Cellule Hep3B: ricerca e scoperte sul carcinoma epatocellulare
HEP3B è una linea cellulare immortalizzata derivata da epatociti umani. È ampiamente utilizzata nella ricerca sull'epatotossicità e sul metabolismo dei farmaci. L'efficienza di trasfezione di HEP3B è notevole; pertanto, queste cellule sono comunemente impiegate per studiare lo sviluppo, la progressione e gli interventi terapeutici del cancro al fegato. Questo articolo copre tutte le informazioni necessarie sulla linea cellulare HEP3B per assistervi nel lavorarci. Principalmente, includerà:
- Terreno di coltura
- Per la coltura delle cellule HEP3B si utilizza un terreno EMEM contenente 10% di FBS, 2,2 g/L di NaHCO3, 2 mM di L-glutammina e soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS).
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio delle cellule HEP3B è di circa 36 ore.
- Tipo di crescita
- Questa linea cellulare di epatoma è aderente.
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina HEP3B
- Caratteristiche generali e origine delle cellule HEP3B
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare HEP3B
- Linea cellulare HEP3B: Vantaggi e limiti
- Applicazioni delle cellule HEP3B nella ricerca
- Pubblicazioni sulla linea cellulare HEP3B
- Risorse per la linea cellulare HEP3B: protocolli, video e altro
- Caratteristiche generali e origine delle cellule HEP3B
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare HEP3B
- Linea cellulare HEP3B: vantaggi e limiti
- Applicazioni delle cellule HEP3B nella ricerca
- 5. Pubblicazioni sulla linea cellulare HEP3B
- Risorse per la linea cellulare HEP3B: protocolli, video e altro
- Domande frequenti
Caratteristiche generali e origine delle cellule HEP3B
Le informazioni principali di cui avete bisogno su una linea cellulare sono la sua origine e le caratteristiche generali. Queste possono aiutarvi a decidere il suo utilizzo nella vostra ricerca e a gestirla. Questa sezione dell'articolo copre tutte le informazioni essenziali sull'origine e le caratteristiche delle cellule HEP3B. Qui scoprirai: Che cos'è la linea cellulare Hep 3B? Qual è l'origine delle cellule Hep3B? Qual è la morfologia delle cellule HEP3B?
- HEP3B, una linea cellulare continua di epatoma umano, ha avuto origine dal tessuto epatico di un bambino africano di 8 anni affetto da carcinoma epatocellulare (HCC). È stata fondata da Aden e colleghi nel 1979 presso il laboratorio di Barbara B. Knowles, Wistar Institute, Filadelfia, USA [1].
- Le cellule HEP3B presentano un'integrazione del genoma del virus dell'epatite B (HBV) nel proprio cromosoma.
- Queste cellule di carcinoma epatocellulare presentano una morfologia epiteliale.
- Le cellule HEP3B hanno un numero cromosomico modale di 60. A differenza delle HepG2, non presentano un cromosoma 1 riarrangiato.
Qual è la differenza tra HepG2 e Hep3B?
HepG2 e HEP3B differiscono per il numero di cromosomi per cellula. HEP3B contiene 60 cromosomi, mentre le cellule HepG2 hanno una media di 55 cromosomi. Inoltre, HepG2 è non tumorigenico e negativo all'epatite B, mentre HEP3B è tumorigenico e positivo all'HBV.
Informazioni sulla coltura della linea cellulare HEP3B
Conoscere le informazioni sulla coltura di una linea cellulare può semplificarne l'utilizzo. Questa sezione tratta tutti i punti chiave per la coltura della linea cellulare HEP3B HBV, tra cui: Qual è il tempo di raddoppio delle cellule Hep3B? Quali sono le condizioni di coltura delle cellule HEP3B? Come si coltivano le cellule HEP3B HCC?
Punti chiave per la coltura delle cellule HEP3B
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio delle cellule HEP3B è di circa 36 ore.
Aderenzi o in sospensione:
Questa linea cellulare di epatoma è aderente.
Rapporto di divisione:
Le cellule HEP3B vengono subcoltivate con un rapporto compreso tra 1:2 e 1:4. Le cellule HEP3B aderenti vengono risciacquate con 1 x PBS e quindi incubate con la soluzione di dissociazione Accutase. Dopo 8-10 minuti, si aggiunge terreno fresco e le cellule vengono centrifugate. Le cellule raccolte vengono quindi risospese con cura e versate in fiasche contenenti terreno di coltura al rapporto di divisione raccomandato.
Terreno di crescita:
Per la coltura delle cellule HEP3B si utilizza un terreno EMEM contenente 10% di FBS, 2,2 g/L di NaHCO3, 2 mM di L-glutammina e soluzione salina bilanciata di Earle (EBSS).
Condizioni di crescita:
Le cellule HEP3B vengono coltivate in un incubatore umidificato a 37 °C con un apporto continuo di CO2 al 5%.
Conservazione:
Le cellule HEP3B congelate vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore elettrico o nella fase vapore dell'azoto liquido.
Processo di congelamento e mezzo:
Il mezzo di congelamento raccomandato per le cellule HEP3B è CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate utilizzando un processo di congelamento lento che consente solo un abbassamento della temperatura di 1 °C al minuto per proteggere la vitalità cellulare.
Processo di scongelamento:
Le cellule congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua preimpostato a 37 °C per 40-60 secondi. Successivamente, queste cellule vengono aggiunte al terreno di coltura fresco e centrifugate per rimuovere gli elementi del mezzo di congelamento. Le cellule raccolte vengono risospese e distribuite in nuove fiasche per la crescita.
Livello di biosicurezza:
Per la coltura delle cellule HEP3B è necessario un laboratorio di livello di biosicurezza 1.
Linea cellulare HEP3B: vantaggi e limiti
HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare ampiamente utilizzata. Questa sezione si concentrerà su alcuni vantaggi e limiti chiave di queste cellule di epatoma.
Vantaggi
I principali vantaggi delle cellule HEP3B sono:
Facili da coltivare
Le cellule HEP3B non hanno requisiti di coltura particolarmente complessi, il che le rende facili da gestire e mantenere in un laboratorio di ricerca. Ciò semplifica le procedure sperimentali.
Elevata efficienza di trasfezione
Le cellule HEP3B mostrano una notevole efficienza di trasfezione, il che le rende ampiamente utilizzate nella manipolazione genetica e negli studi relativi all'espressione genica.
Tumorigenicità
HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare tumorigenica in grado di formare tumori quando iniettata in un topo immunocompromesso. Ciò aiuta a studiare la progressione e lo sviluppo del cancro utilizzando modelli di xenotrapianto HEP3B.
Stato P53 delle cellule HEP3B
Le cellule HEP3B presentano una mutazione del gene P53 simile a quella del carcinoma epatocellulare (HCC) e di altri tumori, rendendole rilevanti per lo studio degli effetti della mutazione di P53 sulla crescita, lo sviluppo e la progressione del cancro.
Limiti
La limitazione associata alla linea cellulare HEP3B è:
Modello cellulare in vitro
La linea cellulare HEP3B funge da modello in vitro delle cellule del carcinoma epatocellulare (HCC). Tuttavia, potrebbe non rappresentare appieno la complessità dell'HCC presente negli organismi viventi. Di conseguenza, i risultati sperimentali in vitro potrebbero differire da quelli osservati in vivo.
Applicazioni delle cellule HEP3B nella ricerca
La linea cellulare HEP3B offre diverse applicazioni nella ricerca biomedica. Alcune delle principali applicazioni di ricerca delle cellule HEP3B includono:
- Biologia del cancro: HEP3B è una linea cellulare di carcinoma epatocellulare umano. Si tratta di un modello cellulare inestimabile per studiare i meccanismi cellulari e molecolari alla base dello sviluppo e della progressione dell'HCC. I ricercatori utilizzano queste cellule per studiare le mutazioni genetiche, i processi cellulari e le vie di segnalazione cellulare associate al cancro al fegato. Ad esempio, uno studio ha utilizzato le cellule HEP3B e ha scoperto che il microRNA-223-3p regola i componenti dell'inflammasoma NLRP3, inibisce la proliferazione e potenzia l'apoptosi delle cellule di carcinoma epatocellulare HEP3B [2].
- Screening e sviluppo di farmaci: la linea cellulare HEP3B viene utilizzata anche per testare, selezionare e sviluppare nuove terapie contro il carcinoma epatico. Inoltre, viene impiegata per valutare la tossicità e l'efficacia di diversi farmaci e trattamenti antitumorali. I ricercatori hanno utilizzato queste cellule di epatoma anche per studiare il metabolismo dei farmaci. I ricercatori hanno utilizzato le cellule HEP3B e hanno valutato il potenziale citotossico dell'estratto della pianta Cotinus coggygria sulle cellule di carcinoma epatocellulare HEP3B [3].
- Infezioni virali: HEP3B è una linea cellulare positiva al virus dell'epatite B; pertanto, viene impiegata per studiare le infezioni virali che possono portare allo sviluppo del cancro al fegato, ovvero HBV e HCV. Ciò può aiutare a comprendere meglio le infezioni virali e a sviluppare potenziali trattamenti antivirali. Ad esempio, uno studio ha utilizzato cellule di carcinoma epatocitario HEP3B e ha indagato l'importanza dell'ubiquitinazione per la propagazione del virus dell'epatite C. I risultati hanno suggerito che la proteasi 15 specifica per l'ubiquitina (USP15) è coinvolta nella propagazione dell'HCV attraverso la regolazione di funzioni specifiche degli epatociti, tra cui la formazione di goccioline lipidiche e la traduzione dell'RNA dell'HCV [4].
5. Pubblicazioni sulla linea cellulare HEP3B
Questa sezione dell'articolo tratterà alcune interessanti pubblicazioni di ricerca sulle cellule HEP3B.
Questa pubblicazione su Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) ha ipotizzato che lo stress del reticolo endoplasmatico indotto dal composto luteolina possa esercitare effetti antitumorali nelle cellule HEP3B P53-null in modo indipendente da P53.
Questo studio pubblicato su Archiv der Pharmazie (2021) ha proposto un triterpenoide pentaciclico, il lupeolo, come potenziale agente antitumorale contro le cellule HEP3B.
Questo articolo è stato pubblicato su Molecular Medicine Reports (2017). I risultati dello studio indicano che l'estratto etanolico di Cnidium monnieri (L.) Cusson induce la morte cellulare (apoptosi) e l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule di carcinoma epatocellulare HepG2 e HEP3B attraverso la regolazione della via di segnalazione p53 e Akt/GSK-3β.
Questa ricerca, pubblicata su Biomolecules and Therapeutics (2020), ha suggerito che l'auranofin mostra un'attività sinergica e promuove l'apoptosi mediata dal sulforafano delle cellule HEP3B tramite l'attivazione della via PI3K/AKT.
L'RNA circolare-0072309 ha effetti antitumorali nella linea cellulare Hep3B agendo sul microRNA-665
Questo articolo di ricerca pubblicato su BioFactors (2023) ha suggerito che l'RNA circolare-0072309 esercita effetti antitumorali nelle cellule di carcinoma epatocellulare HEP3B agendo sul miRNA-665.
Risorse per la linea cellulare HEP3B: protocolli, video e altro
Di seguito sono riportate alcune risorse disponibili sulle cellule HEP3B:
- Trasfezione HEP3B: questo video illustra il protocollo di trasfezione per le cellule HEP3B.
- Efficienza della trasfezione delle cellule HEP3B: questo link vi aiuterà a conoscere la composizione del terreno di coltura DMEM per le cellule HEP3B, il passaggio cellulare e il protocollo di trasfezione per le cellule HEP3B. Inoltre, fornisce informazioni per ottimizzare l'uso del reagente Lipofectamine 3000 nel vostro protocollo di trasfezione.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule HEP3B:
- Condizioni di coltura delle cellule HEP3B: questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo per la manipolazione e il mantenimento delle colture di Huh7 e HEP3B.
- Cellule HEP3B: questo sito web offre numerose informazioni sulle cellule HEP3B, compresi i terreni di coltura HEP3B, il protocollo per la divisione cellulare, lo scongelamento e la gestione delle colture proliferative e crioconservate.
Riferimenti
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origine e proprietà delle linee cellulari di carcinoma epatocellulare. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p regola NLRP3 per promuovere l'apoptosi e inibire la proliferazione delle cellule Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. e S. Selen-Isbilir, Effetto citotossico dell'estratto di Cotinus coggygria sulla linea cellulare tumorale Hep3B. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., L'USP15 partecipa alla propagazione del virus dell'epatite C attraverso la regolazione della traduzione dell'RNA virale e la formazione di goccioline lipidiche. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.