Cellule Hep3B: Ricerca e scoperta sul carcinoma epatocellulare
HEP3B è una linea cellulare immortalizzata di carcinoma epatocitario di derivazione umana. È ampiamente utilizzata nella ricerca sull'epatotossicità e sul metabolismo dei farmaci. L'efficienza di trasfezione delle HEP3B è notevole; pertanto, queste cellule sono comunemente utilizzate per studiare lo sviluppo, la progressione e gli interventi terapeutici del cancro al fegato. Questo articolo contiene tutte le informazioni necessarie sulla linea cellulare HEP3B per aiutarvi a lavorare con essa. Include principalmente:
- Caratteristiche generali e origine delle cellule HEP3B
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare HEP3B
- Linea cellulare HEP3B: Vantaggi e limiti
- Applicazioni delle cellule HEP3B nella ricerca
- Pubblicazioni sulla linea cellulare HEP3B
- Risorse per la linea cellulare HEP3B: Protocolli, video e altro
1.caratteristiche generali e origine delle cellule HEP3B
Le principali informazioni necessarie su una linea cellulare sono la sua origine e le sue caratteristiche generali. Possono aiutarvi a decidere il suo utilizzo nella vostra ricerca e a gestirla al meglio. Questa sezione dell'articolo contiene tutte le informazioni essenziali sull'origine e le caratteristiche di HEP3B. Qui imparerete: Che cos'è la linea cellulare Hep 3B? Qual è l'origine delle cellule Hep3B? Qual è la morfologia delle cellule HEP3B?
- L'HEP3B, una linea cellulare continua di epatoma umano, ha avuto origine dal tessuto epatico di un bambino africano di 8 anni affetto da carcinoma epatocellulare (HCC). È stata creata da Aden e colleghi nel 1979 presso il laboratorio di Barbara B. Knowles, Wistar Institute, Philadelphia, USA [1].
- Le cellule HEP3B presentano un'integrazione del genoma del virus dell'epatite B (HBV) nel proprio cromosoma.
- Queste cellule di carcinoma epatocitario presentano una morfologia epiteliale.
- Le cellule HEP3B hanno un numero modale di cromosomi pari a 60. A differenza di HepG2, non possiedono un cromosoma 1 riarrangiato.
Qual è la differenza tra HepG2 e Hep3B?
HepG2 e HEP3B differiscono per il numero di cromosomi per cellula. L'HEP3B contiene 60 cromosomi, mentre le cellule dell'HepG2 hanno in media 55 cromosomi. Inoltre, HepG2 non è tumorigenico e negativo all'epatite B, mentre HEP3B è tumorigenico e positivo all'HBV.
2.informazioni sulla coltura della linea cellulare HEP3B
La conoscenza delle informazioni sulla coltura di una linea cellulare può renderla più semplice. Questa sezione copre tutti i punti chiave per la coltura della linea cellulare HEP3B HBV, tra cui: Qual è il tempo di raddoppiamento delle cellule Hep3B? Quali sono le condizioni di coltura delle HEP3B? Come si coltivano le cellule HEP3B HCC?
Punti chiave per la coltura delle cellule HEP3B
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Tempo di raddoppio: |
Il tempo di raddoppiamento delle cellule HEP3B è di circa 36 ore. |
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Aderenti o in sospensione: |
Questa linea cellulare di epatoma è aderente. |
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Rapporto di divisione: |
Le cellule HEP3B vengono subcoltivate in un rapporto compreso tra 1:2 e 1:4. Le cellule HEP3B aderenti vengono risciacquate con 1 x PBS e poi incubate con la soluzione di dissociazione Accutase. Dopo 8-10 minuti, viene aggiunto del terreno fresco e le cellule vengono centrifugate. Le cellule raccolte vengono poi accuratamente risospese e versate in fiasche contenenti terreno di coltura al rapporto di divisione raccomandato. |
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Terreno di coltura: |
Per la coltura delle cellule HEP3B si utilizza un terreno EMEM contenente il 10% di FBS, 2,2 g/L di NaHCO3, 2 mM di L-Glutamina e la soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS). |
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Condizioni di crescita: |
Le cellule HEP3B sono coltivate in un incubatore umidificato a 37°C con un apporto continuo di CO2 al 5%. |
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Conservazione: |
Le cellule HEP3B congelate sono conservate a una temperatura inferiore a -150°C in un congelatore elettrico o nella fase vapore dell'azoto liquido. |
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Processo e terreno di congelamento: |
Il terreno di congelamento consigliato per le cellule HEP3B è CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate con un processo di congelamento lento che consente una diminuzione della temperatura di solo 1°C al minuto per proteggere la vitalità delle cellule. |
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Processo di scongelamento: |
Le cellule congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua preimpostato a 37°C per 40-60 secondi. Successivamente, queste cellule vengono aggiunte al terreno di crescita fresco e centrifugate per rimuovere gli elementi del terreno di congelamento. Le cellule raccolte vengono risospese e distribuite in nuove fiasche per la crescita. |
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Livello di biosicurezza: |
Per la coltura delle cellule HEP3B è necessario un laboratorio di livello di biosicurezza 1. |
3.linea cellulare HEP3B: Vantaggi e limiti
HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare ampiamente utilizzata. Questa sezione si concentra su alcuni vantaggi e limiti di queste cellule di epatoma.
Vantaggi
I principali vantaggi delle cellule HEP3B sono:
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Facilità di coltura |
Le cellule HEP3B non hanno requisiti di coltura cellulare complessi, il che le rende facili da gestire e mantenere in un laboratorio di ricerca. Ciò semplifica le procedure sperimentali. |
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Elevata efficienza di trasfezione |
Le cellule HEP3B presentano una notevole efficienza di trasfezione, che le rende ampiamente utilizzate nella manipolazione genetica e negli studi sull'espressione genica. |
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Tumorigenicità |
HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare tumorigenica in grado di formare tumori quando viene iniettata in un topo immunocompromesso. Ciò consente di studiare la progressione e lo sviluppo del cancro utilizzando modelli di xenotrapianto HEP3B. |
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Stato P53 delle HEP3B |
Le cellule HEP3B possiedono una mutazione del gene P53 simile a quella del carcinoma epatocellulare (HCC) e di altri tipi di cancro, il che le rende rilevanti per lo studio degli effetti della mutazione P53 sulla crescita, lo sviluppo e la progressione del cancro. |
Limitazioni
Le limitazioni associate alla linea cellulare HEP3B sono:
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Modello cellulare in vitro |
La linea cellulare HEP3B serve come modello in vitro di cellule di carcinoma epatocellulare (HCC). Tuttavia, potrebbe non rappresentare appieno la complessità del carcinoma epatocellulare presente negli organismi viventi. Di conseguenza, i risultati sperimentali in vitro possono differire da quelli osservati in vivo. |
4.applicazioni delle cellule HEP3B nella ricerca
La linea cellulare HEP3B offre diverse applicazioni nella ricerca biomedica. Alcune delle principali applicazioni di ricerca delle cellule HEP3B includono:
- Biologia del cancro: HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare umano. È un modello cellulare prezioso per studiare i meccanismi cellulari e molecolari alla base dello sviluppo e della progressione del carcinoma epatocellulare. I ricercatori utilizzano queste cellule per studiare le mutazioni genetiche, i processi cellulari e le vie di segnalazione cellulare associate al cancro del fegato. Ad esempio, uno studio ha utilizzato cellule HEP3B e ha scoperto che il microRNA-223-3p regola i componenti dell'inflammasoma NLRP3, inibisce la proliferazione e aumenta l'apoptosi delle cellule di epatocarcinoma HEP3B [2].
- Screening e sviluppo di farmaci: La linea cellulare HEP3B viene utilizzata anche per testare, esaminare e sviluppare nuovi terapeutici contro il carcinoma epatico. Inoltre, viene utilizzata per valutare la tossicità e l'efficacia di diversi farmaci e trattamenti antitumorali. I ricercatori hanno anche utilizzato queste cellule di epatoma per studiare il metabolismo dei farmaci. I ricercatori hanno utilizzato cellule HEP3B e hanno valutato il potenziale citotossico dell'estratto vegetale di Cotinus coggygria sulle cellule di carcinoma epatocitario HEP3B [3].
- Infezioni virali: La HEP3B è una linea cellulare positiva al virus dell'epatite B; pertanto, viene impiegata per studiare le infezioni virali che possono portare allo sviluppo del cancro al fegato, ossia HBV e HCV. Ciò può aiutare a comprendere meglio le infezioni virali e a sviluppare potenziali trattamenti antivirali. Ad esempio, uno studio ha utilizzato cellule di cancro epatocitario HEP3B e ha analizzato l'importanza dell'ubiquitinazione per la propagazione del virus dell'epatite C. I risultati hanno suggerito che l'ubiquitinazione è un fattore di rischio per la propagazione del virus. I risultati hanno suggerito che la proteasi ubiquitina-specifica 15 (USP15) è coinvolta nella propagazione dell'HCV attraverso la regolazione di funzioni specifiche dell'epatocita, tra cui la formazione di gocce lipidiche e la traduzione dell'HCV RNA [4].
5.pubblicazioni sulla linea cellulare HEP3B
In questa sezione dell'articolo sono riportate alcune interessanti pubblicazioni di ricerca sulle cellule HEP3B.
Questa pubblicazione su Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) propone che lo stress del reticolo endoplasmatico indotto da un composto di luteolina possa esercitare effetti antitumorali nelle cellule HEP3B P53-null in modo indipendente da P53.
Questo studio pubblicato su Archiv der Pharmazie (2021) propone un triterpenoide pentaciclico, il lupeolo, come potenziale agente antitumorale contro le cellule HEP3B.
Questo articolo è stato pubblicato su Molecular Medicine Reports (2017). I risultati dello studio affermano che l'estratto etanolico di Cnidium monnieri (L.) Cusson induce la morte cellulare (apoptosi) e l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule di epatocarcinoma HepG2 e HEP3B attraverso la regolazione della via di segnalazione p53 e Akt/GSK-3β.
Questa ricerca pubblicata su Biomolecules and Therapeutics (2020) ha proposto che l'auranofina mostri un'attività sinergica e promuova l'apoptosi mediata dal sulforafano nelle cellule HEP3B attraverso l'attivazione della via PI3K/AKT.
Questo articolo di ricerca pubblicato su BioFactors (2023) propone che l'RNA-0072309 circolare eserciti effetti antitumorali nelle cellule di carcinoma epatocellulare HEP3B attraverso il bersaglio del miRNA-665.
6.risorse per la linea cellulare HEP3B: Protocolli, video e altro
Di seguito sono riportate alcune risorse disponibili sulle cellule HEP3B:
- Trasfezione di HEP3B: Questo video spiega il protocollo di trasfezione delle cellule HEP3B.
- Efficienza di trasfezione delle HEP3B: Questo link vi aiuterà a conoscere la composizione del terreno DMEM HEP3B, il passaggio delle cellule e il protocollo di trasfezione per le cellule HEP3B. Inoltre, fornisce informazioni per ottimizzare il reagente HEP3B lipofectamina 3000 nel vostro protocollo di trasfezione.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule HEP3B:
- Condizioni di coltura HEP3B: Questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo per la gestione e il mantenimento delle colture Huh7 e HEP3B.
- Cellule HEP3B: Questo sito web contiene molte informazioni sulle cellule HEP3B, compresi i terreni di coltura HEP3B, il protocollo per la divisione delle cellule, lo scongelamento e la gestione delle colture proliferative e crioconservate.
Riferimenti
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origin and prop-erties of hepatocellular carcinoma cell lines. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., Il miRNA-223-3p regola l'NLRP3 per promuovere l'apoptosi e inibire la proliferazione delle cellule hep3B. Medicina sperimentale e terapeutica, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. e S. Selen-Isbilir, Effetto citotossico dell'estratto di Cotinus coggygria sulla linea cellulare tumorale Hep3B. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 partecipa alla propagazione del virus dell'epatite C attraverso la regolazione della traduzione dell'RNA virale e la formazione di gocce lipidiche. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.