Komórki A431 - dogłębna analiza komórek raka naskórka w badaniach dermatologicznych

Czas podwojenia:

Czas podwojenia populacji komórek A431 wynosi od 80 do 100 godzin.

Adherentne lub w zawiesinie:

A431 jest linią komórek przylegających.

Gęstość wysiewu:

gęstość 1 x^{104 komórek/cm2} jest idealna dla linii komórkowej A431. Komórki potrzebują prawie 4 dni, aby uzyskać konfluencję przy tej gęstości. Komórki adherentne są przemywane PBS (1x) i inkubowane z roztworem pasażującym Accutase. Następnie komórki zawieszono ponownie w podłożu hodowlanym i odwirowano. Zebrane komórki ponownie zawieszono i przeniesiono do nowych kolb w celu wzrostu.

Podłoże hodowlane:

Pożywka DMEM uzupełniona 10% płodową surowicą bydlęcą, 4,5 g/l glukozy, 1,0 mM pirogronianu sodu, 1,5 g/l NaHCO3 i 4 mM L-glutaminy jest używana do hodowli linii komórkowej A431. Pożywka powinna być wymieniana co 2-3 dni w tygodniu.

Warunki wzrostu:

Komórki nowotworowe A431 są hodowane w nawilżanym inkubatorze wyposażonym w źródło 5% CO2 w temperaturze 37°C.

Przechowywanie:

Linię komórkową można przechowywać w zamrażarce elektrycznej lub w fazie gazowej ciekłego azotu w temperaturze poniżej -150°C, ponieważ pomaga to chronić żywotność komórek.

Proces zamrażania i pożywka:

CM-1 lub CM-ACF to dwie wysoce zalecane pożywki do zamrażania komórek A431. Komórki są zamrażane przy użyciu metody powolnego zamrażania, która pozwala na spadek temperatury tylko o 1 stopień na minutę.

Proces rozmrażania:

Zamrożone komórki A431 są rozmrażane w łaźni wodnej o temperaturze 37°C zawierającej środek przeciwdrobnoustrojowy przez 40 do 60 sekund. Gdy pozostanie tylko niewielka bryła lodu, komórki są dodawane do podłoża hodowlanego i odwirowywane. Zebrane komórki są ponownie zawieszane i wlewane do kolb hodowlanych w celu wzrostu.

Poziom bezpieczeństwa biologicznego:

Poziom bezpieczeństwa biologicznego 1 jest zalecany do obsługi i utrzymania kultur A431.