., Badanie apoptozy indukowanej przez EGCG w komórkach raka płuc poprzez hamowanie szlaku sygnałowego PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC działa jako mediator TGF-β1 w promowaniu przejścia nabłonkowo-mezenchymalnego w komórkach raka płuc A549 i H1299. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Badanie mechanizmu działania bruceiny D w leczeniu komórek niedrobnokomórkowego raka płuca H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoksyczne działanie ksantohumolu i jego połączenia z cisplatyną na ludzkie komórki przerzutowego raka płuc H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.