Cellule COS-1: Un cavallo di battaglia cellulare negli studi sull'espressione genica
La linea cellulare COS-1 è una cellula simile a un fibroblasto che proviene dal tessuto renale di una scimmia ed è spesso utilizzata dai ricercatori per studiare il virus delle scimmie, SV40. Queste cellule sono facilmente trasfettabili e spesso utilizzate per creare proteine ricombinanti per vari esperimenti biochimici, molecolari e di biologia cellulare.
Questo articolo fornirà dettagli completi sulla linea cellulare COS-1, coprendo tutte le informazioni essenziali necessarie. In particolare, si potranno acquisire conoscenze su quanto segue:
- Linea cellulare COS-1: Origine e informazioni generali.
- Pro e contro delle cellule COS-1
- Applicazioni di ricerca delle cellule COS-1
- Cellule COS-1: Pubblicazioni
- Risorse per la linea cellulare COS-1, inclusi protocolli, video e altro ancora
- Coltura delle cellule COS-1
1.linea cellulare COS-1: Origine e informazioni generali.
Prima di iniziare qualsiasi lavoro con una linea cellulare, è essenziale avere una conoscenza fondamentale della linea stessa. Ciò include informazioni quali l'origine delle cellule, il modo in cui sono state isolate e le loro caratteristiche. In questa sezione approfondiremo le basi delle cellule COS-1.
Cos'è la linea cellulare COS-1?
La linea cellulare COS-1 comprende cellule simili a fibroblasti che J.W.F. Cowell e colleghi hanno creato per la prima volta nel 1981. Queste cellule sono state generate trasformando una linea cellulare epiteliale di scimmia verde nota come CV-1 con una forma mutante del virus simiano SV40. Successivamente, la linea cellulare COS-1 è stata accuratamente caratterizzata per ripristinare la regione del genoma SV40 che era stata precedentemente eliminata dall'origine di replicazione. Queste cellule esprimono grandi antigeni T e altre proteine necessarie per replicare correttamente genomi circolari, come i plasmidi.
Le cellule COS-1 hanno una morfologia simile a quella dei fibroblasti e aderiscono alle superfici, distribuendosi come un monostrato. Attualmente non si conoscono varianti genetiche della linea cellulare COS-1. Tuttavia, una linea cellulare correlata, la COS-7, ha origine da cellule CV-1 e presenta caratteristiche simili.
2.pro e contro delle cellule COS-1
La linea cellulare COS-1 presenta vantaggi e limiti unici, che verranno illustrati di seguito.
Vantaggi
- Adattabilità alla trasfezione: La linea cellulare COS-1 è facilmente trasfettabile con vari metodi, tra cui approcci fisici e chimici.
- Produzione di lentivirus: La linea cellulare COS-1 è un ospite adatto alla produzione di particelle di lentivirus ricombinanti di alta qualità senza ulteriori passaggi di purificazione. Queste cellule aderiscono saldamente alle superfici di plastica, il che impedisce la contaminazione dei surnatanti di trasfezione contenenti particelle virali [1].
- Espressione genica: La linea cellulare COS-1 è ampiamente utilizzata per studi di analisi di espressione transitoria e stabile, producendo molte proteine ricombinanti attraverso la trasfezione con plasmidi circolari contenenti l'origine di replicazione SV40 [2].
Limitazioni
- Linea cellulare non umana: Poiché le cellule COS-1 provengono da primati non umani, le proteine ricombinanti prodotte da questa linea cellulare sono adatte solo per esperimenti di laboratorio e non possono essere raccomandate per l'uso umano.
3.applicazioni di ricerca delle cellule COS-1
Una delle considerazioni più importanti quando si parla di una linea cellulare è la sua applicazione nella ricerca. In questa sezione verranno analizzate le principali applicazioni di ricerca delle cellule COS-1.
- Produzione di proteine ricombinanti: La linea cellulare COS-1 è ampiamente utilizzata per la produzione di proteine ricombinanti attraverso la trasfezione transitoria o stabile di vettori circolari contenenti l'origine di replicazione SV40. In uno studio recente, i biologi hanno utilizzato la linea cellulare COS-1 per produrre gonadotropina corionica equina, un ormone ricombinante per applicazioni riproduttive [3]. Analogamente, un altro studio ha utilizzato le cellule COS-1 per produrre un anticorpo monoclonale ricombinante di pollo contro uno specifico tipo di virus influenzale [4].
- Produzione di particelle simil-virali: Le cellule COS-1 servono come ospiti di confezionamento per la produzione di lentivirus di alta qualità e possono essere utilizzate per generare vaccini virali. Uno studio ha utilizzato la linea cellulare COS-1 per produrre particelle simili al virus della dengue, non infettive ma altamente immunogene, che sono efficaci candidati vaccini [5].
4.cellule COS-1: Pubblicazioni
Alcune pubblicazioni di rilievo sulle cellule COS-1 sono:
- Production and Purification of Dengue Virus-like Particles from COS-1 Cells: Questa pubblicazione su Bio-Protocol spiega l'uso di cellule COS-1 per produrre particelle simili al virus della dengue altamente immunogene.
- Analisi dell'espressione della gonadotropina corionica equina ricombinante in tre sistemi d'ospite: E. coli BL21C, lisato di cellule d'insetto Sf e cellule di mammifero COS-1: In questo studio, i ricercatori hanno confrontato la produzione e la modifica post-traduzionale di un ormone riproduttivo ricombinante, ad esempio la gonadotropina corionica equina, in diversi sistemi di espressione, tra cui le cellule di mammifero COS-1.
- Studio delle particelle Flavivirali trasmesse dalle zecche come sistema di rilascio per la terapia genica: Questo studio ha utilizzato cellule COS-1 per produrre particelle simili al virus dell'encefalite da zecca (TBEV). Queste particelle sono state proposte come shuttle per trasportare i repliconi richiesti (cioè i geni terapeutici).
- Generazione di un anticorpo monoclonale ricombinante di pollo contro la neuraminidasi del virus dell'influenza aviaria H9N2: Questo articolo pubblicato sulla rivista AMB Express ha utilizzato cellule COS-1 per produrre anticorpi monoclonali ricombinanti di tipo chickenized contro la neuraminidasi del virus dell'influenza aviaria di tipo H9N2.
- Solubilizzazione senza detergenti di canali Kv umani espressi in cellule di mammifero: In questo studio, la linea cellulare di mammifero COS-1 è stata utilizzata per esprimere canali Kv umani per condurre alcuni esperimenti di solubilizzazione.
5.risorse per la linea cellulare COS-1, tra cui protocolli, video e altro ancora
Protocolli di coltura cellulare
- Coltura delle cellule COS-1: Questo link contiene informazioni preziose sulla divisione, il congelamento e lo scongelamento delle cellule COS-1.
- Cellule COS-1: Questo link contiene informazioni di base sulla linea cellulare COS-1.
Protocolli di trasfezione
Ecco alcune fonti che descrivono il metodo di trasfezione delle cellule COS-1.
- Trasfezione transitoria di cellule COS-1: Questo documento comprende un protocollo per la trasfezione transitoria della linea cellulare COS-1.
Video relativi alla linea cellulare COS-1
Le seguenti risorse video possono aiutare a ottenere informazioni generali sulla coltura, il mantenimento e la trasfezione delle cellule COS-1.
- Passaggio di cellule: Questo video illustra le pratiche di coltura di base per le linee cellulari di mammifero.
- Congelamento di cellule aderenti: Questo video contiene informazioni sul congelamento di linee cellulari aderenti.
- Protocollo di trasfezione: Questo video mostra la procedura di trasfezione delle cellule di mammifero.
6.coltura delle cellule COS-1
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Caratteristiche |
Informazioni |
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Tempo di raddoppio |
Circa 48 ore |
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Aderenti o in sospensione |
Aderente cresce come monostrato sulla superficie della fiasca di coltura |
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Densità di semina |
da 2 a 4 x 10^4 cellule/cm²; le cellule aderenti vengono lavate con 1x PBS, trattate con Accutase, centrifugate, risospese e distribuite in una nuova fiasca |
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Terreno di crescita |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) contenente il 10% di FBS; il terreno di coltura deve essere sostituito da 2 a 3 volte alla settimana |
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Condizioni di crescita (temperatura, CO2) |
Richiede un incubatore umidificato con il 5% di CO2 e una temperatura di 37°C |
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Conservazione |
A temperatura inferiore a -150°C nella fase di vapore dell'azoto liquido |
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Processo di congelamento e terreno di coltura |
Un metodo di congelamento lento con una diminuzione della temperatura di solo 1 °C utilizzando i terreni CM-1 o CM-ACF |
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Processo di scongelamento |
Scongelare le cellule congelate incubandole in un bagno d'acqua a 37°C per 40-60 secondi con agitazione rapida. Centrifugare le cellule per rimuovere il terreno di congelamento, risospendere il pellet e distribuirlo in una fiasca di coltura con terreno fresco. L'adesione dura circa 24 ore. |
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Livello di sicurezza biologica |
Si raccomanda il livello di biosicurezza 1 per la manipolazione delle cellule COS-1 |
Speriamo che questo articolo abbia fornito un'ampia quantità di informazioni per aiutarvi a iniziare a lavorare con le cellule COS-1. Ordinate da noi se volete utilizzare questa linea cellulare per i vostri studi di ricerca.
Riferimenti
- Smith, S.L. e T. Shioda, Advantage of COS-1 monkey kidney epithelial cells as packaging host for small-volume production of high-quality recombinant lentiviruses. Journal of virological methods, 2009. 157(1): p. 47-54.
- MacKenzie, C.J. e T. Shioda, COS-1Cells as Packaging Host for Production of Lentiviruses. Current protocols in cell biology, 2011. 50(1): p. 26.7. 1-26.7. 15.
- Bhardwaj, A., et al., Analisi dell'espressione della gonadotropina corionica equina ricombinante in tre sistemi ospiti: E. coli BL21C, lisato di cellule di insetto Sf e cellule di mammifero COS-1. Indian Journal of Animal Research, 2021. 55(1): p. 40-45.
- Wang, F., et al., Generazione di un anticorpo monoclonale ricombinante di pollo contro la neuraminidasi del virus dell'influenza aviaria H9N2. AMB Express, 2020. 10: p. 1-7.
- Galula, J.U., G.-J.J. Chang e D.-Y. Chao, Produzione e purificazione di particelle simili al virus della Dengue da cellule COS-1. Bio-protocol, 2019. 9(12): p. e3280-e3280.

