Linia komórkowa HT-29
HT-29 to ludzka linia komórkowa raka jelita grubego o szerokim zakresie zastosowań w badaniach nad rakiem i toksykologią. Komórki te są wrażliwe na standardowe chemioterapeutyki stosowane w leczeniu raka jelita grubego. Ponadto linia komórkowa HT-29 jest dobrze scharakteryzowanym modelem in vitro do badania odpowiedzi nabłonka jelitowego na infekcję bakteryjną. Komórki HT-29 naśladują charakterystykę dojrzałych komórek jelitowych, tj. enterocytów, a zatem są odpowiednie do przywiązania i badań mechanistycznych.
Niniejszy artykuł obejmuje wszystkie aspekty linii komórkowej HT-29, które należy poznać przed rozpoczęciem pracy z nią. Głównie będzie to obejmować:
- Komórki HT-29: Pochodzenie i informacje ogólne
- Informacje o hodowli komórkowej linii komórkowej HT-29
- Komórki HT-29: Zalety i ograniczenia
- Komórki HT-29: Zastosowania
- Publikacje badawcze dotyczące komórek HT-29
- Zasoby dotyczące komórek HT-29: Protokoły, filmy i inne
1. Komórki HT-29: Pochodzenie i informacje ogólne
Przed użyciem jakiejkolwiek linii komórkowej należy zapoznać się z jej ogólną charakterystyką i pochodzeniem. Ta sekcja pomoże ci się tego dowiedzieć: Czym są komórki HT-29? Czy HT-29 jest linią komórkową raka jelita grubego? Jaka jest morfologia komórek HT-29?
Czym jest linia komórkowa HT-29? HT-29 to linia komórkowa gruczolakoraka jelita grubego utworzona w 1964 r. przez Trempe i Fogha. Komórki pierwotnie pochodziły z guza pierwotnego kobiety rasy kaukaskiej (44 lata) z gruczolakorakiem jelita grubego [1]. Od momentu powstania ta linia komórkowa była wykorzystywana do badania biologii nowotworów.
Morfologia komórek HT-29: Linia komórkowa HT-29 ma morfologię przypominającą nabłonek. Zróżnicowane komórki rosną w monowarstwach, tworzą ścisłe połączenia komórka-komórka i posiadają apikalną granicę szczoteczkową. Jeśli komórki te są hodowane w pożywce z niedoborem glukozy lub otrzymują induktory, takie jak maślan lub kwas, wykazują cechy podobne do enterocytów.
Rozmiar komórek: Średnica linii komórkowej raka jelita grubego HT-29 wynosi 11 μm.
Genom i ploidia: Modalna liczba chromosomów dla linii komórkowej HT-29 wynosi 71. Może ona wynosić 68-72. Co więcej, uproszczona liczba chromosomów dla komórek HT-29 jest hiper-triploidalna, ze składnikiem 2S występującym na poziomie 2,4%.
Co to jest HT29 MTX? HT29 MTX to linia komórkowa oporna na metotreksat wyizolowana z oryginalnej linii komórkowej ludzkiego raka okrężnicy HT-29 poprzez adaptację do 10 µM metotreksatu. Komórki te wykazują cechy dojrzałych komórek kubkowych wydzielających śluz.
2. Informacje o hodowli komórkowej linii komórkowej HT-29
Znajomość podstawowych wymagań dotyczących hodowli linii komórkowej może ułatwić pracę z nią. Powinieneś wiedzieć: jaki jest czas podwojenia linii komórkowej HT-29? Jaka jest gęstość wysiewu komórek HT-29? Jakie pożywki dla komórek HT-29?
|
Czas podwojenia |
Średni czas podwojenia dla linii komórek HT-29 wynosi 24 godziny. |
|
Przyleganie/zawiesina |
HT-29 to linia komórek przylegających. |
|
Gęstość wysiewu |
Gęstość wysiewu zalecana dla komórek HT-29 wynosi 3 x104 komórki/cm2. Wyhodowane komórki są przemywane 1 X PBS i odłączane po inkubacji z Accutase przez 8-10 minut. Dodawana jest świeża pożywka, a komórki są odwirowywane. Osad komórek jest ponownie zawieszany, a komórki są dozowane do nowych kolb w zalecanej gęstości. |
|
Pożywka wzrostowa |
Do optymalnej hodowli komórek HT-29 używana jest minimalna niezbędna pożywka Eagle'a (EMEM) uzupełniona 2,5 mM L-glutaminą i 10% FBS. Pożywka powinna być wymieniana 2 do 3 razy w tygodniu. |
|
Warunki wzrostu |
Komórki HT-29 wymagają do wzrostu nawilżonego inkubatora o temperaturze 37°C i 5% podażyCO2. |
|
Przechowywanie |
Komórki te są przechowywane w fazie gazowej ciekłego azotu w temperaturze poniżej -195°C. |
|
Środek i proces zamrażania |
Medium do zamrażania stosowane dla linii komórkowej HT-29 to CM-1 lub CM-ACF. Komórki są zamrażane w powolnym procesie zamrażania, który powoduje spadek temperatury o 1°C i skutecznie chroni żywotność komórek. |
|
Proces rozmrażania |
Zamrożone komórki HT-29 są rozmrażane w łaźni wodnej ustawionej na temperaturę 37°C. Komórki te mogą być ponownie zawieszone i bezpośrednio dozowane do kolby ze świeżą pożywką. W przeciwieństwie do tego, rozmrożone komórki można odwirować w celu usunięcia elementów pożywki zamrażającej, ponownie zawiesić w świeżej pożywce i hodować w kolbach. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego |
Poziom bezpieczeństwa biologicznego 1 jest używany do obsługi i utrzymania linii komórkowej HT-29. |
3. Komórki HT-29: Zalety i ograniczenia
Każda linia komórkowa ma unikalne zalety i wady, które odróżniają ją od innych linii komórkowych. W tej sekcji omówione zostaną główne zalety i ograniczenia związane z komórkami HT-29.
Zalety
Głównymi zaletami komórek HT-29 są
-
Łatwość hodowli
Linia komórkowa HT-29 jest łatwa w obsłudze i utrzymaniu, bez złożonych wymagań dotyczących hodowli. Jest powszechnie hodowana w laboratoriach badawczych.
-
Model komórek jelitowych in vitro
Komórki HT-29 mogą różnicować się w dojrzałe komórki jelitowe (enterocyty i komórki wytwarzające śluz) w określonych warunkach hodowli. Są one wykorzystywane jako model komórkowy do badania trawienia i biodostępności żywności.
-
Wysoka wydajność transfekcji
Komórki raka okrężnicy HT-29 oferują wysoką wydajność transfekcji, dzięki czemu nadają się do badań nad ekspresją i regulacją genów. Zarówno przejściowe, jak i stabilne eksperymenty transfekcji mogą być przeprowadzane przy użyciu różnych metod.
-
Wrażliwość na leki
Komórki HT-29 są wrażliwe na leki chemioterapeutyczne, takie jak fluorouracyl i oksaliplatyna, powszechnie stosowane w leczeniu raka okrężnicy. Są one wykorzystywane do badania oporności na leki i badań przesiewowych potencjalnych leków terapeutycznych na raka jelita grubego.
Ograniczenia
-
Heterogeniczność
Komórki HT-29, podobnie jak inne nowotworowe linie komórkowe, wykazują heterogeniczność i mogą nie tworzyć jednolitej populacji komórek. Może to wpływać na powtarzalność wyników w niektórych testach i prowadzić do niewielkich różnic w wynikach eksperymentów.
-
Ograniczone różnicowanie
Komórki HT-29 mają ograniczony potencjał różnicowania. Nie różnicują się one w pełni w komórki jelita lub okrężnicy, ale wykazują tylko kilka charakterystycznych cech. Ograniczenie to może ograniczać ich zastosowanie w badaniu bardziej złożonych procesów biologicznych.
4. komórki HT-29: Zastosowania
Linia komórkowa HT-29 jest intensywnie hodowana w laboratoriach badawczych ze względu na jej szeroki zakres zastosowań. W tej sekcji omówionych zostanie tylko kilka istotnych zastosowań komórek HT-29.
Badania nad rakiem: HT-29 jest linią komórkową gruczolakoraka jelita grubego, więc jest wykorzystywana do badania progresji raka, rozwoju i podstawowych mechanizmów molekularnych. W badaniu przeprowadzonym w 2018 r. wykorzystano linię komórkową HT-29 do zbadania cząsteczek komórkowych odpowiedzialnych za przerzuty. W badaniu tym zaobserwowano, że geny wimentyny i CXCR4 regulują przerzuty komórkowe. Natomiast transfekcja mimetykiem mikroRNA-193a-5p może obniżyć poziom mRNA tych genów i skutecznie zmniejszyć przerzuty komórek nowotworowych [2].
Badania toksykologiczne: Linia komórkowa HT-29 jest szeroko stosowana w badaniach toksykologicznych. Te komórki raka jelita grubego są wykorzystywane do oceny toksyczności różnych kandydatów na leki przy użyciu różnych testów. Na przykład w badaniu zbadano potencjał toksyczności etanolowego ekstraktu z rośliny Syzygium cumini na linii komórkowej HT-29. Wyniki wykazały znaczne zahamowanie wzrostu komórek HT-29, co wskazuje na obiecujące właściwości przeciwnowotworowe ekstraktu [3].
Mikrobiologia: HT-29 może być wykorzystywana jako system komórek gospodarza do badania patogenezy potencjalnych drobnoustrojów, tj. bakterii i wirusów. Naukowcy mogą infekować komórki HT-29 drobnoustrojami w celu zbadania ich zjadliwości i odpowiedzi gospodarza. W takim badaniu wykorzystano komórki HT-29 do zbadania właściwości probiotycznych bakterii kwasu mlekowego [4]. W innym badaniu wykorzystano komórki HT-29 do oceny skuteczności i bezpieczeństwa leczenia bakteriofagami [5].
5. Publikacje badawcze dotyczące komórek HT-29
Ta sekcja zawiera kilka godnych uwagi publikacji na temat komórek HT-29, które pomogą w opracowaniu badań naukowych.
W badaniu tym zaproponowano etanolowy ekstrakt z Syzygium cumini jako potencjalny środek przeciwnowotworowy przeciwko linii komórkowej raka jelita grubego HT-29. Ekstrakt znacząco hamował wzrost komórek nowotworowych.
W publikacji w Bioscience Reports przetestowano aktywność przeciwnowotworową związku Tetradrine na komórkach HT-29. Wyniki wykazały, że tetrandryna hamuje proliferację i wzrost komórek nowotworowych poprzez regulację szlaków sygnalizacji komórkowej.
W badaniu tym zaproponowano, że miRNA-193a-5p może potencjalnie regulować przerzuty komórek HT-29 poprzez regulację genów związanych z przerzutami.
Ten artykuł został opublikowany w Nature Scientific Reports w 2018 roku. W badaniu wykorzystano nowotworową linię komórkową HT-29 jako jelitowy model komórkowy do oceny skuteczności proponowanego leczenia bakteriofagami.
W tym badaniu naukowcy wykorzystali komórki HT-29 do zbadania aktywności probiotycznej bakterii kwasu mlekowego. Co ciekawe, badanie wykazało, że bakterie kwasu mlekowego zapobiegają adhezji bakterii patogennych do komórek okrężnicy.
6. Komórki HT-29 Zasoby: Protokoły, filmy i inne
W tej sekcji omówione zostaną niektóre dostępne w Internecie zasoby dotyczące komórek HT-29, które pomogą poznać protokoły ich konserwacji, hodowli i transfekcji.
Protokoły hodowli komórek
Poniższe zasoby zawierają wskazówki dotyczące podhodowli komórek HT-29.
- Hodowla komórek HT-29: Ten link dostarczy podstawowej wiedzy na temat pożywki wzrostowej, rozmrażania i podhodowli komórek HT-29.
- Utrzymywanie hodowli HT-29: Ten artykuł zawiera wszystkie przydatne informacje na temat hodowli i utrzymania komórek HT-29.
Protokoły transfekcji
Linia komórkowa HT-29 charakteryzuje się wysoką wydajnością transfekcji i jest często wykorzystywana w badaniach ekspresji genów. Poniższe zasoby opisują możliwe protokoły transfekcji dla tych komórek.
- Transfekcja HT-29: Ten link do strony internetowej zawiera szczegółowy protokół transfekcji komórek HT-29.
- Transfekcja linii komórkowej HT-29: Ten dokument opisuje protokół transfekcji linii komórkowej HT-29 plazmidowym DNA.
Filmy związane z linią komórkową HT-29
Oto kilka filmów dotyczących hodowli i utrzymania tej nowotworowej linii komórkowej.
- Pasażowanie komórek: Ten film przedstawia protokół pasażowania komórek dla adherentnych linii komórkowych.
- Transfekcja komórek HT-29: Ten film przedstawia metodę transfekcji komórek HT-29.
Oczekujemy, że informacje zawarte w tym artykule są cenne i wystarczające do obsługi i konserwacji linii komórkowej HT-29. Jeśli planujesz wykorzystać komórki HT-29 w swoich badaniach, zamów je u nas.
Odniesienia
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles i I. Recio, Linia komórkowa HT29. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: s. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA-193a-5p hamuje migrację ludzkich komórek raka okrężnicy HT-29 poprzez tłumienie szlaku przerzutów. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean i R. Safaralizadeh, Ocena przeciwnowotworowego działania etanolowego ekstraktu Syzygium cumini na linię komórek jelita grubego HT-29. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Probiotyczne właściwości pałeczek kwasu mlekowego i ich zdolność do hamowania adhezji bakterii enteropatogennych do komórek Caco-2 i HT-29. Probiotyki i białka przeciwdrobnoustrojowe, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Bakteriofagi są bardziej zjadliwe dla bakterii z ludzkimi komórkami niż w hodowli bakteryjnej; spostrzeżenia z komórek HT-29. Doniesienia naukowe, 2018. 8(1): p. 5091.
