발행일: 2023년 | 최종 검토일: 2026년 5월

세포 배양 분리 기법

세포 배양 분리는 세포 배양 유지 관리에 있어 중요한 단계입니다. 이는 세포를 배양 표면에서 분리하여 재배양이나 수확을 가능하게 하는 과정입니다. 이 섹션에서는 효소가 포함되지 않은 분리 완충액을 사용하는 방법과 효소 시약을 사용하는 방법, 두 가지 주요 방법을 개요로 다룹니다.

무효소 세포 분해 완충액 사용

이 방법은 효소를 사용하지 않으면서도 세포의 무결성을 유지하는 온화한 방법입니다:

1. 준비
   • 세포에 충격을 주지 않도록 사용 전 모든 시약을 37°C로 예열하십시오.
2. 배지 제거:
   • 배양 용기에서 기존 배양액을 버립니다.
3. 세척
   • T75 플라스크 또는 100 mm 접시당 칼슘 및 마그네슘이 제거된 PBS 5 ml로 세포 단층을 세척합니다.
   • 실온에서 30~60초 동안 용기를 부드럽게 흔들어 줍니다.
   • 세척액을 흡입하여 버립니다.
   • 이 헹굼 단계를 한 번 더 반복합니다.
4. 세포 분해
   • 용기에 약 5ml의 효소가 포함되지 않은 세포 분해 버퍼를 넣습니다.
   • 실온에서 1~2분 동안 용기를 부드럽게 흔들어 준 다음, 현미경으로 세포의 분해 상태를 확인합니다.
   • 필요한 경우, 플라스크나 접시를 손에 가볍게 두드려 세포를 분리합니다.
   • 세포가 부착되어 있는 경우, 실온에서 2~5분 정도 더 두었다가 필요한 경우 분해 버퍼를 더 사용하여 다시 두드리십시오.
   • 세포가 분리되면, 최소 5ml의 완전 배양액을 첨가하여 분리 완충액을 중화시키고 세포를 재부유시킵니다.
5. 생존력 확인
   • 재배양 중 세포 생존율을 모니터링하여 90% 이상으로 유지되도록 합니다.

분리를 위한 다른 시약 사용

이 방법에서는 다양한 분리 시약을 사용할 수 있습니다:

1. 사용한 배지 제거
   • 배양 용기에서 사용된 배지를 버립니다.
2. 세포 세척
   • 칼슘과 마그네슘이 포함되지 않은 균형염용액으로 세포를 세척하거나 EDTA를 사용합니다.
   • 세척액을 세포 반대편 측면에 부드럽게 부은 후, 용기를 1~2분간 흔들어 준 다음 세척액을 버립니다.
3. 세포 분리
   • 배양 면적 25cm²당 선택한 분해 용액 2~3ml를 주입하여 세포층이 완전히 덮이도록 하십시오.
   • 용기를 37°C에서 배양하고 부드럽게 흔들어 줍니다. 세포주에 따라 다르지만, 일반적으로 5~15분 이내에 분리가 이루어집니다.
   • 잘 분리되지 않는 세포의 경우, 용기를 가볍게 두드리면 과정을 가속화할 수 있습니다.
   • 과다 노출 및 잠재적인 손상을 방지하기 위해 세포를 주의 깊게 관찰하십시오.
4. 세포 수확
   • 세포가 완전히 분리되면 용기를 똑바로 세워 세포가 용기 바닥에 모이도록 합니다.
   • 완전 배지를 추가한 다음, 세포층 위에 피펫을 사용하여 세포를 분산시키고 회수합니다.
   • 세포 수를 계수한 후, 재배양을 진행하십시오.

두 방법 모두에서 경험적 관찰을 통해 각 세포주의 최적 조건을 결정하는 것이 중요합니다. 이 과정은 세포 생존율을 유지해야 하며, 세포 배양 과정에서 생존율이 90%를 초과하는지 정기적으로 확인해야 합니다. 이러한 절차는 연구자가 자신의 세포주의 특정 요구 사항과 특성에 따라 적용할 수 있는 기초를 제공합니다.

부착 세포의 재배양 기법 개요

부착 세포의 효과적인 재배양을 위해서는 배양 용기에서 세포를 분리해야 합니다. 다양한 방법이 사용되며, 각 방법은 서로 다른 세포 유형과 조건에 적합합니다. 분리 방법을 선택할 때는 해당 세포주의 특정 요구 사항과 실험의 목적을 고려하는 것이 중요합니다. 재배양 시점에 90% 이상의 생존율을 목표로 세포 생존력을 정기적으로 모니터링하는 것은 배양의 지속적인 건강과 생산성을 유지하는 데 필수적입니다. 다음은 이러한 절차에 대한 개요입니다: