U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler

800,00 €*

Produktene sendes frosset på tørris i kryorør. Hvert kryorør inneholder vanligvis 3 × 10 ⁶ celler for vedheftende linjer eller 5 × 10⁶ celler for suspensjonslinjer (se batch-CoA for detaljer).

Priser ekskl. avgifter pluss fraktkostnader

cryovial

Produktnummer: 300664

Sikkerhetsdatablad

Produktark

Tredjepartsavtale

Beskrivelse	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 er en genomredigert human osteosarkomcellelinje avledet fra U2OS-celler, hvor det endogene SEH1L (SEH1)-genet er modifisert ved hjelp av CRISPR/Cas9-teknologi for å kode for en in-frame SNAPf-tag. SEH1 er en komponent i Y-komplekset (også kjent som NUP107-160-komplekset), en sentral strukturell modul i kjerneporekomplekset (NPC) som bidrar til porestativets sammensetning og stabilitet. Ved å sette inn SNAPf-kodingssekvensen på det endogene lokuset, uttrykkes det merkede SEH1-proteinet under naturlig regulatorisk kontroll, noe som bevarer fysiologiske uttrykksnivåer og minimerer forstyrrelser i kjerneporekomposisjonen. SNAPf-taggen er en konstruert, hurtig reagerende variant av SNAP-taggen som kovalent binder benzylguaninkonjugerte substrater, noe som muliggjør selektiv og stabil fluorescerende merking i levende eller fiksert celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseres fusjonsproteinet til kjernemembranen i et punktformet mønster som er karakteristisk for NPC-fordelingen. Fordi merking skjer på endogene proteinnivåer, er dette systemet godt egnet for kvantitativ fluorescensmikroskopi, superoppløsningsavbildning og enkeltpartikkel-sporingsanalyser med sikte på å dissekere NPC-organisasjon og støkiometri. Den flate morfologien og de store kjernene til U2OS-celler letter ytterligere høyoppløselig visualisering av kjernemembranstrukturer. SEH1 deltar i NPC-biogenese og har også vært involvert i kinetokorrelaterte prosesser under mitose. Følgelig gir denne cellelinjen en robust plattform for å undersøke cellecyklusavhengig NPC-montering og demontering, romlig organisering av Y-komplekset innenfor porestrukturen og potensielle doble roller for SEH1 ved kjernemembranen og mitotiske kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 muliggjør mekanistiske studier av kjerneporenes arkitektur og dynamikk under fysiologisk relevante ekspresjonsforhold.
Organisme	Menneskelig
Vev	Bein
Sykdom	Osteosarkom

Alder	15 år
Kjønn	Kvinne
Etnisitet	Kaukasisk
Morfologi	Epitel-lignende
Vekstegenskaper	Vedhengende

Sitat	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytion-katalognummer 300664)
Biosikkerhetsnivå	1
NCBI_TaxID	9606
Innskyter	Ellenberg-laboratoriet (EMBL)
GMO-status	GMO-S1: Denne humane osteosarkomcellelinjen (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) inneholder en CRISPR-mediert SNAPf-SEH1-fusjon som muliggjør selektiv merking av SEH1-nukleoporinet. Modifikasjonen er stabilt til stede. Denne klassifiseringen gjelder bare i Tyskland og kan variere andre steder.

Proteinuttrykk	SEH1, SNAPf-tag

Kulturmedium	McCoys 5a, m: 3,0 g/L glukose, m: stabil glutamin, m: 2,0 mM natriumpyruvat, m: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820200a)
Kosttilskudd	Suppler med 10 % FBS, 3,0 g/L glukose, stabil glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1 % NEAA
Dissosiasjonsreagens	Accutase
Subkulturer	Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Frys medium	Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Opptining og dyrking av celler	Kontroller at hetteglasset er dypfryst ved levering, ettersom cellene sendes på tørris for å opprettholde optimale temperaturer under transport. Ved mottak skal hetteglasset enten oppbevares umiddelbart ved temperaturer under -150 °C for å sikre at cellenes integritet bevares, eller gå videre til trinn 3 hvis umiddelbar dyrking er nødvendig. Ved umiddelbar dyrking tiner du hetteglasset raskt ved å senke det ned i et 37 °C varmt vannbad med rent vann og et antimikrobielt middel, og røre forsiktig i 40-60 sekunder til det blir en liten isklump igjen. Utfør alle påfølgende trinn under sterile forhold i en strømningshette, og desinfiser kryoflasken med 70 % etanol før du åpner den. Åpne det desinfiserte hetteglasset forsiktig, og overfør cellesuspensjonen til et 15 ml sentrifugerør som inneholder 8 ml romtemperert dyrkingsmedium, og bland forsiktig. Sentrifuger blandingen ved 300 x g i 3 minutter for å separere cellene, og kast supernatanten som inneholder rester av frysemedium, forsiktig. Resuspender cellepelleten forsiktig i 10 ml nytt dyrkningsmedium. For adherente celler, del suspensjonen mellom to T25-kulturkolber; for suspensjonskulturer, overfør alt mediet til én T25-kolbe for å fremme effektiv celleinteraksjon og vekst. Følg etablerte subkulturprotokoller for fortsatt vekst og vedlikehold av cellelinjen, noe som sikrer pålitelige eksperimentelle resultater.
Inkubasjonsatmosfære	37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.
Flaskebelegg	For optimal feste og levedyktighet etter tining anbefaler vi å bruke kollagenbelagte kolber eller plater.
Fryseprosedyre	Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.
Leveringsbetingelser	Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.
Lagringsforhold	For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Sterilitet	Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma. For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Vær oppmerksom på at denne cellelinjen ikke er tilgjengelig under en standard Cytion MTA, da den krever en tredjepartsavtale og/eller er gjenstand for forhandlinger med den opprinnelige lisensgiveren.

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler

Generell informasjon

Kjennetegn

Regulatoriske data

Biomolekylære data

Håndtering

Kvalitetskontroll / Genetisk profil / HLA

Tredjepartsavtale