Cellule P19 - Ricerca sul carcinoma embrionale con le cellule P19
LaP19 è una linea cellulare di carcinoma embrionale murino. È ampiamente utilizzata nella ricerca biomedica, soprattutto per studiare la biologia dello sviluppo, la biologia delle cellule staminali, il differenziamento cellulare e lo screening dei farmaci. Poiché le cellule P19 hanno capacità di differenziazione, possono essere utili per studiare processi biologici complessi come la formazione dei tessuti e lo sviluppo embrionale precoce. In questo articolo discuteremo i fondamenti delle cellule P19 derivate dal topo.
Caratteristiche generali e origine delle cellule P19
Conoscere le caratteristiche generali e l'origine di una linea cellulare è essenziale prima di iniziare a lavorare con essa. Questa sezione tratterà quanto segue: Che cos'è la linea cellulare P19? Quali sono le dimensioni delle cellule P19? Qual è l'origine delle cellule P19?
- Le P19 sono un tipo di cellule pluripotenti di carcinoma embrionale originariamente ottenute da un teratocarcinoma sviluppato in un topo C3H/He. La linea cellulare è stata creata per la prima volta nel 1982 da McBurney e Rogers.
- Le cellule P19 possono crescere continuamente in un terreno di coltura integrato con siero. Possono essere differenziate in altri tipi di cellule quando vengono esposte a farmaci non tossici come l'acido retinoico e il dimetilsolfossido (DMSO) [1].
- Queste cellule di carcinoma murino possiedono una morfologia simile a quella epiteliale.
- La linea cellulare P19 ha un cariotipo maschile euploide (n=40; XY).
Informazioni sulla coltura delle cellule P19
La linea cellulare P19 è ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca grazie alle sue caratteristiche uniche. La sua coltura è facile e gestibile. In questa sezione sono riportate tutte le informazioni chiave necessarie per mantenere e coltivare la coltura delle cellule P19. Conosceremo: Qual è il tempo di raddoppiamento delle cellule P19? Come si coltiva la linea cellulare P19? La P19 è una linea cellulare aderente?
Punti chiave per la coltura delle cellule P19
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Tempo di raddoppiamento: |
Il tempo di raddoppiamento riportato per la linea cellulare P19 è di circa 2 o 3 giorni. |
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Aderenti o in sospensione: |
La linea cellulare di carcinoma embrionale P19 è aderente. |
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Rapporto di subcoltura: |
Le cellule P19 devono essere subcoltivate ogni 48 ore e si deve mantenere un rapporto di divisione di 1:10 per queste cellule. Le cellule aderenti vengono lavate con tampone fosfato salino 1 X e incubate con Accutase fino alla dissociazione delle cellule. Le cellule vengono aggiunte al terreno di coltura e raccolte mediante centrifugazione. Le cellule raccolte vengono accuratamente risospese e distribuite in nuove fiasche. |
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Terreno di coltura: |
Per la coltura delle cellule P19 si utilizza il terreno DMEM/Ham's F12 contenente 5% di siero fetale bovino, 3,1 g/L di glucosio, 1,6 mM di L-Glutamina, 1,0 mM di piruvato di sodio, 15 mM di HEPES e 1,2 g/L di NaHCO3. |
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Condizioni di crescita: |
Un incubatore umidificato a 37°C con un apporto di CO2 del 5% è essenziale per la crescita e la coltura della linea cellulare di carcinoma embrionale P19. |
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Conservazione: |
Le fiale di cellule P19 congelate devono essere conservate a una temperatura inferiore a -150°C in un congelatore o nella fase vapore dell'azoto liquido per mantenere la vitalità delle cellule a lungo termine. |
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Processo e terreno di congelamento: |
I terreni CM-1 o CM-ACF possono essere utilizzati per congelare le cellule P19 utilizzando un metodo di congelamento lento che protegge le cellule da qualsiasi shock e ne preserva la vitalità. |
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Processo di scongelamento: |
Le cellule P19 congelate possono essere scongelate in un bagno d'acqua a 37°C agitando rapidamente una fiala per 40-60 secondi. Le cellule vengono aggiunte al terreno fresco e centrifugate per rimuovere gli elementi del terreno congelato. Il pallet di cellule viene nuovamente risospeso e le cellule vengono versate nella nuova fiasca per la crescita. |
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Livello di biosicurezza: |
Per la linea cellulare P19 sono necessarie impostazioni di laboratorio di livello 1 di biosicurezza. |
Linea cellulare P19: Vantaggi e svantaggi
In questa sezione verranno discussi i vantaggi e gli svantaggi della linea cellulare P19.
Vantaggi
- Potenziale di differenziazione: Le cellule P19 possono differenziarsi in vari tipi di cellule, tra cui cardiomiociti, neuroni e cellule microgliali. Per la differenziazione richiedono farmaci non tossici, come l'acido retinoico e il dimetilsolfossido (DMSO). L'acido retinoico induce lo sviluppo di neuroni, microglia e astroglia, mentre il DMSO avvia lo sviluppo di cardiomiociti battenti e cellule muscolari lisce. Le cellule P19 sono quindi utili per studiare il differenziamento cellulare e i processi di sviluppo
- Sistema modello: La linea cellulare di carcinoma embrionale pluripotente P19 è un modello prezioso per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. I ricercatori utilizzano le cellule P19 per chiarire le vie di segnalazione cellulare e i meccanismi cellulari e molecolari coinvolti in questi processi
Svantaggi
- Origine murina: La P19 è una linea cellulare di carcinoma embrionale murino. Di conseguenza, i risultati degli studi condotti con queste cellule potrebbero non essere completamente traslabili alla biologia e ai processi umani
Applicazioni di ricerca delle cellule P19
Le cellule P19 hanno diverse applicazioni di ricerca grazie alla loro capacità di differenziazione e alla loro importanza per la biologia dello sviluppo e la ricerca sulle cellule staminali. Alcune delle importanti applicazioni di ricerca delle cellule di carcinoma embrionale P19 includono:
- Studi sulla differenziazione cellulare: Come sappiamo, le cellule P19 possono differenziarsi in neuroni, microgliali, cellule muscolari lisce e cardiomiociti; sono quindi ampiamente utilizzate per studiare i processi di differenziazione cellulare. Inoltre, aiutano la ricerca a studiare lo sviluppo neurale e cardiaco e i meccanismi sottostanti. Uno studio condotto nel 2018 ha rilevato che le specie reattive dell'ossigeno (ROS) dirigono la differenziazione delle cellule P19 in tipi cellulari specifici e impediscono l'induzione di altri [3]. Un altro studio ha esplorato il processo di differenziazione neurale mediato dall'acido retinoico e ha rilevato il coinvolgimento della via di segnalazione PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia dello sviluppo: Le cellule P19 sono un modello prezioso per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. Aiutano i ricercatori a comprendere processi biologici complessi, come la formazione dei tessuti durante lo sviluppo embrionale. La ricerca ha utilizzato le cellule P19 e ha studiato i fattori molecolari che contribuiscono alla formazione del difetto del setto ventricolare (VSD). I risultati hanno rivelato che un lungo RNA non codificante SNHG6 contribuisce al VSD regolando negativamente il miRNA-101 e attivando la via Wnt/β-catenina [5].
- Test farmacologico: La linea cellulare di carcinoma embrionale di topo P19 viene utilizzata anche per lo screening di potenziali candidati farmaci. Uno studio ha utilizzato neuroni differenziati di cellule P19 e ha analizzato gli effetti neuroprotettivi di inibizione dell'acetilcolinesterasi della L-Dopa sintetica e dell'estratto acquoso dei semi di Mucuna pruriens. I risultati hanno mostrato che l'estratto della pianta ha dato risultati promettenti rispetto alla L-Dopa [6].
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Cellule P19: Pubblicazioni di ricerca
Questa sezione di articoli tratta alcune interessanti pubblicazioni di ricerca sulle cellule P19.
Questo articolo è stato pubblicato su Oncology Reports nel 2017. Lo studio propone che gli ormoni sessuali ipofisari guidino l'adesione, la proliferazione e la migrazione delle linee cellulari di teratocarcinoma, comprese le cellule P19.
Questa pubblicazione sulla rivista Experimental & Molecular Medicine (2018) ha utilizzato cellule P19 e ha studiato la funzione dell'RNA lungo non codificante uc.4. I risultati hanno rivelato che uc.4 influenza la differenziazione cellulare attraverso la modulazione della via di segnalazione TGF beta.
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2018 sul Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Lo studio ha rilevato che l'estratto di tessuto cerebrale naturale e la coltura cellulare 3D possono accelerare la differenziazione delle cellule di carcinoma embrionale P19 in cellule neurali.
Questo studio è stato pubblicato sul Journal of Ethnopharmacology nel 2020. Lo studio propone che l'estratto di foglie di Cichorium intybus L. possa indurre la differenziazione delle cellule di carcinoma embrionale P19 in cellule β pancreatiche produttrici di insulina.
Questa ricerca è stata pubblicata su Molecules (2022). Questo studio ha esplorato gli effetti neuroprotettivi e di inibizione dell'acetilcolinesterasi dell'estratto di semi di Mucuna pruriens sui neuroni delle cellule P19.
Risorse per la linea cellulare P19: Protocolli, video e altro
Di seguito sono riportate alcune risorse sulle cellule P19.
- Protocollo di differenziazione neuronale delle cellule P19: Questo articolo contiene il protocollo di differenziazione neuronale delle cellule P19 e altre informazioni utili sulla differenziazione delle cellule P19.
- Trasfezione delle cellule P19: Questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo di trasfezione delle cellule P19.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule P19.
- Cellule P19: Questo sito web contiene tutte le informazioni utili sulla linea cellulare P19, comprese le condizioni di coltura, i mezzi di coltura delle cellule P19, la divisione delle cellule e molto altro.
Esplorazione della linea cellulare P19: Domande frequenti
Riferimenti
- McBurney, M.W., Cellule di carcinoma embrionale P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., Linea cellulare di carcinoma embrionale P19: Un modello per studiare le interazioni tra geni e ambiente. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey e G. Rödel, I ROS mitocondriali dirigono il differenziamento delle cellule pluripotenti murine P19. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., L'acido all-trans-retinoide induce il differenziamento delle cellule P19 in neuroni coinvolti nella via di segnalazione PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., L'RNA non codificante lungo SNHG6 contribuisce alla formazione del difetto del setto ventricolare attraverso la regolazione negativa del miR-101 e l'attivazione della via Wnt/β-catenina. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., L'estratto acquoso di semi di Mucuna pruriens ha migliorato gli effetti neuroprotettivi e di inibizione dell'acetilcolinesterasi rispetto alla L-dopa sintetica. Molecole, 2022. 27(10): p. 3131.