용량: 100 ml
보관 조건: ≤ –15°C
무균 상태: 무균 여과 처리
안정형 글루타민 용액(L-알라닐-L-글루타민, 200 mM)은 세포 배양 배지에서 기존 L-글루타민을 직접 대체하도록 설계된 고안정성 디펩타이드 형태의 L-글루타민입니다. L-글루타민은 필수 아미노산이자 배양 세포의 주요 에너지원으로, 세포 성장, 대사 및 단백질 합성에 중요한 역할을 합니다.
적용 및 장점
표준 액체 배지에서 L-글루타민은 37°C에서 비교적 빠르게 분해되어 암모늄 이온과 같은 독성 부산물을 생성하며, 이는 세포 생존율과 실험 결과에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 안정형 글루타민은 배양 조건에서도 분해되지 않는 디펩타이드 형태를 제공함으로써 이러한 한계를 극복합니다.
세포는 필요에 따라 디펩타이드 결합을 효소적으로 절단하여 L-글루타민을 방출하므로, 유해한 노폐물 축적을 방지하면서 지속적으로 신선한 공급을 보장합니다. 이로 인해 본 용액은 장기 세포 배양 및 고밀도 성장 시스템에 특히 유리합니다.
제형 및 사용법
L-알라닐-L-글루타민 용액은 세포 배양 등급의 물에 200 mM 농도로 조제되며, 오염에 민감한 용도를 위해 멸균 여과 처리됩니다. 실험 요구 사항에 따라 완전 배지에 직접 희석하여 사용할 수 있습니다. 제품 안정성 유지를 위해 ≤ –15°C에서 보관하고 반복적인 동결-해동 주기를 피하십시오.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에 사용하지 마십시오. 인간 또는 동물에 사용하지 마십시오.
용량: 100 ml
보관 조건: +2°C ~ +8°C
무균 상태: 무균 여과 처리
HEPES 완충 용액(1 M)은 N-2-하이드록시에틸피페라진-N-2-에탄설폰산으로도 알려져 있으며, 세포 배양 배지에서 널리 사용되는 양이온성 유기 완충제입니다. 이는 생리학적 범위인 6.7~8.6의 안정적인 pH 조건을 유지하도록 설계되어 체외 적용 시 최적의 세포 기능을 지원합니다.
적용 및 장점
HEPES는 특히 CO₂ 인큐베이터 외부에서 세포를 취급할 때 세포 배양 시스템에서 신뢰할 수 있는 완충 능력을 제공합니다. 배양 배지에 10–25 mM HEPES를 첨가하면 장시간 조작 기간 동안 pH 안정성이 향상되어 일관된 실험 조건 유지에 도움이 됩니다.
이 완충제는 막 투과성이 없으며, 생화학적 반응에 대한 간섭이 최소화되고, 강한 화학적 및 효소적 안정성을 보입니다. 이러한 특성으로 인해 다양한 세포 배양 및 생화학적 응용 분야에 적합합니다.
제형 및 사용법
본 용액은 세포 배양 등급의 물로 제조된 1M 농축액 형태로 공급되며, 오염에 민감한 환경에서 사용하기 위해 멸균 여과 처리되었습니다. 응용 요구 사항에 따라 원하는 작업 농도로 희석할 수 있습니다. 제품의 완전성을 유지하기 위해 +2°C ~ +8°C에서 보관하고 무균 조건 하에서 취급하십시오.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 인간 또는 동물에 사용해서는 안 됩니다.
용량: 50 ml
보관 조건: +2°C ~ +8°C
무균 상태: 무균 여과 처리
D-(+)-글루코스 용액(덱스트로스 용액)은 세포 대사의 핵심 구성 성분인 천연 당류 D-(+)-글루코스를 함유한 멸균 즉시 사용 가능한 보충제입니다. 글루코스는 에너지 생산, 당화 반응, 세포 구조 및 기능에 기여하는 당쇄 형성과 같은 필수 생물학적 과정에 관여합니다.
적용 및 이점
본 포도당 용액은 세포 배양 배지 및 다양한 세포·분자 생물학 응용 분야에서 보충제로 널리 사용됩니다. 주요 탄소 및 에너지원으로서 포도당은 세포 성장, 증식 및 대사 활동을 지원합니다. 생합성 경로에 관여함으로써 정상적인 세포 생리 기능 유지와 실험 일관성 확보에도 필수적입니다.
제형 및 사용법
본 용액은 250 g/L의 고농도 포도당으로 공급되어 실험 요구 사항에 따라 배지에 유연하게 희석할 수 있습니다. 오염에 민감한 응용 분야에 적합하도록 멸균 여과 처리되었습니다. 제품 품질과 안정성 유지를 위해 +2°C ~ +8°C에서 보관하고 무균적으로 취급하십시오.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 인간 또는 동물에 사용해서는 안 됩니다.
용량: 10 ml
보관 조건: +2°C ~ +8°C
무균 상태: 무균 여과
인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS) 용액(100배 농축)은 다양한 세포 배양 용도로 설계된 화학적으로 정의된 보충제입니다. 이 제품은 주로 저혈청 또는 무혈청 조건에서 세포 성장을 지원하기 위해 기초 세포 배양 배지에 첨가제로 사용됩니다.
용도 및 장점
당사의 ITS 보충제는 무혈청 배지의 최적 성능을 위해 필요한 필수 성분을 제공합니다. 기존 영양 배지에 ITS를 보충함으로써, 많은 세포주의 일상적인 유지 관리에 필요한 태아 소 혈청(FBS)의 양을 현저히 줄일 수 있습니다. 이는 혈청 사용과 관련된 변동성을 최소화하는 동시에 일관된 세포 성장과 생존력을 유지하는 데 도움이 됩니다.
인슐린은 주요 영양소의 세포 내 흡수 및 대사를 돕고, 트랜스페린은 철분 수송을 촉진하며, 셀레늄은 항산화 방어 및 효소 활성에 기여합니다. 이러한 성분들은 함께 작용하여 정의된 배양 시스템에서 균형 잡힌 세포 대사를 촉진하고 재현성을 향상시킵니다.
제형 및 사용법
인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS)은 페놀 레드가 첨가되지 않은 얼스 균형 염 용액(EBSS)에 용해된 100배 농축액 형태로 공급됩니다. 표준 용도의 경우, 권장 사용 농도를 얻기 위해 적절한 기초 배지에 1:100 비율로 희석하여 사용하십시오. 제품의 안정성과 무균 상태를 유지하기 위해 +2°C에서 +8°C 사이에서 보관하고 무균 조건 하에서 취급하십시오.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에는 사용하지 마십시오. 사람이나 동물에게 사용하지 마십시오.
용량: 5 ml
보관 조건: +2°C ~ +8°C
무균 상태: 무균 여과
인간 재조합 인슐린 용액은 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함한 포유류 세포주 배양에 일반적으로 사용되는 화학적으로 정의된 배지 보충제입니다. 이 세포 배양용 용액은 Saccharomyces cerevisiae에서 발현된 재조합 인간 인슐린을 함유하고 있어, 연구 응용 분야에서 높은 순도와 일관된 성능을 보장합니다.
용도 및 장점
인슐린은 세포 성장과 생산성을 촉진하기 위해 무혈청 및 화학적으로 정의된 배지에 일상적으로 첨가됩니다. 주요 조절 호르몬인 인슐린은 포도당, 아미노산 및 지방산의 세포 내 흡수, 이용 및 저장을 지원합니다. 또한 글리코겐, 단백질 및 지질의 분해를 억제하여 배양 시스템에서 세포 생존율과 대사 안정성을 향상시키는 데 기여합니다. 화학적으로 정의된 제형은 민감한 세포 배양 워크플로우에서 재현성을 높이고 변동성을 최소화합니다.
생물학적 특성 및 용도
인슐린은 췌장 섬의 β-세포에서 자연적으로 생성되는 2사슬 폴리펩타이드 호르몬입니다. 분자량은 약 5,800 Da입니다. α-사슬과 β-사슬은 두 개의 사슬 간 이황화 결합으로 연결되어 있으며, α-사슬에는 하나의 사슬 내 이황화 결합이 포함되어 있습니다. 세포 배양 용도로 사용할 경우, 용액은 무균 조건에서 취급해야 하며 안정성과 성능을 유지하기 위해 +2°C에서 +8°C 사이에서 보관해야 합니다.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 사람이나 동물에게 사용해서는 안 됩니다.
용량: 100 ml
보관 조건: +2°C ~ +8°C
무균 상태: 무균 여과 처리
피루브산 나트륨 용액(100 mM)은 세포 배양 배지에 추가적이고 쉽게 접근 가능한 에너지원을 제공하기 위해 설계된 멸균, 즉시 사용 가능한 보충제입니다. 피루브산 나트륨은 세포 에너지 대사에 핵심적인 역할을 하며, 종양 세포와 같이 대사 활동이 활발하고 빠르게 증식하는 세포의 성장을 지원합니다. 보충은 세포 생존율을 향상시키고 배양 시스템에서 대사 안정성을 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다.
적용 및 이점
이 용액은 피루브산으로 배지를 풍부하게 하고 최적의 성장 조건을 촉진하기 위해 일상적인 세포 배양에 널리 사용됩니다. ATP 생성을 지원하고, 산화 스트레스 감소에 도움을 주며, 배양된 세포의 대사 성능 향상에 기여합니다. 세포 배양 등급의 물로 제조되고 멸균 여과된 이 제품은 연구 워크플로우에서 일관된 품질과 재현성을 보장합니다.
사용법 및 호환성
대부분의 세포 배양 응용 분야에 권장되는 최종 농도는 1 mM 피루브산 나트륨이며, 100 mM 원액을 완전 배지에 1:100으로 희석하여 달성합니다. 본 용액은 다양한 기초 배지 및 포유류 세포주와 호환됩니다. 제품 안정성 유지를 위해 +2°C ~ +8°C에서 보관하고 오염을 방지하십시오.
연구용으로만 사용하십시오. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 인간 또는 동물에 사용해서는 안 됩니다.
용량: 100ml 보관: ≤-15°C 멸균: 멸균 여과
항생제/항진균제 용액(100배 )은 세포 배양 및 관련 실험실 응용 분야에서 미생물 오염 위험을 줄이기 위해 설계된 멸균, 즉시 사용 가능한 농축액입니다. 이 100배 용액에는 페니실린, 스트렙토마이신, 암포테리신 B의 잘 정립된 조합이 포함되어 있어 그람 양성 및 그람 음성 박테리아, 효모, 사상균에 대한 광범위한 항균 활성을 제공합니다. 이 제형은 진핵 세포 배양, 박테리아 배지 및 기타 오염에 민감한 시스템에 사용하기에 적합하여 깨끗하고 일관된 실험실 운영을 지원합니다.
응용 분야 및 이점 일상적인 연구 프로토콜에 최적화된 이 솔루션은 세포 배양 워크플로우에서 무균 상태를 유지하는 데 널리 사용됩니다. 오염에 민감한 환경에서도 안정적인 성능을 제공하여 연구자가 세포 건강이나 실험 재현성을 손상시키지 않고 미생물 과다 증식의 위험을 줄일 수 있도록 도와줍니다. 멸균 여과된 제형으로 추가적인 가용화 단계가 필요하지 않으므로 배지 준비가 간소화되고 일상적인 실험실 절차에서 변동성이 줄어듭니다.
사용 및 호환성 표준 작업 농도를 얻으려면 용액을 전체 배양 배지에 1:100으로 희석합니다. 이 제품은 광범위한 포유류 세포주 및 기저 배지와 호환됩니다. 일관된 재고 가용성을 통해 연구자들은 신뢰할 수 있는 공급 연속성과 간소화된 물류 계획의 이점을 누릴 수 있습니다. 용액은 안정성을 유지하기 위해 -15°C 이하에서 보관하고 동결-해동 사이클을 반복하지 않도록 보호해야 합니다. 연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 사람이나 동물에게 사용해서는 안 됩니다.
용량: 100ml 보관: 보관: +2°C ~ +8°C 멸균: 멸균 여과
MEM 비필수 아미노산(100x )은 포유류 세포 배양 시스템에서 세포 성장과 생존력을 향상시키기 위해 고안된 멸균 보충제입니다. 이 제형은 표준 최소 필수 배지(MEM)에서 발견되는 비필수 아미노산의 100배 농축액에 해당하므로 최소한의 준비로 기초 배지를 직접 보충할 수 있습니다.
적용 및 이점 이 보충제는 빠르게 증식하는 세포 또는 비필수 아미노산을 새로 합성하는 능력을 상실한 세포주에 추가적인 아미노산 풀을 제공합니다. 생합성의 대사 부담을 완화하여 특히 영양소에 민감하거나 고밀도 배양에서 성장 동력학 개선, 생존력 연장, 실험 일관성 향상을 지원합니다.
구성 및 사용 이 용액에는 글리신, L-알라닌, L-아스파라긴, L-아스파르트산, L-글루탐산, L-프롤린 및 L-세린이 포함되어 있습니다. MEM 및 대부분의 다른 표준 미디어와 호환됩니다. 사용하려면 최종 배양 배지에 1:100으로 희석하세요. 이 제품은 멸균 필터링되어 있으며 별도의 취급 단계 없이 바로 사용할 수 있습니다. 연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료 절차에 사용해서는 안 됩니다. 사람이나 동물에게 사용해서는 안 됩니다.
Accutase는 표준 조직 배양 플라스틱 용기 및 접착 코팅 표면에서 부착된 포유류 세포를 분해하기 위해 트립신/EDTA의 온화한 대안으로 설계된, 즉시 사용 가능한 무균 여과 세포 박리 용액입니다. 이 제품은 균형 잡힌 염 용액에 단백질 분해 및 콜라겐 분해 효소 활성을 결합하여 효과적이면서도 제어된 분해를 제공함으로써, 세포 표면 단백질을 보존하고 높은 배양 후 생존율 및 신속한 재부착을 지원합니다.
Accutase의 조성은 EDTA와 시각적 pH 지시약인 페놀 레드를 함유한 Dulbecco’s 인산염 완충 식염수(DPBS)를 기반으로 합니다. 이 효소들은 포유류나 박테리아 유래가 아니므로, Accutase는 줄기세포 연구, 백신 워크플로우 및 동물 또는 미생물 유래 오염 물질을 최소화해야 하는 모든 응용 분야에 특히 적합합니다. 이 용액은 37°C에서 자가 억제되므로, 분리 후 중화 시약이나 혈청 함유 배지가 필요하지 않으며, 세포를 신선한 배지로 직접 옮길 수 있습니다.
주요 특징
즉시 사용 가능한 1x 무균 여과액 – 희석이나 재구성 불필요
부드러운 분리를 위한 단백질 분해 및 콜라겐 분해 효소 활성 결합
로트 간 일관성을 위해 각 배치의 분해 활성을 정의된 수준으로 표준화
비포유류 및 비세균성 효소 유래
37°C에서 자가 억제 – 중화 용액 불필요
EDTA가 포함된 Dulbecco’s PBS로 조제
시각적 pH 지표로 페놀 레드 포함
pH 6.8 – 7.8
대표적인 용도
Accutase는 인간 배아 줄기 세포(hESCs), 인간 유도 만능 줄기 세포(iPSCs), 신경 줄기 세포, 1차 신경 세포, 그리고 HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 및 A549와 같은 일상적으로 배양되는 부착 세포주를 포함하여 다양한 부착성 및 민감한 세포 유형을 부드럽게 분해합니다. 대표적인 사용 사례는 다음과 같습니다:
유착성 포유류 세포의 일상적인 재배양 및 계대
hESC, iPSC 및 기타 민감한 세포주의 부드러운 단일 세포 분해
유세포 분석 및 FACS 분석을 위한 시료 전처리
에피토프 무결성이 중요한 세포 표면 마커 분석
세포 이동, 증식 및 세포 사멸 분석
혈청 결핍을 이용한 휴지 상태 분석 및 종양유전자 형질전환 연구
종양 세포 및 신경능선 세포 이동 분석
바이오리액터 워크플로우에서의 생산 규모 확대
일상적인 작업의 경우, 배양 표면 75 cm²당 약 10 ml의 Accutase를 도포하고 실온에서 5–10분간 배양하십시오. 최적의 배양 시간은 각 세포주별로 결정해야 하며 1시간을 초과해서는 안 됩니다. 첨가 전에, 잔류 혈청 및 2가 양이온을 제거하기 위해 칼슘과 마그네슘이 없는 DPBS와 같은 Ca²⁺/Mg²⁺-무염 용액으로 세포층을 씻어내십시오.
취급 및 보관
개봉하지 않은 병은 -15°C 이하에서 냉동 보관하십시오. 실온에서 또는 +2°C~+8°C에서 하룻밤 동안 해동하십시오. 높은 온도는 효소 활성을 저하시키므로 37°C 수조에서 Accutase를 해동하지 마십시오. 해동 후 용액은 +2°C~+8°C에서 최대 2개월간 보관할 수 있으며, 실온에서는 보관하지 마십시오. 사용 전 시약을 37 °C로 예열하지 마십시오. 실온에서 세척된 세포에 직접 첨가하십시오. 장기 보관을 위해서는 반복적인 해동 주기를 피하기 위해 1회용 분취를 권장합니다. 항상 무균 조건에서 작업하십시오.
품질
엄격한 품질 기준에 따라 제조되었습니다. Accutase의 각 배치(batch)는 무균 여과를 거치며, 무균성, pH, 외관 및 해리 활성을 테스트하여 배치 간 일관되고 재현 가능한 성능을 보장합니다.
제품 사양
사양
상세
제품 유형세포 박리/분리 시약
포맷무균 여과된 액체, 즉시 사용 가능
용적100 ml
사용 농도1x (즉시 사용 가능)
효소 활성단백질 분해 및 콜라겐 분해 복합
효소 기원비포유류 및 비박테리아
완충액 시스템EDTA가 포함된 Dulbecco’s PBS
pH 지시약페놀 레드
pH 범위6.8 – 7.8
외관투명한 연한 붉은색에서 주황색 용액
보관 온도-15 °C 이하
해동 후 안정성+2 °C ~ +8 °C에서 최대 2개월
권장 사용량배양 면적 75 cm²당 약 10 ml
일반적인 배양 시간실온에서 5–10분
배송 조건드라이아이스로 냉동
용도연구용 및 추가 제조용으로만 사용
제형 (리터당 성분)
성분
농도 (mg/L)
무기염
염화나트륨 (NaCl)8000.00
인산이수소나트륨 (Na2HPO4)1150.00
염화칼륨 (KCl)200.00
인산이수소칼륨 (KH2PO4)200.00
기타 성분
EDTA·4Na (테트라소듐 EDTA)220.00
페놀 레드3.00
특허받은 효소 혼합물 (단백질 분해 및 콜라겐 분해 활성)1x
Accutase는 Innovative Cell Technologies, Inc.의 등록 상표입니다.
이 즉시 사용 가능한 무균 여과 액상 배지는 얼의 균형염용액(EBSS), 2 mM L-글루타민, D-글루코스(1.0 g/L), 2.2 g/L 중탄산나트륨(NaHCO3)이 보충되어 있어, 이산화탄소 조절 인큐베이터 환경(일반적으로 5% CO2)에서 사용하기에 적합합니다. 포함된 페놀 레드는 pH 지시제 역할을 하여, 세포 배양 중 배지 상태를 편리하게 육안으로 모니터링할 수 있게 해줍니다.
주요 특징
Earle’s Balanced Salt Solution(EBSS)이 포함된 고전적인 Eagle’s MEM 배지
2 mM L-글루타민 포함 – 즉시 사용 가능
2.2 g/L 중탄산나트륨 – 5% CO2 배양에 대한 완충 처리
주 탄소원으로 D-글루코스(1.0 g/L) 함유
pH 지시제로 페놀 레드 포함
HEPES 및 피루브산나트륨 미포함
무균 여과된 액체 배지, 바로 사용 가능
pH 7.0 – 7.6
대표적인 용도
EMEM은 HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 및 다양한 원시 세포를 포함한 광범위한 포유류 세포주의 배양을 지원합니다. 일반적인 용도는 다음과 같습니다:
부착성 세포주의 일상적인 유지 및 증식
바이러스 증식 및 백신 생산 워크플로우
세포 독성 및 생물학적 분석 응용
전사 및 단백질 발현 연구
세포 생물학 및 분자 생물학 분야의 기초 연구
최적의 세포 성장을 위해 EMEM에는 일반적으로 5~10%의 소 태아 혈청(FBS)이 첨가되며, 세포주에 따라 비필수 아미노산(NEAA) 및 페니실린/스트렙토마이신과 같은 항생제가 첨가되기도 합니다.
취급 및 보관
개봉하지 않은 병은 빛을 피하여 +2°C~+8°C에서 보관하십시오. 개봉 후에는 무균 조건에서 사용하십시오. 용액 내 L-글루타민은 서서히 분해되므로, 최상의 성능을 위해 개봉 후 4주 이내에 배지를 사용하거나, 장기간 보관할 경우 사용 전 신선한 L-글루타민을 보충할 것을 권장합니다. 세포에 배지를 첨가하기 전에 배지가 37°C로 따뜻해지도록 하십시오.
품질
엄격한 품질 기준에 따라 제조되었습니다. 각 배치에 대해 무균성, pH, 삼투압 및 내독소 수준을 검사하여 세포 배양 응용 분야에서 일관된 성능을 보장합니다.
제품 사양
사양
상세
제품 유형MEM
제품 카테고리세포 배양 배지
포맷액체
멸균예
크기500 ml
L-글루타민L-글루타민 함유 (2 mM)
포도당포도당 함유 (1.0 g/L)
중탄산나트륨NaHCO3 (2.2 g/L) 포함
HEPESHEPES 미포함
피루브산 나트륨피루브산나트륨 미포함
페놀 레드페놀 레드 포함
염 용액얼의 균형염용액 (EBSS)
pH7.0 – 7.6
엔도톡신 함량명시되지 않음
보관+2 °C ~ +8 °C
제형 (리터당 성분)
성분
농도 (mg/L)
무기염
염화칼슘·2H₂O265.00
황산마그네슘97.72
염화칼륨400.00
염화나트륨6,800.00
무수 인산이수소나트륨122.00
중탄산나트륨 (NaHCO3)2,200.00
아미노산
L-아르기닌 · 염산염126.00
L-시스틴 · 2HCl31.30
L-글루타민292.00
L-히스티딘 · 염산 · 물42.00
L-이소류신52.00
L-류신52.00
L-라이신 · 염산염72.50
L-메티오닌15.00
L-페닐알라닌32.00
L-트레오닌48.00
L-트립토판10.00
L-티로신 · 2Na · 2H2O51.90
L-발린46.00
비타민
D-판토텐산 칼슘1.00
콜린 클로라이드1.00
엽산1.00
미오-이노시톨2.00
니코틴아미드1.00
피리독살 · 염산염1.00
리보플라빈0.10
티아민 · 염산염1.00
기타 성분
D(+)-글루코스1,000.00
페놀 레드10.00
프리즈 미디엄 CM-1의 주요 기능은 다음과 같습니다:
광범위한 호환성: 일차 세포, 줄기세포, 확립 세포주를 포함한 다양한 세포 유형에 효과적입니다.
높은 생존력: 해동 후 세포 회복과 생존력을 극대화하도록 최적화되어 신뢰할 수 있는 실험 결과를 보장합니다.
즉시 사용 가능: 즉시 사용할 수 있도록 편리하게 준비 및 멸균되어 준비 시간과 오염 위험을 줄입니다.
향상된 안정성: 표준 냉동 보존 조건에서 일관된 성능을 유지하여 재현 가능한 결과를 보장합니다.
긴 보관 수명: CM-1은 혈청을 함유한 즉시 사용 가능한 냉동 보존 배지로 최대 1년 동안 냉장고에 보관할 수 있습니다.
세포 동결에 CM-1 사용
부착 세포와 현탁 세포를 모두 동결하기 위해 CM-1을 사용하려면 다음 단계를 따르세요
부착 세포의 경우 배양 기질에서 세포를 세척하고 분리합니다. 현탁 세포의 경우 다음 단계로 바로 진행합니다.
세포를 계수하여 적절한 농도가 되었는지 확인합니다.
세포를 원심분리하여 펠릿화한 다음 CM-1 동결 배지에 다시 부유시킵니다.
재부유된 세포를 냉동 바이알로 옮깁니다.
세포를 장기 보관소로 옮기기 전에 저속 냉동 방법을 사용합니다
방법
설명
단계
❄️
수동 냉동
세포 생존력을 보장하기 위해 점진적으로 온도를 낮추는 단계별 방법입니다
1️⃣ 동결 배지에 세포를 넣고 4°C 냉동실에 40분간 보관합니다.
2️⃣ -80°C 냉동고로 옮겨 24시간 동안 보관합니다.
3️⃣ 장기 보존을 위해 액체 질소에 세포를 보관합니다
❄️
미스터 프로스티 사용
전기 없이도 냉동 속도를 조절할 수 있는 편리한 장치입니다
1️⃣ 동결 배지와 함께 냉동 바이알에 세포를 준비합니다.
2️⃣ 냉동 바이알을 미스터 프로스티 용기에 넣습니다.
3️⃣ 액체 질소로 옮기기 전에 -80°C에서 24시간 동안 보관합니다
❄️
속도 제어 냉동고
온도 감소를 제어하도록 설계된 Thermo Fisher 또는 기타 제조업체의 고정밀 냉동고입니다
1️⃣ 온도를 서서히 낮추도록 장치를 프로그래밍합니다.
2️⃣ 준비된 세포를 냉동실에 넣습니다.
3️⃣ 냉동 사이클이 끝나면 세포를 액체 질소로 옮깁니다
장기 보존을 위해 냉동 바이알을 -130°C 이하의 온도 또는 액체 질소에 보관합니다.
성분
FBS, DMSO, 포도당, 염분 함유
완충 용량: pH = 7.2 ~ 7.6
사이티온의 동결 배지 CM-1은 다양한 연구 분야에서 해동 후 높은 세포 생존율과 기능을 보장하는 신뢰할 수 있는 동결 보존 솔루션을 제공합니다.
햄의 F-12K(케인스) 배지는 세포 배양 조건을 최적화하기 위해 세심하게 제조되었습니다. 아미노산과 피루브산 나트륨과 같은 필수 성분과 푸트레신, 티미딘, 하이폭산틴, 아연 등의 추가 성분이 풍부하게 함유된 것이 특징입니다. 이러한 추가 성분을 통해 연구자는 특정 세포 유형에 대해 최소한의 혈청 또는 정의된 성분으로 배지를 보충하여 정확한 실험 조건을 용이하게 할 수 있습니다.
특히 Ham의 F-12K(케인스) 배지에는 단백질이나 성장 인자가 포함되어 있지 않습니다. 따라서 성장 인자와 태아 소 혈청(FBS)을 보충해야 하는 경우가 많으므로 연구자는 특정 세포주의 요구 사항에 맞게 배지를 맞춤화할 수 있습니다. 최적의 성능을 위해서는 각 세포주에 맞게 FBS의 농도를 세심하게 최적화하여 최적의 성장과 기능을 보장해야 합니다.
Ham의 F-12K(케인스) 배지는 생리적 pH를 유지하기 위해 중탄산나트륨 완충 시스템(2.5g/L)을 사용하므로 배양 중에 5~10%의 CO2 환경을 제어할 필요가 있습니다. 이를 통해 배지의 pH가 세포 성장과 생존에 이상적인 범위 내에서 유지됩니다
품질 관리
20-25°C에서 pH = 7.2 +/
- 0.02.
각 로트는 마이코플라즈마 및 박테리아가 없는지 무균 테스트를 거쳤습니다.
유지 관리
어두운 곳에서 +2°C ~ +8°C로 냉장 보관하세요. 냉동 및 +37°C까지 데우거나 얼리면 제품의 품질이 저하됩니다.
매체를 37°C 이상으로 가열하거나 제어할 수 없는 열원(예: 전자레인지)을 사용하지 마세요.
매체의 일부만 사용하려면 병에서 이 양을 꺼내 실온에서 데우세요.
기본 배지를 제외한 모든 배지의 유통기한은 제조일로부터 8주입니다.
구성
성분
mg/L
무기염
염화칼슘 x 2H2O
135,24
황산구리(II) x 5H2O
0,00
황산철(II) x 7H2O
0,83
염화마그네슘 x 6H2O
105,72
황산마그네슘 x 7H2O
394,49
염화칼륨
283,29
인산이 수소 칼륨
58,52
염화나트륨
7597,20
인산이 수소 나트륨무수
115,02
황산아연 x 7H2O
0,14
기타 성분
D(+)-포도당 무수물
1260,00
히폭산틴
4,08
DL-α-리포산
0,21
페놀 레드
3,00
푸트레신 x 2HCl
0,32
피루브산 나트륨
220,00
NaHCO3
2500,00
티미딘
0,73
아미노산
L-알라닌
17,82
L-아르기닌 x HCl
421,40
L-아스파라긴 x H2O
30,02
L-아스파르트산
26,62
L-시스테인 x HCl x H2O
70,24
L-글루타민
292,20
L-글루탐산
29,42
글리신
15,01
L-히스티딘 x HCl x H2O
41,92
L
- 이소류신
7,87
L-류신
26,24
L-라이신 x HCl
73,04
L-메티오닌
8,95
L-페닐알라닌
9,91
L-프롤린
69,06
L-세린
21,02
L-트레오닌
23,82
L-트립토판
4,08
L-티로신
10,87
L-발린
23,42
비타민
D(+)-비오틴
0,07
판토텐산 칼슘
0,48
염화 콜린
13,96
엽산
1,32
미오 이노시톨
18,02
니코틴 아미드
0,04
피리독신 x HCl
0,06
리보플라빈
0,04
티아민 x HCl
0,34
비타민 B12
1,36
인산 완충 식염수(PBS)는 생물학 및 화학 연구에서 널리 사용되는 완충 용액입니다. 조직 처리 및 세포 배양을 포함한 다양한 실험 절차에서 pH 균형과 삼투압을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. 당사의 PBS 용액은 모든 실험에서 안정성과 신뢰성을 보장하기 위해 고순도 성분으로 세심하게 배합됩니다. 삼투압과 이온 농도가 인체와 매우 유사하여 등장성이며 대부분의 세포에 무독성입니다.
PBS 용액의 구성
소니의 PBS 용액은 초순수 등급의 인산 완충액과 식염수를 혼합하여 pH를 조정한 것입니다. 1배 작동 농도에서는 다음을 포함합니다:
8000 mg/L 염화나트륨(NaCl)
200 mg/L 염화칼륨(KCl)
1150 mg/L 인산나트륨 이염기성 무수물(Na2HPO4)
200 mg/L 인산칼륨 일염기성 무수물(KH2PO4)
이 구성은 다양한 생물학적 응용 분야에 적합한 최적의 pH 및 이온 균형을 보장합니다.
PBS 솔루션의 응용 분야
PBS 용액은 생물학 연구의 다양한 응용 분야에 이상적입니다. 등장성 및 무독성 특성으로 인해 물질 희석 및 세포 용기 헹굼에 적합합니다. EDTA가 포함된 PBS 용액은 부착되거나 응집된 세포를 분리하는 데 효과적입니다. 그러나 아연과 같은 2가 금속은 침전을 일으킬 수 있으므로 PBS에 첨가해서는 안 됩니다. 이러한 경우 Good's 버퍼를 사용하는 것이 좋습니다. 또한, 당사의 PBS 솔루션은 SARS-CoV-2를 포함한 RNA 바이러스의 운반 및 보관을 위한 바이러스 운반 배지의 대안으로 사용할 수 있습니다.
품질 관리
멸균 필터링
보관 및 유효기간
빛으로부터 보호하여 +2°C ~ +25°C에서 보관하세요.
개봉 후에는 2°C~25°C에서 보관하고 24개월 이내에 사용하세요.
배송 조건
주변 온도
보관
어두운 곳에서 +2°C ~ +8°C로 냉장 보관하세요. 제품의 품질이 저하되므로 +37°C까지 얼리거나 자주 데우지 마세요.
37°C 이상으로 매체를 가열하거나 전자레인지와 같은 통제되지 않은 열원을 사용하지 마세요.
매체의 일부만 사용할 경우에는 필요한 양만큼 덜어서 실온으로 데운 후 사용하세요.
구성
카테고리
성분
농도(mg/L)
염류
염화칼륨
200
인산칼륨 모노염기성 무수물
200
염화나트륨
8000
인산 나트륨 이염기성 무수물
1150
처음에는 현탁 배양과 단층 배양 모두에서 인간 백혈병 세포의 성장을 지원하도록 설계된 RPMI 1640 배지는 연구자와 상업 공급업체의 수정을 통해 다양한 포유류 세포에 적합하도록 발전해 왔습니다. 이 배지는 HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, 성상세포 및 암종과 같은 세포주와 매우 잘 호환됩니다.
RPMI 1640 배지는 독특한 구성으로 인해 다른 세포 배양 배지와 차별화됩니다. 상당한 양의 인산염, 아미노산, 비타민이 함유되어 있습니다. 특히 이 배지에는 이글의 미니멀 에센셜 배지나 둘베코의 변형 이글 배지에는 없는 비오틴, 비타민 B12, PABA가 포함되어 있습니다. 또한 RPMI 1640 배지는 비타민 이노시톨과 콜린의 농도가 상당히 높습니다. 그러나 단백질, 지질 또는 성장 인자는 포함되어 있지 않습니다. 따라서 세포 성장을 위한 최적의 조건을 제공하기 위해 일반적으로 10%의 태아 소 혈청(FBS)을 보충해야 합니다.
RPMI 1640 배지의 완충 시스템은 중탄산나트륨에 의존하며 생리적으로 적절한 pH를 유지하기 위해 5-10%의 CO2 환경이 필요합니다. 환원제인 글루타치온이 포함되어 있어 이 배지는 다른 배지와 더욱 차별화됩니다.
품질 관리
멸균 여과
보관 및 유효기간
빛으로부터 보호하여 +2°C ~ +8°C에서 보관하세요.
개봉 후에는 4°C에서 보관하고 6~8주 이내에 사용하십시오.
배송 조건
주변 온도
관리
어두운 곳에서 +2°C~+8°C로 냉장 보관하세요. 제품 품질이 저하되므로 +37°C까지 얼리거나 자주 데우지 마세요.
37°C 이상으로 매체를 가열하거나 전자레인지와 같은 통제되지 않은 열원을 사용하지 마세요.
매체의 일부만 사용할 경우에는 필요한 양만큼 덜어서 실온으로 데운 후 사용하세요.
구성
카테고리
성분
농도(mg/L)
아미노산
글리신
10.00
L-알라닐-L-글루타민
434.40
L-아르기닌
200.00
L-아스파라긴 H2O
56.82
L-아스파르트산
20.00
L-시스틴 2HCl
65.20
L-글루탐산
20.00
L-히스티딘 HCl H2O
20.27
L-하이드록시-L-프롤린
20.00
L
- 이소류신
50.00
L-류신
50.00
L-라이신 HCl
40.00
L-메티오닌
15.00
L-페닐알라닌
15.00
L-프롤린
20.00
L-세린
30.00
L-트레오닌
20.00
L-트립토판
5.00
L-티로신 2Na 2H2O
28.83
L-발린
20.00
비타민
p-아미노 벤조산
1.00
D-비오틴
0.20
콜린 염화물
3.00
판토텐산 칼슘
0.25
엽산
1.00
미오 이노시톨
35.00
니코틴아마이드
1.00
피리독신 HCl
1.00
리보플라빈
0.20
티아민 HCl
1.00
비타민 B12
0.005
무기 염류
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
기타 성분
D-글루코스
2000.00
L-글루타치온 감소
1.00
페놀 레드 나트륨 염
5.30
이 독특한 배지는 Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)과 Ham's F-12(Ham's Nutrient Mixture F-12)를 정확한 1:1 비율로 혼합한 것입니다. 여기에 L-글루타민을 첨가함으로써 배지의 조성이 더욱 강화됩니다.
이글의 최소 필수 배지(EMEM)에서 파생된 DMEM은 기존 배지에 비해 아미노산과 비타민의 농도가 더 높습니다. 반면, 햄의 F-12는 햄의 F-10 배지를 기반으로 하여 필수 성분들을 상호 보완적으로 제공합니다.
최적의 세포 성장을 지원하기 위해, DMEM:햄스 F-12 배지에 일반적으로 5~10% 농도의 FBS를 보충하는 것이 일반적입니다. 이 배지에는 세포 발달에 필수적인 성장 호르몬, 지질 및 단백질이 부족하기 때문에 이러한 첨가가 필요합니다.
DMEM:Ham's F12는 pH 완충 시스템을 포함하고 있으며, 종종 pH 지시약인 페놀 레드가 첨가됩니다. DMEM:Ham's F12 또는 중탄산염 완충 시스템을 사용하는 배지에서 배양되는 세포는 적절한 pH 수준을 유지하기 위해 5~10%의 제어된 CO₂ 환경이 필요합니다.
품질 관리
무균 여과
보관 및 유통기한
+2°C ~ +8°C에서 빛을 피하여 보관하십시오.
개봉 후에는 4°C에서 보관하고 6~8주 이내에 사용하십시오.
배송 조건
주변 온도
보관
어두운 곳에서 +2°C ~ +8°C로 냉장 보관하십시오. 제품 품질이 저하될 수 있으므로 동결 및 +37°C로의 빈번한 가열을 피하십시오.
배지를 37°C 이상으로 가열하거나 전자레인지와 같은 제어되지 않은 열원을 사용하지 마십시오.
배지의 일부만 사용할 경우, 필요한 양을 덜어내어 사용 전 실온으로 데워 주십시오.
성분
분류
성분
농도 (mg/L)
아미노산
글리신
18.75
L-알라닌
4.45
L-아르기닌 염산염
147.50
L-아스파라긴 H₂O
7.50
L-아스파르트산
6.65
L-시스테인 염산염 수화물
17.56
L-시스틴 2 HCl
31.29
L-글루탐산
7.35
L-글루타민
365.00
L-히스티딘 HCl H₂O
31.48
L-이소류신
54.47
L-류신
59.05
L-라이신 염산염
91.25
L-메티오닌
17.24
L-페닐알라닌
35.48
L-프롤린
17.25
L-세린
26.25
L-트레오닌
53.45
L-트립토판
9.02
L-티로신 2Na·2H₂O
55.79
L-발린
52.85
비타민
D-비오틴
0.0035
콜린 클로라이드
8.98
D-판토텐산 칼슘
2.24
엽산
2.66
미오-이노시톨
12.60
니코틴아미드
2.02
피리독신 염산염
0.031
피리독살 염산염
2.00
리보플라빈
0.219
티아민 염산염
2.17
비타민 B12
0.68
무기염
CaCl2·2H2O
154.50
CuSO4·5H2O
0.0013
Fe(NO₃)₃·9H₂O
0.05
FeSO4·7H2O
0.417
KCl
311.80
MgCl2·6H2O
61.20
MgSO4·7H2O
100.00
NaCl
6996.00
NaHCO3
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄·2H₂O
70.87
ZnSO4 7 H2O
0.432
기타 성분
D-글루코스
3151.00
하이포크산틴
2.40
HEPES
3574.50
리놀레산
0.042
리포산
0.105
페놀 레드 나트륨염
8.63
푸트레신 2 HCl
0.081
피루브산 나트륨
55.00
티미딘
0.365
미디엄 199는 현장에서 다양한 용도로 사용할 수 있습니다. 적운-난모세포 복합체(COC)를 효과적으로 유지하고 난모세포의 시험관 내 성숙을 지원할 수 있습니다. 또한 독일 홀스타인 젖소에서 난자를 채취하는 동안 흡인 라인을 헹구는 데 사용됩니다. 또한, 배지 199는 쥐에서 유래한 심장 내피 세포 배양에 탁월한 배지로 사용됩니다. 이러한 응용 사례는 다양한 실험적 요구에 대한 배지 199의 다목적성과 적응성을 보여줍니다.
역사
1950년대에 개발된 배지 199는 조직 배양 배지의 획기적인 발전을 가져왔습니다. 이 배지가 도입되기 전에는 많은 배양 배지가 동물 유래 제품과 조직 추출물에 의존했습니다. 하지만 Morgan과 동료들은 세포 배양을 위한 영양 공급원을 완전히 정의함으로써 이 분야에 혁명을 일으켰습니다. 이들은 비타민, 아미노산 및 기타 인자의 다양한 조합을 포함하는 실험을 통해 배지 199의 탁월한 성장 촉진 특성을 발견했습니다.
품질 관리
20-25°C에서 pH = 7.2 +/
- 0.02.
각 로트는 무균 및 마이코플라즈마 및 박테리아 부재 테스트를 거쳤습니다.
유지 관리
어두운 곳에서 +2°C ~ +8°C로 냉장 보관하세요. 최대 +37°C까지 냉동 및 해동하면 제품의 품질이 저하됩니다.
매체를 37°C 이상으로 가열하거나 제어할 수 없는 열원(예: 전자레인지)을 사용하지 마세요.
매체의 일부만 사용할 경우에는 병에서 이 양을 꺼내 실온에서 데우세요.
기본 배지를 제외한 모든 배지의 유통기한은 제조일로부터 8주입니다.
구성
구성 성분
mg/L
무기염
염화칼슘 x 2H2O
264,92
질산철(III) x 9H2O
0,72
황산 마그네슘
97,67
염화칼륨
400,00
아세트산 나트륨 x 3H2O
82,95
염화나트륨
6,800.00
인산이수소나트륨 x H2O
140,00
기타 성분
아데닌 황산염
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
콜레스테롤
0,20
2'-데옥시리보스
0,50
D(+)-무수 포도당
1,000.00
글루타치온(적색)
0,05
구아닌 x HCl
0,30
히폭산틴
0,30
페놀 레드
10,00
D-리보오스
0,50
티민
0,30
트윈 80
4,90
우라실
0,30
크산틴
0,30
NaHCO3
2,200.00
아미노산
L-알라닌
25,00
L-아르기닌 x HCl
70,00
L-아스파르트산
30,00
L-시스테인 x HCl x H2O
0,10
L-시스틴
20,00
L-글루타민 안정
149,00
L-글루타민산
67,00
글리신
50,00
L-히스티딘 x HCl x H2O
21,88
L-하이드록시프롤린
10,00
L
- 이소류신
20,00
L-류신
60,00
L-라이신 x HCl
70,00
L-메티오닌
15,00
L-페닐알라닌
25,00
L-프롤린
40,00
L-세린
25,00
L-트레오닌
30,00
L-트립토판
10,00
L-티로신
40,00
L-발린
25,00
비타민
4-아미노 벤조산
0,05
아스코르브 산
0,05
D(+)-비오틴
0,01
칼시페롤
0,10
D-판토텐산 칼슘
0,01
염화 콜린
0,50
엽산
0,01
미오 이노시톨
0,05
메나 디오 네
0,01
니코틴산
0.025
니코틴 아미드
0.025
피리독살 x HCl
0.025
피리독솔 x HCl
0.025
리보플라빈
0,01
DL-α-토코페롤 인산 나트륨 염
0,01
티아민 x HCl
0,01
비타민 A 아세테이트
0,14
IMDM은 유르캇, COS-7, 대식세포 등 빠르게 증식하는 고밀도 세포 배양에 매우 적합합니다. 다양한 세포 배양 애플리케이션에 사용할 수 있는 IMDM의 다양한 변형은 배지 선택 도구를 사용하여 찾을 수 있습니다. 액체 배지는 모든 세포 배양 애플리케이션에 필수적인 영양소를 제공합니다. 당사의 각 고품질 세포 배양 배지는 처음에 발표된 공식에 따라 제조되거나 배양 배지의 일관된 성능과 안정성을 위해 필요한 수정에 따라 제조됩니다.
IMDM과 DMEM 비교
IMDM에는 질산철 대신 질산칼륨과 HEPES 및 피루브산나트륨이 포함되어 있습니다. IMDM의 추가 성분은 DMEM보다 특수 세포 유형 및 특정 응용 분야에 더 적합합니다.
IMDM과 RPMI 비교
IMDM과 RPMI는 PMA/이오노마이신 자극과 관련이 있을 수 있는 다른 제형을 가지고 있습니다. 한 가지 중요한 차이점은 Ca2+의 농도입니다. RPMI는 0.42mM Ca2+를 함유하고 있는 반면, IMDM은 1.49mM을 함유하고 있습니다.
품질 관리
20-25°C에서 pH = 7.2 +/
- 0.02.
각 로트는 무균 및 마이코플라즈마 및 박테리아 부재 테스트를 거쳤습니다.
유지 관리
어두운 곳에서 +2°C~+8°C로 냉장 보관하세요. 최대 +37°C까지 냉동 및 해동하면 제품의 품질이 저하됩니다.
매체를 37°C 이상으로 가열하거나 제어할 수 없는 열원(예: 전자레인지)을 사용하지 마세요.
매체의 일부만 사용할 경우에는 병에서 이 양을 꺼내 실온에서 데우세요.
기본 배지를 제외한 모든 배지의 유통기한은 제조일로부터 8주입니다.
구성
구성 성분
mg/L
무기염
염화칼슘 x 2 H2O
219,00
염화칼륨
330,00
질산 칼륨
0.076
황산 마그네슘 무수물
97,73
염화나트륨
4,505.00
무수 인산이 수소 나트륨
109,00
셀레 나이트 나트륨
0,02
기타 성분
D(+)-포도당 무수물
4,500.00
HEPES
5,958.00
피루브산 나트륨
110,00
페놀 레드
15,00
아미노산
L-알라닌
25,00
L-아르기닌 x HCl
84,00
L-아스파라긴 x H2O
25,00
L-아스파르트산
30,00
L-시스틴 x 2HCl
91,24
L-글루타민
584,00
L-글루타민산
75,00
글리신
30,00
L-히스티딘 x HCl x H2O
42,00
L-이소류신
104,80
L-류신
104,80
L-라이신 x HCl
146,20
L-메티오닌
30,00
L-페닐알라닌
66,00
L-프롤린
40,00
L-세린
42,00
L-트레오닌
95,20
L-트립토판
16,00
L-티로신 x 2Na
104,20
L-발린
93,60
비타민
D(+)-비오틴
0.013
판토텐산 칼슘
4,00
염화 콜린
4,00
엽산
4,00
미오 이노시톨
7,20
세포 배양 배지: 개요
생명과학 분야에서 가장 중요한 방법론 중 하나는 세포 배양입니다. “세포 배양”이란 동물이나 식물로부터 세포, 조직 또는 장기를 채취한 후, 그 생존 및/또는 성장에 유리한 인공 환경에 이식하는 과정을 의미합니다. 세포가 최적으로 발달하기 위해 필요한 기본적인 환경 요건은 제어된 온도, 세포 부착을 위한 기질, 적절한 배양액, 그리고 최적의 pH와 삼투압을 유지하는 인큐베이터입니다. 세포가 잠재력을 최대한 발휘하며 성장하기 위해서는 이러한 조건이 반드시 갖춰져야 합니다.
체외 배양을 위한 적절한 배지의 선택은 세포 배양 과정에서 가장 중요하면서도 필수적인 단계입니다. 배지(culture media)라고도 하는 성장 배지는 미생물, 세포, 또는 식물 수준의 유기체 발달을 촉진하도록 조제된 액체 또는 젤 형태입니다. 세포 배양에 사용되는 배지에는 대개 충분한 양의 에너지와 세포 주기를 조절하는 물질들이 포함되어 있습니다. 배지의 주요 성분으로는 아미노산, 비타민, 무기염, 포도당, 혈청 등이 있습니다. 혈청은 성장 인자, 호르몬, 부착 인자의 공급원 역할을 하기 때문에 배지에 첨가됩니다. 배지는 영양분을 공급할 뿐만 아니라 pH 및 삼투압 수치의 유지에도 기여합니다.
세포 배양에 사용되는 배지의 종류
인간 및 동물 세포 모두 인공 또는 합성 배지, 혹은 천연 성분이 보충된 완전 천연 배지에서 배양될 수 있습니다. 다음에서는 현재 사용 가능한 다양한 배지 유형에 대해 개괄적으로 설명하겠습니다.
천연 배지
천연 배지에는 자연 상태에 존재하는 생물학적 체액만 포함됩니다. 천연 배지는 매우 유용하며 다양한 동물 세포 유형을 배양하기에 용이합니다. 천연 배지를 구성하는 정확한 성분에 대한 이해 부족은 천연 배지를 사용하여 얻은 결과의 재현성이 낮은 주된 원인입니다.
인공 배지
인공 또는 합성 배지를 조제할 때는 영양소(유기 및 무기), 혈청 단백질, 탄수화물, 보조인자, 비타민, 염류는 물론 산소(O₂)와 이산화탄소(CO₂) 기체도 첨가됩니다 [1].
다음 기능 중 하나 이상을 충족하기 위해 다양한 유형의 인공 배지가 개발되었습니다: 1) 즉각적인 생존(정확한 pH 및 삼투압을 가진 균형 잡힌 염 용액). 2) 장기 생존(다양한 배합의 유기 화합물 및/또는 혈청이 보충된 균형 잡힌 염 용액). 3) 무기한 발달. 4) 특수 기능.
인공 배지는 크게 네 가지로 분류됩니다:
혈청 함유 배지
동물 세포 배양에 사용되는 배지에서 가장 흔히 발견되는 보충제는 소 태아 혈청이다. 이는 최상의 성장 조건을 확보하기 위해 저비용 보충제로 배양 배지에 첨가된다. 혈청은 불안정하거나 물에 녹지 않는 영양소, 호르몬 및 성장 인자, 프로테아제 억제제, 기타 물질의 운반체 또는 킬레이트제로 작용할 뿐만 아니라, 유해 분자를 결합하여 중화시키는 역할도 합니다.
무혈청 배지
배지에 혈청이 포함되면 여러 가지 단점이 있으며, 면역학 연구에서 해석상의 중대한 오류를 유발할 가능성이 있습니다 [2, 3]. 이에 따라 다양한 무혈청 배지가 개발되었습니다 [4, 5]. 이러한 배지는 일반적으로 특정 세포 유형의 배양을 지원하도록 특별히 조제되는데, 예를 들어 Thermo Fisher Scientific의 Knockout Serum Replacement 및 Knockout DMEM, 그리고 Stem Cell Technologies의 mTESR 배지[6]가 줄기세포[7] 배양용으로 사용된다.
또한, 이러한 배지에는 일반적으로 혈청을 통해 공급되는 정제된 성장 인자, 지단백질 및 기타 단백질이 정해진 양만큼 포함되어 있습니다[8]. 이러한 배지를 구성하는 성분들이 명확히 파악되어 있기 때문에, 이 배지들은 흔히 “정의된 배지(defined cultural media)”라고 불립니다.
화학적으로 정의된 배지
이러한 배지에는 어떠한 종류의 오염도 없는 초순도 무기 및 유기 성분이 포함됩니다. 또한 성장 인자와 같은 순수 단백질이 첨가될 수도 있습니다.
박테리아나 효모의 유전자 변형과 특정 지방산, 비타민, 콜레스테롤, 아미노산의 첨가를 통해 배지의 구성 성분이 생산됩니다 [9].
무단백 배지
무단백 배지는 단백질을 전혀 포함하지 않고 비단백 성분만 포함하는 배지를 말합니다. 혈청이 첨가된 배지와 비교할 때, 단백질이 첨가되지 않은 배지를 사용하면 세포 증식과 단백질 발현이 더욱 촉진되며, 다운스트림 공정에서 생성된 제품을 정제하기가 더 쉬워집니다 [10-12]. MEM 및 RPMI-1640과 같은 배지 조성물에는 단백질이 포함되어 있지 않습니다. 그러나 필요한 경우 단백질 보충제를 투여할 수 있습니다.
배양 배지 및 그 기본 구성 성분
시판되는 배양 배지는 분말 또는 액체 형태로 구입할 수 있으며, 종종 아미노산, 포도당, 염류, 비타민 및 기타 영양 보충제와 같은 다양한 영양소를 포함하고 있습니다.
이러한 성분에 대한 요구량은 세포주마다 다르며, 이러한 차이로 인해 배지의 조성이 매우 다양하게 존재합니다. 각 성분은 특정 기능을 담당하며, 이에 대해서는 다음 단락에서 설명하겠습니다:
완충 시스템
최적의 배양 조건을 유지하려면 pH를 조절해야 하며, 이는 대개 다음 두 가지 완충 시스템 중 하나를 통해 이루어집니다:
자연 완충 시스템
대기 중의 CO₂/H₂CO₃ 비율은 배지의 비율과 동일하여 자연적인 완충 기전을 형성합니다. 이러한 자연적인 완충 기전을 유지하기 위해서는 배양물을 5~10%의 CO₂가 포함된 공기 환경에서 관리해야 하며, 이는 대개 CO₂ 인큐베이터를 사용하여 달성됩니다. 자연 완충제를 사용할 때의 가장 큰 장점 중 하나는 비용이 저렴하고 안전하다는 점입니다.
HEPES
양쪽성 이온인 HEPES를 이용한 화학적 완충은 pH 7.2~7.4 범위에서 더 뛰어난 완충 능력을 보이며, 조절된 기체 환경이 필요하지 않습니다. 특정 세포 유형의 경우, HEPES를 과도하게 투여하면 해로울 수 있습니다. HEPES가 포함된 배지는 형광등의 광독성 영향에 훨씬 더 취약합니다 [13].
페놀 레드
pH 지시약인 페놀 레드는 시판되는 배양 배지에 종종 포함되어 있어 pH를 지속적으로 모니터링할 수 있게 해줍니다. 세포가 증식함에 따라 세포에서 생성된 대사 산물이 pH 변화를 일으키고, 이에 따라 배지의 색이 변합니다. 페놀 레드는 배지의 색상에 이중적인 영향을 미치며, 산성 pH에서는 노란색으로, 알칼리성 pH에서는 보라색으로 변합니다. 세포 배양에 최적의 값인 pH 7.4에서는 배지가 형광 빨간색으로 보입니다.
그러나 페놀 레드에는 몇 가지 단점이 있다. 첫째, 페놀 레드는 주로 에스트로겐을 비롯한 여러 스테로이드 호르몬의 작용을 모방할 수 있다[14]. 따라서 유방 조직과 같이 에스트로겐에 민감한 세포를 연구할 때는 페놀 레드가 포함되지 않은 배지를 사용하는 것이 권장된다. 여러 무혈청 배지 제형에서 페놀 레드의 존재로 인해 나트륨-칼륨 균형이 깨집니다. 배지에 혈청이나 소 뇌하수체 호르몬을 첨가하면 이러한 효과를 상쇄할 수 있습니다 [15]. 셋째, 유세포 분석 실험에서 페놀 레드의 존재로 인해 검출이 방해받습니다.
무기염
나트륨, 칼륨, 칼슘 이온과 같은 무기염을 함유한 배지는 삼투 평형을 유지하고 막 전위를 조절하는 데 도움을 줍니다.
아미노산
아미노산은 단백질의 기본 구성 요소이므로, 지금까지 고안된 모든 세포 배양 배지의 필수 구성 요소입니다. 세포는 특정 아미노산을 스스로 생성할 수 없기 때문에, 배양 배지에 필수 아미노산이 포함되는 것이 중요합니다. 아미노산은 세포 증식에 필수적이며, 아미노산의 농도에 따라 달성 가능한 최대 세포 밀도가 결정됩니다. 특히 필수 아미노산인 L-글루타민은 매우 중요합니다.
L-글루타민은 대사 과정의 2차 에너지원으로 기능하며, NAD, NADPH 및 뉴클레오티드 생성에 필요한 질소를 공급합니다. L-글루타민은 시간이 지남에 따라 세포가 이용할 수 없는 형태로 변하는 불안정한 아미노산이기 때문에 배지에 반드시 공급해야 합니다.
또한, 성장 과정에서 소모된 아미노산을 보충하기 위해 비필수 아미노산을 배지에 공급할 수 있습니다. 배지에 비필수 아미노산을 보충하면 세포의 성장이 촉진되고 생존율이 높아집니다.
탄수화물
당 형태의 탄수화물은 주요 에너지 공급원입니다. 많은 배지에는 일반적인 포도당과 갈락토스 외에도 말토스와 과당이 포함되어 있습니다.
단백질 및 펩타이드
알부민, 트랜스페린, 피브로넥틴은 가장 흔히 사용되는 단백질 및 펩타이드입니다. 이들은 특히 혈청을 포함하지 않는 배지에서 매우 중요합니다. 알부민, 트랜스페린, 아프로티닌, 페투인, 피브로넥틴 등은 단백질이 풍부한 공급원인 혈청에서 발견될 수 있는 단백질 중 일부입니다.
알부민은 혈액에서 주로 발견되는 단백질로, 물, 염분, 유리 지방산, 호르몬, 비타민 등 다양한 물질을 결합하여 서로 다른 장기 및 세포 간에 운반하는 기능을 합니다. 알부민은 화학 물질에 결합하는 능력이 있어, 세포 배양 배지에서 유해 화합물을 제거하는 데 효과적인 후보 물질입니다.
아프로티닌은 중성 및 산성 pH에서 안정적이며, 고온과 단백질 분해 효소에 의한 파괴에도 저항성이 있어 세포 배양 시스템에서 보호제로 사용됩니다. 이 물질은 트립신을 비롯한 여러 세린 프로테아제를 억제할 수 있습니다.
페투인은 성체 혈청에 비해 태아 및 신생아 동물의 혈청에서 더 높은 농도로 검출될 수 있는 당단백질입니다. 또한, 세린 프로테아제 억제제 역할을 합니다. 단백질인 피브로넥틴은 세포 접착 과정에서 필수적인 구성 요소입니다. 트랜스페린은 철분을 운반하는 단백질로, 세포막에 철분을 전달하는 역할을 담당합니다.
지방산 및 지질
이들은 혈청이 없는 무혈청 배지에서 중요한 역할을 합니다.
비타민
세포의 발달과 증식에 수많은 비타민이 필요합니다. 비타민은 세포 내에서 충분한 양으로 생성될 수 없기 때문에 조직 배양 시 영양 보충제로 필수적입니다.
세포 배양에서 혈청은 비타민의 주요 공급원이지만, 특정 세포 유형에 적합하도록 배지에 다양한 비타민을 첨가하기도 합니다. 가장 일반적으로는 B군 비타민이 성장 촉진을 위해 사용됩니다.
미량 원소
구리, 아연, 셀레늄 및 트리카르복실산 중간체와 같은 화학 원소는 미량 원소로 알려져 있습니다. 미량 원소는 일반적으로 혈청에 존재하는 성분을 대체하기 위해 혈청이 포함되지 않은 배지에 종종 첨가됩니다. 이러한 원소들은 건강한 세포 발달에 필요한 중요한 화학 성분입니다. 많은 생화학적 반응, 예를 들어 효소 활성은 특정 미량 영양소에 의존합니다.
배지 보충제
특정 세포주에 권장되는 완전 배양 배지에는 기본 배지와 혈청에는 없는 추가 성분이 필요합니다. 이러한 영양 보충제는 세포 성장과 적절한 대사 기능을 지원합니다.
호르몬, 성장 인자 및 신호 전달 분자는 특정 세포주의 적절한 증식에 필수적이지만, 항상 다음과 같은 주의 사항을 준수해야 합니다. 보충제를 첨가하면 완전한 배지의 삼투압이 변할 수 있으며, 이는 세포 발달을 저해할 수 있으므로, 보충제 첨가 후 항상 삼투압을 확인하는 것이 좋습니다. 대부분의 세포주에서 최적의 삼투압은 260~320 mOSM/kg 범위입니다.
항생제
항생제는 세포 성장에 필수적인 것은 아니지만, 박테리아 및 곰팡이 오염 물질의 증식을 억제하기 위해 종종 사용됩니다 [16]. 항생제는 마이코플라스마 및 내성 박테리아에 의한 오염을 은폐할 수 있으므로, 세포 배양에 항생제를 일상적으로 사용하는 것은 권장되지 않습니다 [17, 18].
또한, 항생제는 과민성 세포의 대사를 방해할 수 있습니다. MilliporeSigma와 Life Technologies에서 제조한 페니실린-스트렙토마이신 복합제가 흔히 사용됩니다. 플라스모신(Plasmocin)은 신경교종 세포주 TS603, TS516 및 BT260의 배양에 활용되어 왔으며[19], 마이코플라스마 오염을 제거하는 데 효과적인 것으로 밝혀졌습니다(20).
혈청
혈청에는 알부민, 성장 인자 및 성장 억제 인자가 모두 포함되어 있습니다. 혈청은 아미노산, 단백질, 비타민(특히 A, D, E, K와 같은 지용성 비타민), 탄수화물, 지질, 호르몬, 성장 인자, 미네랄 및 미량 원소를 공급하기 때문에 세포 배양 배지의 가장 중요한 구성 요소 중 하나입니다.
배양 세포의 성장을 촉진하기 위해 소 태아 및 송아지 유래 혈청이 자주 사용된다. 태아 혈청은 성장 인자가 풍부하여 세포 복제 및 민감한 세포의 배양에 적합하다. 성장 촉진 능력이 상대적으로 약한 송아지 혈청은 접촉 억제 실험에 활용된다. 일반적인 배양 배지에는 대개 2%에서 10%의 혈청이 포함됩니다. 배양 배지에 혈청을 첨가하는 것은 다음과 같은 목적을 갖습니다 [21]:
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혈청은 세포에 필수적인 영양소를 공급합니다(용액 상태 및 단백질에 결합된 형태 모두).
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혈청에는 성장 촉진 및 특화된 세포 활동에 관여하는 여러 성장 인자와 호르몬이 포함되어 있습니다.
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혈청에는 알부민 및 트랜스페린과 같이 다른 화학 물질을 세포 내로 운반하는 다양한 결합 단백질이 포함되어 있습니다. 예를 들어, 알부민은 지방, 비타민, 호르몬 등을 세포로 전달합니다.
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또한 기질에 대한 세포 접착력을 높이는 피브로넥틴과 같은 단백질을 제공합니다. 더불어, 분열 전 세포 확장을 돕는 확산 인자를 생성합니다.
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혈청은 세포 내 단백질 분해를 방지하는 프로테아제 억제제를 전달합니다.
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또한 Na+, K+, Zn2+, Fe2+와 같은 미네랄도 포함되어 있습니다.
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배지의 점도를 높여 현탁 배양 시 교반 과정에서 세포가 기계적 손상을 입지 않도록 보호합니다.
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또한 완충제 역할도 합니다.
참고 문헌
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