Komórki Hep2 i ich rola w badaniach nad rakiem krtani
Komórki Hep 2 są kluczowym modelem in vitro stosowanym szeroko w badaniach biomedycznych, takich jak reumatologia, badania nad rakiem i immunologia. Pochodzące z raka krtani, te ludzkie komórki były integralną częścią wyjaśnienia tkanki pochodzenia i specyficznych cech nowotworów krtani. Ich znaczenie jest dobrze znane w badaniach translacyjnych nad rakiem, gdzie w znacznym stopniu przyczyniły się do naszego zrozumienia natury krtani i pochodzenia nowotworów, zaznaczając znaczącą obecność w publikacjach dotyczących badań nad rakiem krtani [1].
Pochodzenie i ogólna charakterystyka komórek Hep 2
Pochodzenie i ogólna charakterystyka linii komórkowej określają jej zastosowanie w badaniach. Ta sekcja pomoże ci dowiedzieć się o pochodzeniu i niektórych istotnych cechach komórek Hep 2. Dowiesz się na przykład: Czym jest linia komórkowa HEp-2? Jakie jest źródło komórek Hep 2? Jaka jest morfologia komórek Hep 2?
- Hep 2, nieśmiertelna ludzka linia komórek nabłonkowych, została po raz pierwszy opisana przez H.W. Toolana jako komórki raka krtani w 1954 roku. Jednak ostatnio doniesiono, że linia komórkowa Hep 2 składa się z komórek gruczolakoraka szyjki macicy i pochodzi z zanieczyszczenia linii komórkowej Hela [2].
- Komórki Hep 2 zawierają chromosomy markerowe Hela i są dodatnie pod względem sekwencji DNA keratyny i wirusa brodawczaka ludzkiego, co potwierdzono odpowiednio za pomocą barwienia immunoperoksydazą i PCR.
- Pochodna linii komórkowej Hela Hep 2 ma morfologię podobną do nabłonka.
- Linia komórkowa Hep 2 wykazuje zarówno strukturalne, jak i numeryczne abrazje chromosomalne z kariotypem zbliżonym do triploidalnego [3].
Linia komórkowa Hep 2: Informacje dotyczące hodowli
Przed przystąpieniem do pracy z linią komórkową musimy poznać następujące kluczowe punkty dotyczące jej hodowli. Informacje te mogą być przydatne do skutecznej hodowli i utrzymania linii komórkowej. Powinieneś wiedzieć: Jaki jest czas podwojenia komórek HEp-2? Czy komórki Hep 2 są adherentne? Jaka jest gęstość wysiewu komórek Hep2?
|
Czas podwojenia populacji: |
Czas podwojenia dla komórek Hep 2 wynosi około 40 godzin. |
|
Przylegające lub w zawiesinie: |
Komórki Hep 2 są adherentne i rosną w monowarstwach. |
|
Gęstość wysiewu: |
Gęstość wysiewu 1 x104 komórek/cm2 jest idealna dla hodowli komórek Hep 2. W celu posiewu, przylegające komórki Hep 2 są płukane 1 x roztworem PBS, a następnie inkubowane z roztworem dysocjacyjnym Accutase. Po 8-10 minutach inkubacji w temperaturze otoczenia, komórki są ponownie zawieszane w pożywce i odwirowywane. Zebrane komórki są następnie dozowane do świeżej pożywki i przelewane do nowych kolb w celu hodowli. |
|
Podłoże hodowlane: |
Do hodowli komórek Hep 2 stosuje się EMEM lub minimalną niezbędną pożywkę Eagle'a. Pożywka ta jest uzupełniona 10% FBS, 1,0 g/L glukozy, 2,2 g/L NaHCO3, 2,0 mM L-glutaminy, 1% NEAA i 1 mM pirogronianu sodu dla idealnego wzrostu komórek. Pożywka powinna być odnawiana 2 do 3 razy w tygodniu. |
|
Warunki wzrostu: |
Podobnie jak inne linie komórkowe ssaków, Hep 2 jest również hodowany w nawilżanym inkubatorze ustawionym na temperaturę 37°C i z ciągłym dopływem 5% CO2. |
|
Przechowywanie: |
Komórki Hep 2 mogą być przechowywane w zamrażarkach elektrycznych o bardzo niskiej temperaturze (poniżej -150°C) lub w fazie gazowej ciekłego azotu w celu długotrwałego przechowywania. |
|
Proces zamrażania i pożywka: |
Zalecane podłoża do zamrażania komórek Hep 2 to CM-1 lub CM-ACF. Komórki powinny być zamrażane przy użyciu powolnego procesu zamrażania, który pozwala na stopniowy spadek temperatury o 1 °C i chroni żywotność komórek. |
|
Proces rozmrażania: |
Fiolka z zamrożonymi komórkami jest szybko rozmrażana przez mieszanie w łaźni wodnejw temperaturze 37°C, aż do pozostawienia niewielkiej grudki lodu. Komórki są następnie dodawane do świeżej pożywki i odwirowywane w celu usunięcia zamrożonych składników pożywki. Później osad komórkowy jest ponownie zawieszany w pożywce, a komórki są dozowane do kolb hodowlanych. Komórki muszą odpoczywać przez prawie 24 godziny, aby przylgnąć. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego |
Laboratorium poziomu bezpieczeństwa biologicznego 1 jest zalecane do obsługi i konserwacji kultur komórkowych Hep 2. |
Zalety i ograniczenia komórek Hep 2
Prawie wszystkie linie komórkowe wykazują unikalną kombinację zalet i ograniczeń, które przyczyniają się do ich wykorzystania w dziedzinie badań. W tej sekcji opisano kilka głównych zalet i wad związanych z linią komórkową Hep 2.
Zalety
Główne zalety linii komórkowej Hep 2 są następujące:
- Pochodzenie ludzkie: Hep 2 pochodzi z ludzkich komórek nabłonkowych, co czyni go cennym modelem in vitro do badania ludzkich chorób i infekcji wirusowych
- Wykrywanie ANA: Linia komórkowa Hep 2 posiada natywną macierz białkową, która prezentuje liczne antygeny, co czyni ją doskonałym podłożem do wykrywania przeciwciał przeciwjądrowych (ANA). Ta cecha umożliwia specyficzne i bardzo czułe badanie przesiewowe ANA w surowicy, co czyni go kluczowym narzędziem diagnostycznym do identyfikacji chorób tkanki łącznej
Ograniczenia
- Nieprawidłowości chromosomalne: Komórki Hep 2 wykazują wiele numerycznych i strukturalnych nieprawidłowości chromosomalnych. Nieprawidłowości te mogą wpływać na zachowanie komórek i mogą ograniczać ich zastosowanie w niektórych eksperymentach laboratoryjnych
- Tumorogenność: Hep 2, pochodząca z nowotworu ludzka linia komórek nabłonkowych, może posiadać nieprawidłowości genetyczne typowe dla komórek nabłonkowych. W związku z tym wykorzystanie komórek Hep 2 może być ograniczone w określonych badaniach koncentrujących się na normalnej fizjologii komórkowej.
Rozszerzenie zastosowań linii komórkowej Hep 2 w badaniach biomedycznych
Linia komórkowa Hep 2 wyróżnia się jako przykładowy model do wielu zastosowań w badaniach biomedycznych. Znane ze swojej wszechstronności, komórki te odgrywają kluczową rolę w eksperymentach in vitro, od analizy receptorów po badanie złożonych chorób.
Odkrywanie mechanizmów nowotworowych i celów terapeutycznych za pomocą komórek Hep 2
Komórki Hep 2, jako komórki nowotworowe, mają kluczowe znaczenie dla zgłębiania zawiłości biologii raka. Zapewniają wgląd w szlaki sygnalizacyjne raka, badania mechanistyczne i są podstawą badań przesiewowych i oceny leków przeciwnowotworowych. Na przykład, wnikliwe badanie wykorzystało Hep 2 do określenia wpływu miRNA-33a na proliferację komórek nowotworowych. Odkrycia ujawniły antyproliferacyjne działanie miRNA-33a poprzez jego interakcję z PIM1, znanym onkogenem, sugerując nowy cel terapeutyczny [4]. W innym przypadku Hep 2 został wykorzystany do oceny potencjału terapeutycznego nanocząstek tlenku cynku Marsdenia tenacissima, podkreślając ich skuteczność antyproliferacyjną i apoptotyczną [5].
Zaawansowane badania wirusologiczne z wykorzystaniem komórek Hep 2
Podatność komórek Hep 2 na różne ludzkie wirusy sprawia, że są one nieocenionym zasobem w badaniach wirusologicznych. Zostały one skutecznie wykorzystane do ekspresji genów wirusa SARS-CoV-2 w celu odkrycia złożonej interakcji między wirusem a mechanizmami komórkowymi gospodarza [6]. Aplikacja ta jest szczególnie istotna w obecnej erze, w której zrozumienie i zwalczanie infekcji wirusowych, takich jak COVID-19, jest globalnym priorytetem.
Rozszyfrowanie funkcji komórkowych: Manipulacja genami w komórkach Hep 2
Zdolność linii komórkowej Hep 2 do manipulacji genetycznych podkreśla jej przydatność w badaniach mechanistycznych. Naukowcy wykorzystują tę cechę do modulowania ekspresji genów i wyjaśniania roli określonych genów w funkcjach komórkowych. Godne uwagi badanie obejmowało nadekspresję białka RBM6 wiążącego RNA w komórkach Hep 2, co ułatwiło badanie jego potencjału supresora nowotworu, zapewniając cenny wgląd w molekularne podstawy raka [7].
Poprawa diagnostyki chorób poprzez zastosowanie linii komórkowej Hep 2
Poza tymi domenami badawczymi, komórki Hep 2 są cenione za swoje możliwości diagnostyczne, zwłaszcza w wykrywaniu ANA, które mają kluczowe znaczenie w diagnostyce chorób autoimmunologicznych, takich jak toczeń rumieniowaty układowy. Precyzja, z jaką komórki Hep 2 mogą prezentować ANA, wspiera diagnozę i rozwój ukierunkowanych terapii, zwiększając nasze zrozumienie patologii autoimmunologicznych i poprawiając opiekę nad pacjentami.
Dzięki tym różnorodnym zastosowaniom, komórki Hep 2 znacząco przyczyniły się do postępu w badaniach nad nowotworami, badaniu infekcji wirusowych i badaniu mechanizmów komórkowych. Ich wkład w generowanie istotnych klinicznie danych jest nieoceniony, potwierdzając ich niezbędną rolę zarówno w laboratorium, jak i klinice. Wraz z dalszym rozwojem badań, linia komórkowa Hep 2 z pewnością pozostanie w czołówce, pomagając w odkrywaniu nowych metod leczenia i poszerzając naszą wiedzę na temat ludzkiego zdrowia i chorób.
Zabezpiecz swoją linię komórkową HEp-2 już dziś
Komórki wątroby typu 2: Publikacje badawcze
Poniżej przedstawiamy kilka interesujących i najczęściej cytowanych publikacji naukowych na temat komórek Hep 2.
- Synteza nanocząstek tlenku cynku z Marsdenia tenacissima hamuje proliferację komórek i indukuje apoptozę w komórkach raka krtani (Hep-2)
W artykule opublikowanym w Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019) zbadano potencjał przeciwnowotworowy biosyntetyzowanych nanocząstek tlenku cynku Marsdenia tenacissima w linii komórkowej Hep 2. - Bioformułowane nanocząstki PLGA zawierające hesperydynę przeciwdziałają wewnętrznemu szlakowi apoptotycznemu w komórkach nowotworowych, w którym pośredniczą mitochondria
Artykuł został opublikowany w czasopiśmie Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials w 2021 roku. W badaniu tym zbadano właściwości przeciwnowotworowe bioformułowanych nanocząstek poli (kwasu mlekowego-co-glikolowego) (PLGA) obciążonych hesperydyną w komórkach Hep 2. - Aktywność przeciwwirusowa ekstraktu etanolowego z Lophatherum gracile przeciwko zakażeniu syncytialnym wirusem oddechowym
W publikacji opublikowanej w Journal of Ethnopharmacology w 2019 r. wykorzystano komórki Hep 2 do badania zakażenia syncytialnym wirusem oddechowym i badania przesiewowego leków przeciwwirusowych przeciwko niemu. Badanie wykazało obiecujący potencjał przeciwwirusowy ekstraktu etanolowego z rośliny leczniczej, tj. Lophatherum gracile, przeciwko zakażeniu syncytialnym wirusem oddechowym. - Ocena wodnych ekstraktów z czterech roślin aromatycznych pod kątem ich aktywności przeciwko adhezji Candida albicans do ludzkich komórek nabłonkowych HEp-2
Badania te zostały opublikowane w Gene Reports (2020). W badaniu tym zbadano potencjał hamujący wodnych ekstraktów czterech roślin aromatycznych w stosunku do adhezji Candida albicans do ludzkich komórek nabłonka Hep 2. - Indukowane przez Wnt1 białko sygnałowe 1 reguluje glikolizę raka płaskonabłonkowego krtani i chemiooporność poprzez szlak YAP1/TEAD1/GLUT1
Badanie to zostało opublikowane w Journal of Cellular Physiology w 2019 roku. Badanie donosi, że indukowalne przez Wnt1 białko sygnalizacyjne 1 (WISP1) oddziałuje ze szlakiem YAP1/TEAD1/GLUT1 i reguluje metabolizm glukozy oraz chemiooporność w linii komórkowej Hep 2.
Zasoby dla linii komórkowej Hep2: Protokoły, filmy i nie tylko
Hep 2 jest dobrze znaną linią komórkową. Istnieje kilka dostępnych zasobów dotyczących linii komórkowej Hep 2.
- Subkultura linii komórkowej Hep2: Ten film jest przewodnikiem krok po kroku po podhodowli komórek Hep 2.
- Badanie przesiewowe ANA komórek Hep 2: Ten film wyjaśnia badanie przesiewowe przeciwciał przeciwjądrowych (ANA) przy użyciu linii komórkowej Hep 2.
- Hodowla komórek Hep 2: Ten link zawiera podstawowe informacje na temat hodowli komórek Hep 2. Obejmują one podział komórek, ich zamrażanie i rozmrażanie.
Często zadawane pytania dotyczące komórek HEp-2 w badaniach biomedycznych
Piśmiennictwo
- Fusi, M. i S. Dotti, Adaptacja linii komórkowej HEp-2 do systemów hodowli całkowicie wolnych od zwierząt i analiza wzrostu komórek w czasie rzeczywistym. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., Kompleksowy przegląd linii komórkowej Hep-2 w badaniach translacyjnych nad rakiem krtani. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., Cancer-associated fibroblasts in a human HEp-2 established laryngeal xenografted tumor are not derived from cancer cells through epithelial-mesenchymal transition, phenotypically activated but karyotypically normal. PLoS One, 2015. 10(2): p. e0117405.
- Karatas, O.F., Antyproliferacyjny potencjał miR-33a w komórkach Hep-2 raka krtani poprzez celowanie w PIM1. Head Neck, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., Synthesis of Zinc oxide nanoparticles from Marsdenia tenacissima inhibits the cell proliferation and induces apoptosis in laryngeal cancer cells (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., et al., Systemowe i molekularne badanie subkomórkowej lokalizacji białek SARS-CoV-2. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., RNA-binding protein RBM6 as a tumor suppressor gene represses the growth and progression in laryngocarcinoma. Gene, 2019. 697: p. 26-34.