Linia komórkowa Neuro-2a
Neuro-2a to mysia linia komórek nerwowych szeroko stosowana w badaniach z zakresu neuronauki. Komórki te wykorzystuje się głównie do badania rozwoju i różnicowania komórek nerwowych, neurotoksyczności, szlaków sygnałowych oraz wzrostu aksonów. Ponadto są one wykorzystywane do opracowywania leków i badań przesiewowych.
Niniejszy artykuł skupia się na ważnych aspektach komórek neuroblastoma Neuro-2a, które mogą okazać się pomocne przed rozpoczęciem pracy z tą linią. Omówione zostaną w nim przede wszystkim:
- Ogólne cechy i pochodzenie komórek Neuro-2a
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej Neuro-2a
- Zalety i wady linii komórkowej Neuro-2a
- Zastosowania badawcze linii komórkowej Neuro-2a
- Publikacje naukowe dotyczące komórek Neuro-2a
- Materiały dotyczące komórek Neuro-2a: protokoły, filmy i inne
Ogólne cechy i pochodzenie komórek Neuro-2a
W tej części artykułu omówimy kontekst i podstawowe cechy linii komórkowej Neuro-2a, które należy znać przed rozpoczęciem pracy z nią. Dowiesz się tutaj: Czym jest linia komórkowa Neuro-2a? Jakie jest pochodzenie linii komórkowej Neuro-2a? Na czym polega różnicowanie komórek Neuro-2a? Jaka jest wielkość komórki Neuro-2a? Jaka jest morfologia komórek Neuro-2a?
- Komórki Neuro-2a pochodzą ze spontanicznego nowotworu (neuroblastoma) myszy albinosowej (szczep A). Linię komórkową wyhodowali R.J. Klebe i F.H. Ruddle.
- Komórki neuroblastoma Neuro-2a wykazują morfologię komórek macierzystych o charakterze neuronalnym i ameboidalnym.
- Wysokość komórek Neuro-2a wynosi 12 mikrometrów [1].
- Liczba chromosomów w komórkach Neuro-2a może wynosić od 59 do 193, przy czym liczba modalna wynosi 95. Kariotyp tych komórek neuroblastoma jest niestabilny w zakresie od 94 do 98 chromosomów.
Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej Neuro-2a
Komórki Neuro-2a są szeroko stosowane w laboratoriach badawczych zajmujących się neuronauką. Przed rozpoczęciem pracy z tymi komórkami należy zapoznać się z niezbędnymi informacjami dotyczącymi hodowli komórek, wymienionymi poniżej. Może to ułatwić pracę. Dowiesz się: Czym jest pożywka do hodowli komórek Neuro-2a? Jak hodować komórki Neuro-2a? Jaki jest czas podwojenia komórek Neuro-2a? Jaka jest gęstość wysiewu komórek Neuro-2a ? Jaki jest protokół hodowli komórek Neuro-2a? Jakie są pożywki do hodowli komórek Neuro-2a?
Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek Neuro-2a
Czas podwojenia:
Czas podwojenia komórek Neuro-2a wynosi około 70 godzin.
Komórki przylegające czy w zawiesinie:
Neuro-2a to linia komórek adhezyjnych.
Gęstość wysiewu:
Zoptymalizowana gęstość wysiewu komórek dla linii komórkowej Neuro-2a wynosi 1 x 10⁴ komórek/cm². Przed wysiewem komórki przemywa się buforem fosforanowym bez magnezu i wapnia (1x). Następnie dodaje się roztwór do pasażowania (Accutase) i komórki inkubuje się przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Po rozdzieleniu komórek dodaje się świeżą pożywkę, a komórki odwirowuje się. Zebrany osad komórkowy ostrożnie zawiesza się ponownie, a komórki przelewa się do naczynia hodowlanego w celu dalszego wzrostu.
Pożywka hodowlana:
Do hodowli komórek Neuro-2a stosuje się pożywkę EMEM. Zawiera ona 10% surowicy płodowej bydlęcej (FBS), 2 mM L-glutaminy, 1,5 g/l NaHCO₃, EBSS, 1 mM pirogronianu sodu oraz NEAA, co zapewnia idealne warunki wzrostu komórek. Pożywkę należy wymieniać 1–2 razy w tygodniu.
Warunki hodowli:
Hodowle komórek Neuro-2a utrzymuje się w nawilżanym inkubatorze o temperaturze 37°C, podłączonym do źródła 5% CO₂.
Przechowywanie:
Komórki należy przechowywać w temperaturze poniżej -150 °C w elektrycznej zamrażarce ultra-niskotemperaturowej lub w fazie gazowej ciekłego azotu w celu długotrwałego przechowywania.
Proces zamrażania i pożywka:
Do zamrażania komórek Neuro-2a stosuje się pożywki CM-1 lub CM-ACF. Komórki zamraża się w procesie powolnego zamrażania, który pozwala na spadek temperatury o zaledwie 1 °C na minutę. Chroni to komórki przed szokiem termicznym i pozwala zachować ich żywotność.
Proces rozmrażania:
Aby rozmrozić zamrożone hodowle, fiolkę umieszcza się w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C na 40 do 60 sekund, aż pozostanie tylko niewielka bryłka lodu. Następnie dodaje się pożywkę hodowlaną, a komórki poddaje się wirowaniu. Ten etap pomaga usunąć składniki pożywki zamrażającej. Osad komórkowy jest następnie ponownie zawieszany, a komórki przenoszone do nowej kolby wypełnionej pożywką hodowlaną. Następnie komórki umieszcza się w inkubatorze w temperaturze 37 °C na co najmniej 24 godziny.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Do obsługi i utrzymywania hodowli Neuro-2a wymagane są warunki laboratoryjne zgodne z poziomem bezpieczeństwa biologicznego 1.
- Zalety i wady linii komórkowej Neuro-2a
- Zastosowania badawcze linii komórkowej Neuro-2a
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej Neuro-2a
- Ogólne cechy i pochodzenie komórek Neuro-2a
- 5. Publikacje naukowe dotyczące komórek Neuro-2a
- Materiały dotyczące komórek Neuro-2a: protokoły, filmy i inne
- Najczęściej zadawane pytania
Zalety i wady linii komórkowej Neuro-2a
Komórki Neuro-2a mają pewne zalety i wady, które odróżniają je od innych linii komórek neuronalnych. Poniżej wymieniono niektóre z najważniejszych zalet i wad tych komórek.
Zalety
Zalety mysiej linii komórkowej neuroblastoma Neuro-2a to:
-
Łatwość hodowli:
Linia komórkowa Neuro-2a nie wymaga skomplikowanych ani zawiłych procedur hodowli komórkowej. Komórki te są łatwe w hodowli i utrzymaniu w laboratoriach badawczych.
-
Model komórek neuronalnych in vitro:
Neuro-2a to wygodny model komórek neuronalnych, szeroko stosowany przez naukowców w badaniach nad rozwojem i różnicowaniem neuronów.
Wady
Wady komórek Neuro-2a to:
-
Pochodzenie mysie:
Komórki Neuro-2a pochodzą od myszy, dlatego naukowcy powinni zachować ostrożność przy ekstrapolowaniu wyników badań przeprowadzonych na myszach na zdrowie i choroby człowieka, ponieważ biologia myszy i człowieka może się znacznie różnić.
Zastosowania badawcze linii komórkowej Neuro-2a
Komórki Neuro-2a mają wiele zastosowań w dziedzinie badań neurologicznych. Poniżej omówiono kilka obiecujących zastosowań tej linii komórkowej:
- Rozwój neuronów: Neuro-2a to model komórek neuronalnych in vitro, szeroko stosowany do badania rozwoju neuronów i powiązanych procesów, takich jak różnicowanie, wzrost aksonów i tworzenie synaps. W badaniu przeprowadzonym w 2020 r. wykorzystano komórki Neuro-2a do zbadania roli mikroRNA-124 w indukowanym kwasem retinowym różnicowaniu komórek neuronalnych [2]. W innym badaniu analizowano ekspresję receptora kwasu retinowego gamma (RARG) oraz miRNA-124 w linii komórkowej neuroblastoma (N2A). W badaniu tym wysunięto hipotezę, że miR-124 oddziałuje na RARG i hamuje wzrost neurytów [3].
- Neurotoksyczność: Komórki Neuro-2a są również wykorzystywane do oceny toksycznego oddziaływania leków, substancji chemicznych lub czynników środowiskowych na komórki nerwowe. Na przykład w badaniu przeprowadzonym przez Zhihonga Yina i współpracowników zbadano neurotoksyczność bisfenolu A (BPA), substancji chemicznej występującej w środowisku, z wykorzystaniem komórek Neuro-2a. Zaobserwowano, że BPA hamuje różnicowanie i proliferację komórek neuronalnych poprzez zakłócanie ich integralności komórkowej i synaptycznej [4].
- Badania przesiewowe leków: Komórki Neuro-2a są również wykorzystywane do oceny działania terapeutycznego różnych leków, związków chemicznych i produktów naturalnych. Na przykład w jednym z badań wykorzystano komórki Neuro-2a do zbadania potencjału przeciwutleniającego ekstraktu z miłorzębu japońskiego (Ginkgo biloba). Ponadto w badaniach tych zasugerowano, że powoduje on zmniejszenie agregacji białka Aβ i może stanowić potencjalną metodę leczenia choroby Alzheimera [5].
5. Publikacje naukowe dotyczące komórek Neuro-2a
Oto kilka interesujących artykułów naukowych dotyczących linii komórkowej Neuro-2a.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Journal of Natural Medicines” w 2018 r. zbadano terapeutyczne działanie alkamidów wyizolowanych z białego pieprzu (P. nigrum) na komórki neuronalne Neuro-2a.
W niniejszym badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Acta Biochimica et Biophysica Sinica” w 2020 r. wysunięto hipotezę, że gen Nkx2.1 odgrywa ważną rolę w rozwoju mózgu myszy poprzez regulację kaskady sygnałowej Shh.
Artykuł ten, opublikowany w czasopiśmie „Toxicology and Industrial Health” (2023), sugeruje, że bisfenol A, substancja chemiczna występująca w środowisku, wywołuje neurotoksyczność w komórkach Neuro-2a oraz zaburza funkcjonowanie ich synaps i cytoszkieletu.
W artykule opublikowanym w czasopiśmie „Pharmaceuticals” (2021) wysunięto hipotezę, że lek o nazwie heksarelina moduluje kaskady PI3K/AKT i MAPK w komórkach neuroblastoma (Neuro-2a) oraz hamuje indukowaną przez nadtlenek wodoru apoptozę komórek Neuro-2a.
W niniejszym artykule naukowym opublikowanym w czasopiśmie „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine” (2021) wysunięto hipotezę, że ekstrakt owocowy z Emblica officinalis hamuje neurozapalenie w komórkach Neuro-2a, a tym samym może być korzystny w leczeniu chorób o podłożu neurozapalnym.
Materiały dotyczące komórek Neuro-2a: protokoły, filmy i inne zasoby
Poniżej przedstawiono zasoby internetowe dotyczące komórek Neuro-2a. Obejmują one protokół hodowli komórek Neuro-2a oraz protokół transfekcji.
- Protokół transfekcji komórek Neuro-2a: Komórki Neuro-2a stanowią odpowiedni gospodarz do transfekcji. Pod tym linkiem znajdziesz wskazówki dotyczące protokołu transfekcji tej linii komórkowej. Skuteczność transfekcji komórek Neuro-2a różni się w zależności od używanego odczynnika.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek Neuro-2a.
- Protokół hodowli komórek Neuro-2a: Ten link pomoże Ci zapoznać się z protokołem subkultury komórek Neuro-2a.
- Komórki Neuro-2a: Strona zawiera wyczerpujące informacje na temat pożywek dla komórek Neuro-2a, gęstości wysiewu oraz protokołów dotyczących subkulturowania i postępowania z hodowlami kriokonserwowanymi oraz proliferacyjnymi.
Bibliografia
- Lulevich, V. i in., Mechanika pojedynczych komórek stanowi czułą i ilościową metodę badania interakcji między peptydem beta-amyloidu a komórkami neuronalnymi. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872-7.
- You, Q. i in., Rola miR-124 w regulacji indukowanego kwasem retinowym różnicowania komórek Neuro-2A. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X. i in., MikroRNA-124 oddziałuje na receptor kwasu retinowego gamma i hamuje wzrost neuritów. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z. i in., Ekspozycja na bisfenol A wywołała neurotoksyczność i wiązała się z synapsami oraz cytoszkieletem w komórkach Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L. i in., Wyciąg z miłorzębu japońskiego (EGb) hamuje stres oksydacyjny w komórkach Neuro-2A wykazujących nadekspresję APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.