Cellule B16 - Guida fondamentale alle cellule di melanoma B16 nella ricerca oncologica

LaB16 è una linea cellulare di cancro della pelle (melanoma) di origine murina. Questa linea cellulare è un efficace modello in vitro per lo studio dei tumori cutanei umani. Viene spesso utilizzata per studiare la formazione di tumori solidi e le metastasi delle cellule tumorali.

Questo articolo vi aiuterà a comprendere le basi della linea cellulare di melanoma B16. In particolare, si illustrerà quanto segue:

1.caratteristiche generali e origine della linea cellulare B16

Questa sezione dell'articolo illustra le caratteristiche della linea cellulare di melanoma B16. Verranno fornite le risposte alle seguenti domande frequenti. Ad esempio, che cos'è la linea cellulare del cancro B16? Da dove derivano le cellule B16? Qual è la dimensione delle cellule B16?

La linea cellulare B16 è stata creata nel 1954. Queste cellule sono state derivate da topi C57BL/6J che si sono ammalati spontaneamente di tumore alla pelle presso i Laboratori Jackson nel Maine.
Si tratta di cellule epiteliali che producono melanina e che hanno la capacità di metastatizzare nella milza, nel fegato e nei polmoni.
Le cellule del melanoma B16 crescono come monostrati e presentano una morfologia cellulare simile a quella epiteliale e a forma di fuso.
Le dimensioni della linea cellulare B16 sono di circa 15,4 μm.
Esistono sottocloni distinti di cellule B16, tra cui B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 e B16F10. Queste sottolinee sono diverse dalle cellule B16 parentali e conservano alcune caratteristiche specifiche. Ad esempio, presentano differenze nella morfologia, nelle dimensioni delle cellule e in altre proprietà. La B16F10 ha un'elevata capacità metastatica polmonare e la B164A5 è la linea cellulare di cancro della pelle più aggressiva rispetto alla B16F10, alla B16-GMCSF e alla B16FLT3 [1].

animazione 3D di un primo piano di un cancro della pelle in crescita, come il melanoma maligno, che infiamma il tessuto circostante.

2.informazioni sulla coltura della linea cellulare B16

Prima di mantenere o coltivare una linea cellulare, si possono cercare informazioni chiave sul tempo di raddoppiamento, sul tipo di cellula, sul terreno di coltura, sulle condizioni di coltura, ecc. Questa sezione contiene tutte le informazioni necessarie per la coltura delle cellule B16.

Punti chiave per la coltura delle cellule B16

Tempo di raddoppio della popolazione:	Il tempo medio di raddoppiamento della popolazione per le cellule B16 è stimato in 24 ore.
Aderenti o in sospensione:	Le cellule B16 sono aderenti e crescono in monostrati.
Densità di semina:	Si raccomanda di seminare le cellule B16 a una densità compresa tra 1 e 2 x¹⁰⁴ ^cellule/cm2. Le cellule B16 attaccate vengono risciacquate con 1 x PBS e dissociate dalla superficie utilizzando la soluzione di Accutase. Le cellule vengono centrifugate e il pellet cellulare viene risospeso nel terreno di crescita. Successivamente, queste cellule vengono distribuite in una nuova fiasca per la crescita.
Terreno di crescita:	Le cellule B16 sono coltivate in terreno EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS). Il terreno di coltura deve essere rinnovato 2-3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita:	Per la crescita della linea cellulare B16 si utilizza un incubatore umidificato con un apporto di_CO2 del 5% e una temperatura di 37 °C.
Conservazione:	Queste cellule vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 °C o nella fase vapore dell'azoto liquido per proteggere la vitalità cellulare.
Processo e terreno di congelamento:	Il terreno di congelamento CM-1 o CM-ACF viene utilizzato per congelare le cellule B16 con un processo di congelamento lento.
Processo di scongelamento:	Le cellule B16 congelate vengono scongelate a 37 °C in un bagno d'acqua contenente un agente antimicrobico. Le cellule scongelate possono essere coltivate direttamente distribuendole in fiasche contenenti terreno di coltura. Inoltre, queste cellule possono essere centrifugate per rimuovere i componenti del terreno di congelamento e quindi coltivate in nuovi terreni.
Livello di biosicurezza:	La linea cellulare B16 deve essere manipolata o mantenuta in un laboratorio di livello di biosicurezza uno.

Strato semiconfluente di cellule di melanoma B16 con ingrandimento 10x e 20x.

3. linea cellulare B16: Vantaggi e svantaggi

Come altre linee cellulari, la B16 possiede una miscela unica di vantaggi e svantaggi. In questa sezione sono elencati alcuni vantaggi e svantaggi significativi di questa linea cellulare di melanoma.

Vantaggi

La B16 è il primo strumento murino efficace ampiamente utilizzato nella ricerca sulle metastasi grazie ai vantaggi che offre. Alcuni vantaggi di questa linea cellulare di cancro della pelle sono:

Facile da coltivare	La linea cellulare B16 è facile da coltivare nei laboratori di ricerca. È ampiamente utilizzata per studiare la biologia delle cellule tumorali, le vie di segnalazione e altro ancora.
Crescita rapida	La linea cellulare di melanoma B16 presenta un elevato tasso di proliferazione, che la rende adatta allo studio dei processi di divisione e crescita cellulare.
Tumorigenicità	La B16 è una linea cellulare tumorigenica con proprietà simili a quelle dei tumori, come invasione, migrazione e proliferazione. È utile per studiare la formazione, la progressione e le metastasi dei tumori.

Svantaggi

Gli svantaggi associati alla linea cellulare B16 sono:

Mancanza di rilevanza per l'uomo	Essendo la B16 una linea cellulare di melanoma murino, potrebbe non rappresentare accuratamente la biologia del cancro della pelle umano, limitando la traducibilità dei risultati della ricerca.
Eterogeneità	Le cellule B16 sono eterogenee e presentano proprietà genetiche e fenotipiche diverse all'interno della stessa coltura. Ciò può influire sull'affidabilità e sulla riproducibilità dei risultati.

4. applicazioni delle cellule B16

La linea cellulare B16 è ampiamente utilizzata negli studi di ricerca. Alcune applicazioni promettenti di questa linea cellulare sono:

Biologia dei tumori: Questa linea cellulare murina di cancro della pelle è tumorigenica e ampiamente utilizzata per comprendere la biologia dei tumori. Sono stati condotti diversi studi per esplorare i meccanismi cellulari alla base della crescita, della proliferazione e delle metastasi delle cellule tumorali utilizzando le cellule B16. Uno studio condotto nel 2020 ha utilizzato cellule B16 per indagare il ruolo dell'RNA non codificante lungo, LncRNA MEG3, nella formazione, crescita e metastasi del melanoma. Questa ricerca ha scoperto che l'RNA non codificante modula l'asse miRNA-21/E-Caderina per stimolare questi eventi cellulari [2]. Analogamente, è stata condotta una ricerca per indagare il ruolo potenziale della segnalazione di Notch1 nell'immunosoppressione indotta dal tumore utilizzando cellule B16 [3].
Scoperta di farmaci: Le cellule B16 sono utilizzate per convalidare e testare i potenziali effetti terapeutici dei candidati farmaci. Uno studio ha valutato l'effetto antitumorale dell'acido neogambogico, un composto naturale, utilizzando una linea cellulare B16. I risultati dello studio hanno rivelato che questo composto modula la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR per causare la morte delle cellule tumorali [4]. Un altro studio ha analizzato l'effetto anti-melanoma del ginsenoside Rg3, una saponina, utilizzando una linea cellulare B16. La ricerca ha proposto che questo composto naturale provochi un'attività antitumorale attraverso la downregolazione delle vie ERK e Akt [5].

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5.pubblicazioni di ricerca sulle cellule B16

Ecco alcune pubblicazioni di ricerca significative che riguardano la linea cellulare di melanoma B16.

L'LncRNA MEG3 promuove la crescita, la metastasi e la formazione del melanoma attraverso la modulazione dell'asse miR-21/E-caderina

Questa pubblicazione sulla rivista Cancer Cell International (2020) propone che l'RNA lungo non codificante MEG3 favorisca la formazione, la crescita e la metastasi delle cellule di melanoma B16 modulando l'asse miRNA-21/E-Caderina.

Un nuovo derivato dello psoralene, il MPFC, aumenta la melanogenesi attraverso l'attivazione delle vie di segnalazione p38 MAPK e PKA nelle cellule B16

Questo lavoro è stato pubblicato sull'International Journal of Molecular Medicine nel 2018. Questo studio ha analizzato l'effetto melanogenico e i meccanismi di un derivato dello psoralene, il 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g] cromen-2-one (MPFC), nelle cellule B16. Lo studio propone che questo derivato promuova la melanogenesi stimolando la segnalazione cellulare PKA e p38 MAPK.

La segnalazione di Notch1 nelle cellule di melanoma ha promosso l'immunosoppressione indotta dal tumore attraverso l'upregolazione di TGF-β1

Questa ricerca è stata pubblicata nel 2018 sul Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. I risultati dello studio suggeriscono che l'attivazione della segnalazione Notch1 nelle cellule B16 può impedire l'immunità antitumorale attraverso l'aumento dell'espressione del gene TGF-β1.

L'acido neogambogico induce l'apoptosi delle cellule di melanoma B16 attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR

Questo studio è stato condotto da Chunlan Wu e dai suoi colleghi nel 2020 e pubblicato sulla rivista Acta Biochimica Polonica. Questa ricerca afferma che l'acido neogambogico, un composto naturale, può causare la morte delle cellule di melanoma B16 modulando la cascata di segnalazione PI3K/Akt/mTOR.

Un complesso di iridio (III) come potente agente antitumorale induce apoptosi e autofagia nelle cellule B16 attraverso l'inibizione della via AKT/mTOR

Questo lavoro di ricerca è stato pubblicato sull'European Journal of Medicinal Chemistry nel 2018. In questo studio, i ricercatori hanno analizzato l'attività antitumorale di un composto, un complesso di iridio (III), utilizzando cellule di melanoma B16.

L'ailantone induce l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi nelle cellule di melanoma B16 e A375

Questo studio ha proposto che un bioattivo vegetale, l'ailantone, possiede un potenziale antitumorale in quanto può indurre l'apoptosi e l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule di melanoma B16 e A375. Questo lavoro è stato pubblicato su Biomolecules nel 2019.

6. risorse per la linea cellulare B16: Protocolli, video e altro

Esistono poche risorse sulla linea cellulare B16 che spiegano i suoi protocolli di coltura e trasfezione.

Coltura di cellule di melanoma: Questo video fornisce preziosi suggerimenti per la coltura delle linee cellulari di melanoma.
Sottocoltura di una linea cellulare: Questo video spiega un protocollo generale di subcoltura per una linea cellulare.
Trasfezione della linea cellulare B16F10: Questo video spiega il protocollo di trasfezione per una sotto-linea di cellule di melanoma B16. Può aiutare a ottimizzare il protocollo di trasfezione per le cellule B16.

Di seguito sono riportati alcuni protocolli di coltura cellulare per le cellule B16.

Coltura di cellule B16: Questo sito web contiene tutte le informazioni necessarie per la coltura delle cellule B16, compresi i terreni di coltura, la subcultura, lo scongelamento e il congelamento delle cellule.

Riferimenti

Danciu, C., et al., Comportamento di quattro diverse sottoclassi di cellule di melanoma murino B16: Pelle C57 BL/6J. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 promuove la crescita, la metastasi e la formazione del melanoma attraverso la modulazione dell'asse miR-21/E-caderina. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., La segnalazione di Notch1 nelle cellule di melanoma promuove l'immunosoppressione indotta dal tumore attraverso l'upregolazione di TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., L 'acido neogambogico induce l'apoptosi delle cellule di melanoma B16 attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Attività antitumorale del ginsenoside Rg3 nel melanoma attraverso la downregulation delle vie ERK e Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.