Cellule B16-F10 - Esplorazione della linea cellulare di melanoma B16-F10 nella ricerca sulle metastasi
Le celluleB16-F10 costituiscono una linea cellulare di melanoma derivata dal topo C57BL/6J. Sono ampiamente utilizzate nella ricerca sul cancro della pelle. I ricercatori utilizzano queste cellule per studiare lo sviluppo e la progressione del tumore e gli interventi terapeutici. Questo articolo tratterà gli aspetti fondamentali delle cellule di melanoma B16-F10. In particolare, comprenderà:
- Origine e caratteristiche generali della linea cellulare B16-F10
- Informazioni sulla coltura delle cellule B16-F10
- Cellule B16-F10: Vantaggi e svantaggi
- Applicazioni di ricerca delle cellule B16-F10
- Pubblicazioni che presentano la linea cellulare B16-F10
- Risorse per la linea cellulare B16-F10: Protocolli, video e altro
1. Origine e caratteristiche generali della linea cellulare B16-F10
Questa sezione fornisce informazioni sull'origine e sulle caratteristiche distintive delle cellule di melanoma B16-F10. Vi aiuterà a utilizzare la linea cellulare in modo efficiente nel vostro lavoro di ricerca. Principalmente si apprenderà quanto segue: Cosa sono le cellule B16-F10? Da cosa deriva la B16F10? Qual è la morfologia della linea cellulare B16F12? Qual è la dimensione della cellula B16F10?
- B16-F10 è un sottoclone della linea cellulare tumorale B16 derivata dal tessuto cutaneo di topi C57BL/6J. Le cellule di melanoma B16F10 sono state sviluppate dopo aver iniettato per via endovenosa la linea B16 in topi immunocompromessi o singenici. Queste cellule sono state selezionate per il loro potenziale di formare colonie polmonari metastatizzate in vivo e poi stabilite dopo dieci cicli di formazione di colonie polmonari in vitro [1]. È stata sviluppata da Fidler e colleghi nel 1976.
- Le linee cellulari B16-F10 hanno un aspetto epiteliale e fusiforme.
- La dimensione approssimativa delle cellule B16-F10 è di 15,4 ± 1,4 μm [2].
Cellule B16-F1 e B16-F10
Le cellule B16-F1 e B16-F10 sono derivate dalla linea cellulare madre B16. Entrambe hanno avuto la stessa origine e possiedono caratteristiche quasi simili. Tuttavia, la differenza principale è la loro capacità metastatica. Le cellule B16-F10 hanno un potenziale metastatico elevato, mentre le B16-F1 hanno un potenziale metastatico basso [3].
2.informazioni sulla coltura delle cellule B16-F10
Prima di manipolare e coltivare una linea cellulare, è necessario conoscerne il tempo di raddoppio, i mezzi di crescita, le condizioni e i protocolli di coltura cellulare. In questa sezione si parlerà di: Qual è il tempo di raddoppiamento delle cellule B16-F10? Come si coltivano le cellule B16F10? Qual è il terreno di coltura delle cellule B16-F10? Quali sono le condizioni di coltura raccomandate per le cellule B16-F10?
Punti chiave per la coltura delle cellule B16-F10
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Tempo di raddoppio: |
Il tempo di raddoppiamento delle cellule B16-F10 è di circa 20,1 ore. Può variare da 17 a 21 ore, a seconda delle condizioni di coltura. |
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Aderenti o in sospensione: |
La B16-F10 è una linea cellulare aderente. Le cellule crescono rapidamente e formano monostrati. |
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Rapporto di divisione: |
Le cellule B16-F10 vengono sottocoltivate con un rapporto di divisione da 1:2 a 1:4. Le cellule vengono lavate con tampone fosfato salino (1x) e poi incubate con la soluzione passante Accutase per 8-10 minuti a temperatura ambiente. Le cellule vengono aggiunte di terreno fresco e centrifugate. Il pellet cellulare raccolto viene nuovamente risospeso e le cellule vengono distribuite nella nuova fiasca contenente terreno di coltura fresco secondo il rapporto di divisione. |
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Terreno di coltura: |
Le cellule B16-F10 sono coltivate nel terreno DMEM. Il terreno è integrato con il 10% di FBS, 4 mM di L-Glutamina, 1,5 g/L di NaHCO3, 4,5 g/L di Glucosio e 1,0 mM di Sodio piruvato per una crescita cellulare ideale. Il terreno di coltura deve essere sostituito da 2 a 3 volte alla settimana. |
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Condizioni di crescita: |
Le cellule B16-F10 sono coltivate in un incubatore umidificato a 37 °C con un apporto di CO2 del 5%. |
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Conservazione: |
Le cellule congelate vengono conservate a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore elettrico a bassissima temperatura o nella fase vapore dell'azoto liquido per mantenere la vitalità cellulare. |
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Processo e terreno di congelamento: |
Le cellule B16-F10 vengono congelate in terreni CM-1 o CM-ACF per la conservazione. A tale scopo, si raccomanda un processo di congelamento lento che consenta una diminuzione della temperatura di solo 1°C al minuto, per evitare che le cellule subiscano uno shock. |
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Processo di scongelamento: |
Le cellule B16-F10 congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua a 37°C preimpostato per 40-60 secondi. Successivamente, le cellule vengono aggiunte al terreno fresco e centrifugate per rimuovere i componenti del terreno di congelamento. Le cellule raccolte vengono risospese in un terreno di crescita e versate in fiasche per la coltura. |
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Livello di biosicurezza: |
Per la manipolazione e la manutenzione della linea cellulare B16-F10 è necessario un laboratorio di livello di biosicurezza 1. |
3.cellule B16-F10: Vantaggi e svantaggi
Come altre linee cellulari, anche la B16-F10 presenta alcuni vantaggi e svantaggi. In questa sezione vengono discussi alcuni vantaggi e svantaggi significativi di questa linea cellulare di melanoma cutaneo.
Vantaggi
La linea cellulare B16-F10 è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro. I vantaggi delle cellule B16-F10 sono:
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Potenziale metastatico |
Le cellule di melanoma cutaneo B16F10 presentano un elevato potenziale metastatico, che le rende preziose per lo studio delle metastasi tumorali e dei meccanismi sottostanti. |
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Modello tumorale in vitro |
Le cellule B16-F10 fungono da modello in vitro per lo studio della progressione e della crescita del cancro, aiutando i ricercatori a comprendere i meccanismi cellulari e molecolari alla base del tumore. |
Svantaggi
Gli svantaggi associati alla linea cellulare B16-F10 sono:
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Linea cellulare derivata dal topo |
La B16-F10 è una linea cellulare derivata dal topo, il che limita la sua applicabilità a studi specifici sull'uomo. I risultati delle ricerche condotte su queste cellule non sempre si traducono realmente nella biologia umana. |
4.applicazioni di ricerca delle cellule B16-F10
La linea cellulare B16-F10 è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro. Qui di seguito vengono discusse alcune applicazioni promettenti di questa linea cellulare.
- Ricerca sul cancro: La linea cellulare B16-F10 è un modello prezioso per studiare i processi delle cellule tumorali, tra cui proliferazione, invasione, migrazione e morte cellulare o apoptosi. Inoltre, aiuta i ricercatori ad approfondire i meccanismi molecolari e le vie che guidano questi processi cellulari. Uno studio condotto nel 2018 ha esplorato il ruolo di CCR5 (recettore della chemochina C-C di tipo cinque) nella transizione delle cellule di melanoma da epiteliali a mesenchimali e nella metastasi. I risultati hanno rivelato che la carenza di CCR5 limita la crescita e la metastasi del tumore, mentre un'espressione elevata porta a un aumento della crescita e della metastasi delle cellule B16-F10. Ulteriori ricerche hanno riportato che CCR5 regola l'espressione del TGFβ1, che regola la segnalazione PI3K/AKT/GSK3β per promuovere la transizione epiteliale-mesenchimale e la migrazione cellulare [4].
- Test e sviluppo del farmaco: Le cellule tumorali di melanoma B16F10 sono altamente aggressive e quindi adatte a testare potenziali farmaci e trattamenti antitumorali. I ricercatori impiegano queste cellule e valutano l'effetto di diversi composti sulla crescita, la proliferazione e la metastasi delle cellule, favorendo lo sviluppo di farmaci. Uno studio condotto nel 2018 da Valentina Nanni e colleghi ha analizzato gli effetti terapeutici dell'estratto idroalcolico dei fiori di Spartium junceum . Lo studio ha proposto che l'estratto del fiore fosse efficace nell'indurre la senescenza nelle cellule B16-F10, che porta alla crescita cellulare e alla soppressione della melanogenesi; pertanto, può esercitare potenziali attività antitumorali [5].
5.pubblicazioni con la linea cellulare B16-F10
Ecco alcune pubblicazioni di ricerca significative che hanno come protagonista la linea cellulare di melanoma B16-F10:
Questo studio è stato pubblicato su Nutrients (2020). Propone che l'estratto etanolico di Sorghum bicolor abbia un effetto anti melanogenico nelle cellule di melanoma cutaneo B16F10.
Il calcitriolo inibisce la proliferazione e potenzialmente induce l'apoptosi nelle cellule B16-F10
La ricerca pubblicata su Medical Science Monitor Basic Research (2022) ha proposto che il farmaco calcitriolo eserciti effetti antitumorali nelle cellule di melanoma B16-F10 inibendo la proliferazione e inducendo l'apoptosi.
Questo articolo è stato pubblicato su Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). I risultati hanno rivelato che i cardoli, lipidi resorcinolici, esercitano un'intensa citotossicità sulla linea cellulare B16-F10.
Lo studio pubblicato su Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) ha esplorato il potenziale antimetastatico dell'estratto di esocarpo di Ginkgo biloba utilizzando cellule B16-F10.
Questa ricerca pubblicata su World Neurosurgery (2018) propone che il timochinone possa essere una terapia efficace contro le lesioni metastatiche intracerebrali, in quanto sopprime la crescita delle cellule B16-F10 e induce l'apoptosi.
6.risorse per la linea cellulare B16-F10: Protocolli, video e altro
Le cellule endoteliali B16F10 sono ampiamente utilizzate nella ricerca sul cancro della pelle. Ecco alcune risorse online che spiegano i protocolli di coltura e trasfezione:
- Trasfezione delle cellule di melanoma B16F10: Questo video tutorial può aiutare a imparare il protocollo di trasfezione delle cellule B16-F10.
- Trasfezione di cellule B16-F10: Questo documento spiega il protocollo di trasfezione del DNA in vitro per le cellule di melanoma cutaneo B16F10.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura cellulare per le cellule B16-F10:
- Sottocoltura di B16-F10: Questo sito web contiene informazioni utili sulle cellule del melanoma B16F10. Include i mezzi di crescita, il tempo di raddoppio, le condizioni di coltura e il protocollo per la subcoltura delle cellule e la gestione delle colture crioconservate e proliferative.
Riferimenti
- Poste, G., et al., Comparazione delle proprietà metastatiche di cloni di melanoma B16 isolati da linee cellulari in coltura, tumori sottocutanei e singole metastasi polmonari. Ricerca sul cancro, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono e S. Sugita, Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate Treatment Using a Tapered Microfluidic Device. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Comportamento di quattro diverse sottoline di cellule di melanoma murino B16: Pelle C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., L'alta espressione di CCR5 nel melanoma aumenta la transizione epitelio-mesenchimale e le metastasi tramite TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., L 'estratto idroalcolico di fiori di Spartium junceum L. inibisce la crescita e la melanogenesi in cellule B16-F10 inducendo la senescenza. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.