Protocollo 2: rianimazione di linee cellulari congelate per una vitalità e una crescita ottimali

Il corretto scongelamento e la rianimazione delle linee cellulari congelate sono fondamentali per mantenere la vitalità cellulare e il successo sperimentale. Questa guida completa illustra le fasi e le considerazioni essenziali per rianimare le cellule crioconservate della collezione di linee cellulari di Cytion.

Attrezzature e materiali necessari

Considerazioni sulla sicurezza

La rianimazione delle linee cellulari richiede un'attenta considerazione dei protocolli di biosicurezza. Quando si lavora con linee cellulari congelate, occorre tenere presente che le fiale conservate in azoto liquido possono occasionalmente esplodere al momento del riscaldamento a causa dell'azoto intrappolato. Maneggiare sempre le fiale congelate con i DPI appropriati e scongelare all'interno di una cabina di sicurezza certificata.

Protocollo passo per passo

Seguire attentamente questi passaggi per garantire un recupero e una vitalità ottimali delle cellule.

1. Preparazione pre-scongelamento

- Controllare la scheda tecnica della linea cellulare per i requisiti specifici
- Preriscaldare il terreno di coltura appropriato a 37°C
- Etichettare le fiasche con il nome della linea cellulare, il numero di passaggio e la data
- Preparare la cabina di sicurezza sterile

2. Recupero sicuro delle fiale

- Trasportare l'ampolla congelata dal deposito di azoto liquido in un contenitore appropriato
- Indossare uno schermo protettivo e guanti isolati
- Tenere l'ampolla con un fazzoletto imbevuto di alcool
- Allentare il tappo di un quarto di giro (per liberare l'N2 intrappolato) e riavvitarlo

3. Processo di scongelamento

- Scongelare rapidamente in bagno d'acqua a 37°C (1-2 minuti)
- Mantenere la presenza di piccoli cristalli di ghiaccio
- Mantenere il tappo sopra il livello dell'acqua
- Disinfettare l'esterno dell'ampolla con alcol al 70%

4. Trasferimento delle cellule

- Trasferire il contenuto in una provetta sterile
- Aggiungere lentamente 5 ml di terreno preriscaldato
- Facoltativo: Controllare la vitalità usando l'esclusione del blu di tripan
- Trasferire in una fiasca di coltura alla densità di semina raccomandata

5. Trattamento post-scongelamento

Per cellule aderenti:
- Regolare il volume del terreno in base alle dimensioni della fiasca
- Il primo cambio di terreno rimuove il crioprotettore residuo
- Controllare l'attaccamento dopo 4-6 ore

Per le cellule in sospensione:
- Centrifugare a 150 x g per 5 minuti
- Risospendere in terreno fresco
- Mantenere la densità cellulare raccomandata

Guida alla risoluzione dei problemi

Fasi del controllo di qualità

- Esaminare le cellule dopo 24 ore
- Verificare che la morfologia corrisponda alle caratteristiche previste
- Documentare il tasso di recupero e la vitalità
- Eseguire test di autenticazione, se necessario

Requisiti per la documentazione

Conservazione e riferimenti

Annotare in modo dettagliato il processo di rianimazione nel proprio quaderno di laboratorio. Includere i numeri di lotto dei terreni e dei supplementi utilizzati. Per una crescita ottimale delle cellule, fare riferimento alle linee guida specifiche per la coltura cellulare.

Conclusione

Il successo della rianimazione delle linee cellulari dipende da un'attenta preparazione, da una rapida esecuzione e da una tecnica adeguata. Il rispetto di questo protocollo garantisce una vitalità cellulare ottimale e la riproducibilità sperimentale. Per i requisiti specifici delle linee cellulari, consultare sempre il Certificato di analisi.

Per assistenza tecnica o richieste di informazioni su linee cellulari specifiche, contattare l'assistenza tecnica Cytion.