게시일: 2023년 | 최종 검토일: 2026년 5월

세포 동결에 대한 종합 가이드: 생존율 및 무균성 확보

세포 동결은 세포 배양 관리에서 중요한 과정으로, 귀중한 세포주의 장기 보관 및 보존을 보장합니다. 인간 세포든 동물 세포든, 정확한 프로토콜을 따르고 엄격한 무균 기술을 유지하는 것은 성공적인 냉동 보존을 달성하는 데 가장 중요합니다.

이 가이드는 세포의 생존력과 무균성을 유지하면서 효과적으로 세포를 동결하는 데 필요한 재료, 시약 및 단계별 절차에 대한 상세한 지침을 제공합니다. 연구자들은 이 지침을 준수함으로써 세포 생존력의 손실을 최소화하며 자신 있게 세포 배양을 저장하고 나중에 복원할 수 있어, 실험 결과의 무결성과 신뢰성을 유지할 수 있습니다.

우선, 무균 작업 환경을 조성하는 것이 필수적입니다. 적절한 무균 기술은 오염을 방지하고 배양의 무균 상태를 보장하는 데 결정적인 역할을 합니다.

무균 기법

배양의 무균 상태를 보장하기 위해 전 과정에 걸쳐 무균 기법을 준수하십시오.

포괄적인 세포 동결 과정

이 흐름도는 세포를 적절하게 동결하는 데 필요한 필수 단계를 상세하게 시각적으로 안내합니다. 냉동 보존 과정 중 높은 세포 생존율과 무결성을 보장하려면 이 절차를 따르십시오.

동결 배지 준비

세포 유형에 따라 동결 보호 용액을 준비하십시오:

FBS 함유 배양액: 90% FBS + 10% DMSO 또는 70% 배양액, 20% FBS 및 10% DMSO
글리세롤이 필요한 세포: 90% FBS + 10% 글리세롤

당사의 미리 배합된 동결 배지 구입을 고려해 보십시오:

동결 배지 CM-1: 태아 소 혈청(FBS)이 포함된 배지가 필요한 프로토콜용
동결 배지 CM-ACF - 무혈청: FBS가 포함되지 않은 대안

라벨링 및 문서화

크라이오바이알에 다음 세부 정보를 표기하십시오:

날짜
연구자 이름
세포 번호
배양 세대수
세포 유형
기타 정보 (예: 유전자 변형)

세포 배양

부착성 세포의 경우:

세포가 85–95% 밀도를 이룰 때까지 관찰
기존 배양액을 제거합니다
칼슘 및 마그네슘이 없는 PBS로 세포 단층을 세척합니다
Accutase, 트립신 또는 트립신-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 필요한 경우 배양액으로 중화합니다
세포 현탁액을 50mL 팔콘 튜브로 옮깁니다

현탁 세포의 경우:

현미경으로 세포 밀도와 건강 상태를 확인하십시오
세포 현탁액을 50 mL 팔콘 튜브에 직접 옮깁니다

세포 계수 및 원심분리

혈구계수기 또는 자동 세포 계수기를 사용하여 세포를 계수합니다
실온에서 300g으로 3~5분간 원심분리하여 세포를 침전시킵니다
세포 펠릿이 흐트러지지 않도록 주의하며 상층액을 조심스럽게 제거하십시오
사용 전 준비된 동결 배지를 37°C로 예열하십시오

동결 보존

세포 펠릿을 동결 배지에 재현탁하여, 부착 세포의 경우 200만 세포/mL, 현탁 세포의 경우 500만 세포/mL 또는 원하는 농도가 되도록 한다
표시가 된 냉동용 바이알에 세포 현탁액 1.0mL(또는 필요에 따라 더 많은 양)를 분주합니다.
세포를 장기 보관 용기로 옮기기 전에 서서히 냉동하는 방법을 사용하십시오

? 방법: ? 단계
❄️ 수동 냉동: 1️⃣ 동결 배지에 담긴 세포를 4°C 냉동고에 40분간 두십시오.
2️⃣ -80°C 냉동고로 옮겨 24시간 동안 보관하십시오.
3️⃣ 장기 보존을 위해 액체 질소에 세포를 보관하십시오.
? Mr. Frosty 사용법: 1️⃣ 냉동 배지가 담긴 크라이오바이알에 세포를 준비합니다.
2️⃣ 크라이오바이알을 Mr. Frosty 용기에 넣습니다.
3️⃣ 액체 질소로 옮기기 전, -80°C에서 24시간 동안 보관합니다.
? 제어식 냉동고: 1️⃣ 기기를 설정하여 온도를 서서히 낮추십시오.
2️⃣ 준비된 세포를 냉동기에 넣으십시오.
3️⃣ 냉동 주기가 끝나면 세포를 액체 질소로 옮기십시오.

장기 보관을 위해 크라이오바이알을 -130°C 이하의 온도 또는 액체 질소 내에 보관하십시오.

재료 및 시약

1–2 mL 크라이오바이알
CoolCell® 동결 장치 또는 제어 속도 냉동고
동결 보호 용액 (예: DIY 동결 보호 용액, CM-1, CM-ACF 또는 특수 배지)
태아 소 혈청(FBS) 또는 배양 상청액
DMSO 또는 글리세롤
칼슘 및 마그네슘이 없는 PBS
Accutase, 트립신 또는 트립신-EDTA (부착 세포용)
15mL 또는 50mL 팔콘 튜브
혈구계수기 또는 자동 세포 계수기
원심분리기