Cellule HK-2 - Analisi della funzione e della patologia renale con le cellule HK-2 nella ricerca renale
LaHK-2 è una linea cellulare epiteliale immortalizzata del rene umano comunemente utilizzata nella ricerca tossicologica. I ricercatori valutano gli effetti delle tossine ambientali su queste cellule renali. Inoltre, utilizzano le cellule HK-2 per studiare le malattie renali e i loro meccanismi di base.
Questo articolo illustra quasi tutte le informazioni essenziali sulle cellule HK-2, comprese le loro caratteristiche generali, le condizioni di coltura cellulare, le applicazioni di ricerca e molto altro ancora. Si apprenderà quanto segue:
- Cellule HK-2: Origine e caratteristiche generali
- Linea cellulare HK-2: Informazioni sulla coltura
- Vantaggi e limiti delle cellule HK-2
- Applicazioni della linea cellulare HK-2 nella ricerca
- Cellule HK-2: Pubblicazioni di ricerca
- Risorse per la linea cellulare HK-2: Protocolli, video e altro
1.cellule HK-2: Origine e caratteristiche generali
L'origine e le caratteristiche generali di una linea cellulare sono fondamentali per una corretta manipolazione, manutenzione e utilizzo di una linea cellulare. Questa sezione dell'articolo tratterà quanto segue: Cosa sono le cellule HK-2 del rene umano 2? Qual è il ruolo delle HK2? Cosa sono le cellule HK2? Qual è l'origine della linea cellulare HK-2? Quali sono le dimensioni e la morfologia delle cellule HK-2?
- Le cellule del rene umano 2 (HK-2) sono un tipo di cellule tubulari prossimali provenienti dal tessuto renale normale di un adulto europeo. La linea cellulare HK-2 è stata creata trasfettando le cellule renali con un retrovirus ricombinante comprendente i geni E6/E7 del papillomavirus umano 16. Questo esperimento ha provocato l'immortalizzazione e la stabilizzazione delle cellule renali. Questo esperimento ha causato l'immortalizzazione e la creazione di una linea cellulare epiteliale renale HK-2 a crescita continua.
- Le cellule HK-2 presentano una morfologia epiteliale.
- Le dimensioni delle cellule HK-2 variano da 17,4 a 18,6 µm di diametro. Il diametro medio è di 18,2 µm [1].
2.linea cellulare HK-2: Informazioni sulla coltura
Le informazioni sulla coltura della linea cellulare HK-2 possono essere di grande aiuto prima di lavorare con essa. In questa sezione dell'articolo sono riportate le informazioni essenziali sulla coltura delle cellule HK-2. Saprete che: Le cellule HK-2 sono aderenti? Qual è il tempo di raddoppiamento delle cellule HK-2? Quale terreno si usa per coltivare le cellule HK-2?
Punti chiave per la coltura delle cellule HK-2
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Tempo di raddoppio della popolazione: |
Il tempo di raddoppiamento delle cellule HK-2 varia da 47,3 a 61,7 ore. |
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Aderenti o in sospensione: |
La linea cellulare epiteliale renale HK-2 è aderente. |
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Rapporto di subcoltivazione: |
Le cellule HK-2 sono sottocoltivate in un rapporto da 1:2 a 1:4. Le cellule HK-2 aderenti vengono lavate con 1 x PBS e incubate a temperatura ambiente per 8-10 minuti dopo aver aggiunto la soluzione di Accutase. Il terreno di coltura viene aggiunto alle cellule dissociate e centrifugato. Le cellule raccolte vengono accuratamente risospese e versate in nuove fiasche per la coltura. |
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Terreno di coltura: |
Il terreno di coltura ideale per le cellule HK-2 è un terreno contenente 10% di siero fetale bovino, 0,05 mg/ml di estratto di ipofisi bovina (BPE) e 5 ng/ml di fattore di crescita epidermico (EGF). Il terreno deve essere sostituito ogni 2-3 giorni alla settimana. |
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Condizioni di crescita: |
Le colture di linee cellulari di rene umano 2 sono mantenute in un incubatore umidificato con un apporto di CO2 del 5% a 37°C. |
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Conservazione: |
Le cellule congelate sono conservate nella fase vapore dell'azoto liquido o a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore a bassissima temperatura. |
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Processo e terreno di congelamento: |
I terreni di congelamento CM-1 o CM-ACF sono ideali per il congelamento delle cellule HK-2. In breve, si opta per un metodo di congelamento lento che consente un calo di temperatura di solo 1 grado Celsius al minuto e protegge le cellule da qualsiasi shock. |
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Processo di scongelamento: |
Le cellule congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius. Le cellule vengono aggiunte al terreno di coltura fresco e risospese. Successivamente, le cellule vengono dispensate in una nuova fiasca contenente terreno di coltura. Dopo 24 ore il terreno di coltura viene sostituito per rimuovere i componenti del terreno di congelamento. |
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Livello di biosicurezza: |
Le colture cellulari HK-2 sono mantenute in laboratori di livello di biosicurezza 1. |
3.vantaggi e limiti delle cellule HK-2
La HK-2 è una linea cellulare epiteliale del tubulo prossimale umano ampiamente utilizzata. Come altre linee cellulari, presenta alcuni vantaggi e limiti. In questa sezione verranno discussi alcuni dei principali pro e contro della linea cellulare HK-2.
Vantaggi
I principali vantaggi della linea cellulare HK-2 includono:
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Ben caratterizzata |
La linea cellulare HK-2 è ampiamente caratterizzata in termini di morfologia, dimensioni e genoma. Su queste cellule renali normali sono stati condotti numerosi studi di ricerca. |
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Immortalata |
La linea HK-2 è una linea cellulare continua con una durata di vita prolungata, che consente la propagazione attraverso diversi passaggi. Questa caratteristica garantisce una fornitura continua di cellule per gli esperimenti di laboratorio. |
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Caratteristiche epiteliali del tubulo prossimale |
Le cellule HK-2 presentano un fenotipo ben differenziato, caratteristico delle cellule del tubulo prossimale (PTC) presenti nel rene umano. Questa caratteristica unica rende le cellule HK-2 un modello in vitro prezioso per lo studio della fisiologia renale, dei processi cellulari e delle risposte a vari stimoli. |
Limitazioni
Ecco alcuni limiti della linea cellulare HK-2:
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Modello in vitro |
La linea HK-2 funge da modello in vitro di cellule renali normali, in particolare presenta le caratteristiche delle cellule epiteliali del tubulo prossimale. Tuttavia, potrebbe non replicare completamente la complessità del tessuto renale umano e il microambiente che si trova in vivo. |
4.applicazioni della linea cellulare HK-2 nella ricerca
La linea cellulare HK-2 ha numerose applicazioni nella ricerca tossicologica. Qui di seguito abbiamo discusso alcuni usi specifici e significativi di questa linea cellulare tubulare prossimale umana nella ricerca.
- Fisiologia renale: le cellule HK-2 sono comunemente utilizzate per studiare la normale fisiologia e le funzioni renali. I ricercatori impiegano queste cellule epiteliali del tubulo prossimale per studiare i canali ionici, i processi di trasporto e altri meccanismi cellulari che regolano l'omeostasi renale. Ad esempio, i ricercatori hanno studiato il ruolo dei canali Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) nella morte cellulare indotta dal (+)-Conocarpan (CNCP), un neolignan, nelle cellule epiteliali renali HK-2 [2].
- Malattie renali: La linea cellulare HK-2 è utilizzata per studiare diverse malattie renali, come il danno renale acuto e la nefropatia diabetica, e i loro meccanismi cellulari e molecolari sottostanti. Ad esempio, la ricerca ha scoperto che i livelli di metilazione della proteina klotho sono legati al danno renale. Diminuendo la metilazione del promotore del gene Klotho si può aumentare la sua espressione e alleviare il danno renale indotto in modelli di topi diabetici db/db e in cellule HK-2 trattate con glucosio elevato [3].
- Studi di tossicologia: Le cellule HK-2 sono un ottimo strumento di ricerca per valutare i potenziali effetti di vari farmaci, sostanze chimiche e inquinanti ambientali. Gli studi possono aiutare i ricercatori a valutare la sicurezza dei farmaci e gli effetti collaterali sulle cellule renali. Ad esempio, uno studio pubblicato nel 2022 ha valutato i potenziali effetti dei polisaccaridi e dell'estratto acquoso di un'erba naturale, ilPolygonatumkingianum (PK), sulla nefrotossicità indotta dall'uranio nelle cellule HK-2. È emerso che il PK esercita effetti protettivi e previene l'avvelenamento da uranio nelle cellule renali [4].
5.cellule HK-2: Pubblicazioni di ricerca
Di seguito sono riportate alcune interessanti pubblicazioni di ricerca riguardanti le cellule epiteliali renali HK-2.
Questo studio pubblicato su Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) propone che l'RNA circolare HIPK3 possa diminuire l'inibizione della proliferazione delle cellule HK-2 causata dalla tossicità del glucosio. Inoltre, può inibire la morte cellulare regolando la cascata miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Questa ricerca pubblicata su Nanomedicine (2020) ha valutato i diversi meccanismi di tossicità delle nanoparticelle d'oro (AuNPs) nelle cellule tumorali 786-0 e nelle cellule epiteliali del tubulo prossimale HK-2.
Questo articolo è stato pubblicato su Renal Failure (2022). I risultati affermano che il microRNA-320c può ridurre la tossicità indotta dal glucosio elevato nelle cellule renali (HK-2) prendendo di mira PTEN e inibendo la segnalazione PI3K/AKT.
Questo studio pubblicato su Tissue Engineering Part A (2022) propone che gli esosomi derivati da cellule staminali mesenchimali prevengano la transizione epiteliale-mesenchimale delle cellule renali HK-2.
L'articolo del Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) afferma che l'lncRNA TapSAKI aumenta la risposta infiammatoria e la morte cellulare delle cellule HK-2 regolando la via di segnalazione del microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
6.risorse per la linea cellulare HK-2: Protocolli, video e altro
La linea cellulare HK-2 è una linea cellulare famosa. Ecco alcune risorse che descrivono il protocollo di coltura cellulare HK-2.
- Coltura cellulare HK-2: Questo sito web è ricco di informazioni sulla coltura cellulare HK-2. Fornisce ad esempio la ricetta del terreno cellulare HK-2, il protocollo di passaging e il protocollo per la gestione e il mantenimento delle colture proliferative e crioconservate.
- Passaggio delle cellule: Questo video vi aiuterà ad apprendere un protocollo generale di divisione o passaging per linee cellulari aderenti.
Riferimenti
- Handl, J., et al., The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds. Physiological Research, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., L 'attivazione dei canali TRPC6 contribuisce alla morte cellulare apoptotica indotta dal (+)-conocarpano nelle cellule HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., L 'EGCG attenua il danno renale attraverso l'inversione dell'ipermetilazione di klotho nei topi diabetici db/db e nelle cellule HK-2. Medicina ossidativa e longevità cellulare, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Effetti protettivi dei polisaccaridi e dell'estratto acquoso di Polygonatum kingianum sulla tossicità indotta dall'uranio nelle cellule del rene umano (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.