Cellule B16 - Guida fondamentale alle cellule di melanoma B16 nella ricerca oncologica

B16 è una linea cellulare di origine murina derivata dal cancro della pelle (melanoma). Questa linea cellulare costituisce un efficace modello in vitro per lo studio dei tumori cutanei umani. Viene spesso utilizzata per studiare la formazione di tumori solidi e le metastasi delle cellule tumorali.

📋 Linea cellulare B16 — Informazioni essenziali

Terreno di coltura: Le cellule B16 vengono coltivate in terreno EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS). Il terreno di coltura deve essere rinnovato 2-3 volte alla settimana.
Tempo di raddoppio: Il tempo medio di raddoppio della popolazione delle cellule B16 è stimato in 24 ore.
Tipo di crescita: Le cellule B16 sono aderenti e crescono in monostrati.
Livello di biosicurezza: BSL-1
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Questo articolo ti aiuterà a comprendere le nozioni di base sulla linea cellulare di melanoma B16. Nello specifico, tratterà i seguenti argomenti:

📋 Indice

Caratteristiche generali e origine della linea cellulare B16
Informazioni sulla coltura della linea cellulare B16
Linea cellulare B16: vantaggi e svantaggi
Applicazioni delle cellule B16
5. Pubblicazioni di ricerca sulle cellule B16
Risorse per la linea cellulare B16: protocolli, video e altro
Domande frequenti

Caratteristiche generali e origine della linea cellulare B16

Questa sezione dell'articolo tratterà le caratteristiche della linea cellulare di melanoma B16. Troverete le risposte alle seguenti domande frequenti. Ad esempio: Che cos'è la linea cellulare tumorale B16? Da dove derivano le cellule B16? Qual è la dimensione delle cellule B16?

La linea cellulare B16 è stata creata nel 1954. Queste cellule derivano da topi C57BL/6J che hanno sviluppato spontaneamente un tumore cutaneo presso i Jackson Laboratories nel Maine.
Si tratta di cellule epiteliali produttrici di melanina che hanno la capacità di metastatizzare nella milza, nel fegato e nei polmoni.
Le cellule del melanoma B16 crescono come monostrati e presentano una morfologia cellulare di tipo epiteliale e a forma di fuso.
La dimensione della linea cellulare B16 è di circa 15,4 μm.
Esistono subcloni distinti delle cellule B16, tra cui B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 e B16F10. Queste sottolinee sono diverse dalle cellule B16 madri e conservano alcune caratteristiche specifiche. Ad esempio, presentano differenze nella morfologia, nelle dimensioni cellulari e in altre proprietà. La B16F10 ha un'elevata capacità di metastasi polmonari, mentre la B164A5 è la linea cellulare di cancro della pelle più aggressiva rispetto alla B16F10, alla B16-GMCSF e alla B16FLT3 [1].

Animazione 3D di un primo piano di un tumore della pelle in fase di crescita, come il melanoma maligno, che provoca l'infiammazione del tessuto circostante.

Informazioni sulla coltura della linea cellulare B16

Prima di mantenere o coltivare una linea cellulare, è opportuno cercare informazioni chiave relative al tempo di raddoppio, al tipo di cellula, ai terreni di coltura, alle condizioni di coltura, ecc. Questa sezione contiene tutte le informazioni necessarie per la coltura delle cellule B16.

Punti chiave per la coltura delle cellule B16

Tempo di raddoppio della popolazione:: Il tempo medio di raddoppio della popolazione per le cellule B16 è stimato in 24 ore.
Aderenzi o in sospensione:: Le cellule B16 sono aderenti e crescono in monostrati.
Densità di semina:: Si raccomanda di seminare le cellule B16 a una densità cellulare compresa tra 1 e 2 x 10⁴ cellule/cm². Le cellule B16 aderenti vengono risciacquate con PBS 1x e dissociate dalla superficie utilizzando una soluzione di Accutase. Le cellule vengono centrifugate e il pellet cellulare viene risospeso nel terreno di coltura. Successivamente queste cellule vengono trasferite in una nuova fiasca per la crescita.
Terreno di coltura:: Le cellule B16 vengono coltivate in terreno EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS). Il terreno di coltura deve essere rinnovato 2-3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita:: Per la coltura della linea cellulare B16 si utilizza un incubatore umidificato con un'alimentazione _di CO₂ al 5% e una temperatura di 37 °C.
Conservazione:: Queste cellule vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 °C o nella fase vapore dell'azoto liquido per preservarne la vitalità.
Processo di congelamento e terreno:: Per congelare le cellule B16 si utilizza un processo di congelamento lento con terreno CM-1 o CM-ACF.
Processo di scongelamento:: Le cellule B16 congelate vengono scongelate a 37 °C in un bagno d'acqua contenente un agente antimicrobico. Le cellule scongelate possono essere coltivate direttamente trasferendole in fiasche contenenti terreno di coltura. Inoltre, queste cellule possono essere centrifugate per rimuovere i componenti del mezzo di congelamento e quindi coltivate in un nuovo terreno.
Livello di biosicurezza:: La linea cellulare B16 deve essere manipolata o conservata in un laboratorio di livello di biosicurezza 1.

B16 cells

Strato semiconfluente di cellule di melanoma B16 a un ingrandimento di 10x e 20x.

Linea cellulare B16: vantaggi e svantaggi

Come altre linee cellulari, la B16 presenta una combinazione unica di vantaggi e svantaggi. In questa sezione sono elencati alcuni pro e contro significativi di questa linea cellulare di melanoma.

Vantaggi

La B16 è il primo strumento murino efficace ampiamente utilizzato nella ricerca sulle metastasi grazie ai vantaggi che offre. Alcuni vantaggi di questa linea cellulare di cancro della pelle sono:

Facile da coltivare: La linea cellulare B16 è facile da coltivare nei laboratori di ricerca. È ampiamente utilizzata per studiare la biologia delle cellule tumorali, le vie di segnalazione e altro ancora.
Crescita rapida: La linea cellulare di melanoma B16 presenta un alto tasso di proliferazione, rendendola adatta allo studio dei processi di divisione e crescita cellulare.
Tumorigenicità: La B16 è una linea cellulare tumorigenica con proprietà simili a quelle dei tumori, quali invasività, migrazione e proliferazione. È preziosa per lo studio della formazione, della progressione e delle metastasi dei tumori.

Svantaggi

Gli svantaggi associati alla linea cellulare B16 sono:

Mancanza di rilevanza per l'uomo: Poiché B16 è una linea cellulare di melanoma murino, potrebbe non rappresentare accuratamente la biologia del cancro della pelle umano, limitando la traslabilità dei risultati della ricerca.
Eterogeneità: Le cellule B16 sono eterogenee e presentano proprietà genetiche e fenotipiche variabili all'interno della stessa coltura. Ciò può influire sull'affidabilità e sulla riproducibilità dei risultati.

Applicazioni delle cellule B16

La linea cellulare B16 è ampiamente utilizzata negli studi di ricerca. Alcune applicazioni promettenti di questa linea cellulare sono:

Biologia dei tumori: questa linea cellulare di cancro della pelle murino è tumorigenica e ampiamente utilizzata per comprendere la biologia dei tumori. Sono stati condotti diversi studi per esplorare i meccanismi cellulari alla base della crescita, della proliferazione e delle metastasi delle cellule tumorali utilizzando le cellule B16. Uno studio di ricerca condotto nel 2020 ha utilizzato le cellule B16 per indagare il ruolo dell'RNA non codificante lungo, LncRNA MEG3, nella formazione, nella crescita e nelle metastasi del melanoma. Questa ricerca ha scoperto che l'RNA non codificante modula l'asse miRNA-21/E-Cadherin per stimolare questi eventi cellulari [2]. Allo stesso modo, è stata condotta una ricerca per indagare il potenziale ruolo della segnalazione Notch1 nell'immunosoppressione indotta dal tumore utilizzando cellule B16 [3].
Ricerca farmacologica: le cellule B16 vengono utilizzate per convalidare e testare i potenziali effetti terapeutici dei farmaci candidati. Uno studio ha valutato l'effetto antitumorale dell'acido neogambogico, un composto naturale, utilizzando una linea cellulare B16. I risultati dello studio hanno rivelato che questo composto modula la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR per indurre la morte delle cellule tumorali [4]. Un altro studio ha esaminato l'effetto antitumorale del ginsenoside Rg3, una saponina, utilizzando la linea cellulare B16. La ricerca ha ipotizzato che questo composto naturale esercitasse un'attività antitumorale attraverso la downregulation delle vie ERK e Akt [5].

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5. Pubblicazioni scientifiche relative alle cellule B16

Di seguito sono riportate alcune importanti pubblicazioni di ricerca incentrate sulla linea cellulare di melanoma B16.

LncRNA MEG3 promuove la crescita, la metastasi e la formazione del melanoma attraverso la modulazione dell'asse miR-21/E-caderina

Questa pubblicazione sulla rivista Cancer Cell International (2020) ha ipotizzato che l'RNA lungo non codificante MEG3 potenzi la formazione, la crescita e la metastasi delle cellule di melanoma B16 modulando l'asse miRNA-21/E-caderina.

Un nuovo derivato del psoralene, l'MPFC, potenzia la melanogenesi attraverso l'attivazione delle vie di segnalazione p38 MAPK e PKA nelle cellule B16

Questo articolo è stato pubblicato sull'International Journal of Molecular Medicine nel 2018. Questo studio ha esaminato l'effetto melanogenico e i meccanismi di un derivato dello psoralene, il 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g]cromen-2-one (MPFC), nelle cellule B16. Lo studio ha ipotizzato che questo derivato promuova la melanogenesi stimolando la segnalazione cellulare PKA e p38 MAPK.

La segnalazione di Notch1 nelle cellule di melanoma ha favorito l'immunosoppressione indotta dal tumore tramite la sovraregolazione del TGF-β1

Questa ricerca è stata pubblicata nel 2018 sul Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. I risultati dello studio suggeriscono che l'attivazione della segnalazione di Notch1 nelle cellule B16 possa impedire l'immunità antitumorale aumentando l'espressione del gene TGF-β1.

L'acido neogambogico induce l'apoptosi delle cellule di melanoma B16 attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR

Questo studio è stato condotto da Chunlan Wu e dai suoi colleghi nel 2020 e pubblicato sulla rivista Acta Biochimica Polonica. Questa ricerca afferma che l'acido neogambogico, un composto naturale, può causare la morte delle cellule di melanoma B16 modulando la cascata di segnalazione PI3K/Akt/mTOR.

Un complesso di iridio (III) come potente agente antitumorale induce l'apoptosi e l'autofagia nelle cellule B16 attraverso l'inibizione della via AKT/mTOR

Questo articolo di ricerca è stato pubblicato sull'European Journal of Medicinal Chemistry nel 2018. In questo studio, i ricercatori hanno studiato l'attività antitumorale di un composto, il complesso di iridio (III), utilizzando cellule di melanoma B16.

L'ailantone induce l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi nelle cellule di melanoma B16 e A375

Questo studio ha suggerito che un bioattivo vegetale, l'ailantone, possiede un potenziale antitumorale in quanto è in grado di indurre l'apoptosi e l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule di melanoma B16 e A375. Questo articolo è stato pubblicato su Biomolecules nel 2019.

Risorse per la linea cellulare B16: protocolli, video e altro

Le risorse disponibili sulla linea cellulare B16 che spiegano i suoi protocolli di coltura e trasfezione sono limitate.

Coltura delle cellule di melanoma: questo video fornisce preziosi consigli per la coltura delle linee cellulari di melanoma.
Subcoltura di una linea cellulare: questo video spiega un protocollo generale di subcoltura per una linea cellulare.
Trasfezione della linea cellulare B16F10: questo video spiega il protocollo di trasfezione per una sottolinia di cellule di melanoma B16. Può aiutarti a ottimizzare il protocollo di trasfezione per le cellule B16.

Di seguito sono riportati alcuni protocolli di coltura cellulare per le cellule B16.

Coltivazione delle cellule B16: questo sito web contiene tutte le informazioni necessarie per la coltura delle cellule B16, inclusi i terreni di coltura, la subcoltura, lo scongelamento e il congelamento delle cellule.

Riferimenti

Danciu, C., et al., Comportamento di quattro diverse sottolinee di cellule di melanoma murino B 16: pelle C57 BL/6J. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 promuove la crescita, la metastasi e la formazione del melanoma attraverso la modulazione dell'asse miR-21/E-caderina. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., La segnalazione di Notch1 nelle cellule di melanoma ha favorito l'immunosoppressione indotta dal tumore tramite la sovraregolazione del TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., L'acido neogambogico induce l'apoptosi delle cellule di melanoma B16 attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Attività antitumorale del ginsenoside Rg3 nel melanoma attraverso la downregulation delle vie ERK e Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.