Linea cellulare A375 - Guida alla ricerca sul melanoma

A375 è una linea cellulare di melanoma umano ampiamente utilizzata nella ricerca tossicologica e immuno-oncologica. I ricercatori impiegano questa linea cellulare per studiare la biologia del cancro e le vie di segnalazione, testare o esaminare potenziali agenti antitumorali e sviluppare nuovi ed efficaci trattamenti terapeutici.

Origine e caratteristiche generali delle cellule A375

Conoscere l'origine e le caratteristiche generali di una linea cellulare può aiutare a pianificarne l'uso nella ricerca. Questa sezione dell'articolo tratterà l'origine e le caratteristiche della linea cellulare A375. Ad esempio, cos'è la linea cellulare A375? Quali sono le caratteristiche della linea cellulare A375? Da dove provengono le cellule A375? Qual è la morfologia delle cellule di melanoma A375? Qual è la dimensione delle cellule A375?

La linea cellulare A375 per il cancro della pelle ha avuto origine dalla coltura di espianto di un tumore solido di una donna di 54 anni affetta da melanoma maligno [1].
Le cellule A375 hanno una morfologia simile a quella epiteliale.
Le dimensioni delle cellule A375 sono relativamente più piccole rispetto ad altre linee cellulari. Hanno un diametro di circa 12 µm.
Le cellule di melanoma A375 sono ipotriploidi. Il numero modale di cromosomi per questa linea cellulare è 62. In genere, ogni cellula possiede nove cromosomi marcatori e una copia dei cromosomi normali N2, N6 e N22.

Un medico esamina le escrescenze sulla pelle di un adulto per verificare la presenza di un cancro della pelle.

Cellule A375: Informazioni sulla coltura cellulare

Le colture cellulari A375 sono facili da mantenere. Non hanno requisiti particolari per la coltura cellulare. Questa sezione vi aiuterà a conoscere le informazioni necessarie sulla coltura cellulare. Ad esempio, qual è il tempo di raddoppio dell'A375. Qual è il terreno di coltura della linea cellulare A375? Qual è la densità di semina di A375? Le cellule di melanoma A375 sono aderenti?

Punti chiave per la coltura delle cellule A375

Tempo di raddoppio della popolazione:	Il tempo di raddoppiamento di A375 è di 20 ore.
Aderenti o in sospensione:	A375 è una linea cellulare di melanoma umano aderente.
Densità di semina:	1 x¹⁰⁴ cellule/cm2 è la densità ideale per le colture di^celluleA375. Le cellule aderenti vengono risciacquate con 1 x tampone fosfato salino (PBS) e incubate con la soluzione passante (Accutase). Successivamente, le cellule sono state aggiunte al terreno di coltura e centrifugate. Le cellule raccolte sono state risospese in un terreno di coltura e distribuite in nuove fiasche per la crescita.
Terreno di coltura:	Il DMEM è consigliato come terreno di coltura ideale per A375 se integrato con il 10% di siero fetale bovino (FBS), 4,5 g/L di glucosio, 1,5 g/L di NaHCO3, 4 mM di L-Glutammina e 1,0 mM di piruvato di sodio. Il terreno di coltura A375 deve essere rinnovato 2-3 giorni alla settimana.
Condizioni di crescita:	Le cellule di melanoma A375 sono coltivate in un incubatore umidificato (37°C) con un apporto di CO2 del 5%.
Conservazione:	Le cellule A375 congelate devono essere conservate a meno di -150°C nella fase vapore dell'azoto liquido o in un congelatore elettrico.
Processo e terreno di congelamento:	Per congelare la linea cellulare A375 si utilizzano i terreni CM-1 o CM-ACF. Per proteggere la vitalità delle cellule si è optato per un processo di congelamento lento che consente una diminuzione graduale di 1°C della temperatura.
Processo di scongelamento:	La fiala di cellule di melanoma A375 congelate viene agitata rapidamente nel bagno d'acqua per 40-60 secondi fino a quando rimane solo un piccolo grumo di ghiaccio. Le cellule vengono aggiunte al terreno fresco e centrifugate per rimuovere gli elementi del terreno congelato. Il pellet cellulare ottenuto viene nuovamente risospeso e versato in nuove fiasche.
Livello di biosicurezza:	Le colture di A375 sono manipolate e mantenute in ambienti di laboratorio di livello di biosicurezza 1.

Strato confluente di cellule A375 aderenti con ingrandimento 20x.

Vantaggi e limiti della linea cellulare A375

Come altre linee cellulari, la linea cellulare per melanoma A375 è associata a una combinazione unica di vantaggi e limiti, che la rendono uno strumento prezioso per la ricerca sul melanoma. In questa sezione sono elencati solo alcuni vantaggi e svantaggi significativi della linea cellulare A375.

Vantaggi

I vantaggi significativi delle cellule A375 sono menzionati di seguito:

Modello di tumore del melanoma: La linea cellulare A375 è stata derivata da un tumore melanoma maligno, fungendo così da modello tumorale inestimabile per studiare la biologia del melanoma e gli interventi terapeutici. Queste cellule presentano proprietà simili al melanoma, come un alto tasso di proliferazione e invasività.
Tumorigenicità: Le cellule A375 sono altamente tumorigeniche, cioè possono formare tumori. È stato riportato che le cellule A375 producono melanomi amelanotici aggressivi in topi NIH Swiss trattati con siero anti-timocita (un agente immunosoppressivo).
Ben caratterizzate: A375 è una linea cellulare geneticamente ben caratterizzata. Possiede mutazioni genetiche specifiche come quelle del melanoma. Le mutazioni di A375 includono l'alterazione del gene BRAF, che la rende sensibile agli inibitori BRAF-specifici. Questo profilo genetico rende le cellule A375 un ottimo strumento di ricerca sul cancro per studiare le vie molecolari sottostanti e le terapie mirate.

Limitazioni

Le limitazioni associate alle cellule A375 sono:

Limiti in vitro: A375 è un modello tumorale in vitro. Sebbene imiti le caratteristiche del melanoma, non può rappresentare pienamente la complessità dei tumori del melanoma. Pertanto, occorre prestare attenzione quando i risultati in vitro vengono generalizzati agli studi clinici.

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Applicazioni di ricerca della linea cellulare A375

La linea cellulare A375 trova ampie applicazioni nella ricerca sul cancro. Ecco alcune delle aree comuni in cui vengono utilizzate le cellule A375.

Ricerca sul cancro: Le cellule A375 sono ampiamente utilizzate nella ricerca sul melanoma. I ricercatori hanno utilizzato queste cellule per studiare la biologia del cancro della pelle, i processi e i meccanismi di segnalazione cellulare sottostanti, tra cui la proliferazione, la migrazione e l'invasione cellulare. Ciò può anche aiutare i ricercatori a identificare nuovi bersagli terapeutici molecolari. Uno studio condotto da Lin Zhu e colleghi nel 2019 ha utilizzato cellule di melanoma altamente aggressive A375 e ha rilevato il ruolo del microRNA-3662 sulla crescita e l'invasione delle cellule di melanoma A375. I risultati dello studio affermano che il microRNA-3662 ha come bersaglio il gene ZEB1 e regola la crescita delle cellule di melanoma in vitro e in vivo nel modello tumorale A375 [2]. Analogamente, una ricerca condotta nel 2018 ha rilevato che le vie PI3K/AKT e MAPK/ERK sono coinvolte nella proliferazione e nella metastasi della linea cellulare A375 [3].
Scoperta e sperimentazione di farmaci: La linea cellulare A375 è un modello tumorale in vitro utile per testare e analizzare potenziali agenti antitumorali. I ricercatori valutano la tossicità e l'efficacia di nuovi farmaci chemioterapici, composti e altre terapie utilizzando queste cellule di melanoma A375. Ad esempio, uno studio ha esplorato le proprietà antitumorali di micro e nanovescicole derivate dal pompelmo su cellule di melanoma umano A375. I risultati hanno rivelato che le micro e nanovescicole inducono l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi e ostacolano l'espressione genica nella proliferazione, migrazione e invasione cellulare [4].

Cellule A375: Pubblicazioni

Vengono qui citate alcune pubblicazioni di ricerca significative sulle cellule A375.

La vitamina D e i suoi analoghi a basso contenuto calcemico modulano le proprietà antitumorali del cisplatino e della dacarbazina nella linea cellulare di melanoma umano A375

Questo studio è stato pubblicato sul Journal of Oncology nel 2019. Lo studio propone che il co-trattamento con vitamina D e analoghi migliora l'attività antitumorale di cisplatino e dacarbazina nelle cellule di melanoma A375.

Valutazione in vitro degli effetti anti-melanoma (linea cellulare A375) del gel e degli estratti di foglie intere di specie selezionate di aloe

Questa ricerca è stata pubblicata sul Journal of Herbal Medicine nel 2022. Questo studio ha esplorato gli effetti anti-melanoma del gel di aloe vera nelle cellule di melanoma A375.

Il membro 2 della famiglia della fermitina promuove la progressione del melanoma potenziando il legame di p-α-Pix con Rac1 per attivare la via MAPK

Questo studio pubblicato su Oncogene (2021) propone che il membro della famiglia della fermitina 2 (FERMT2 o kindlin-2) favorisca la progressione del melanoma attivando la MAPK attraverso il legame con p-α-Pix e Rac1.

FARP1 facilita la proliferazione cellulare attraverso la modulazione della via di segnalazione MAPK nel melanoma cutaneo

Questo studio pubblicato su The American Journal of Dermatopathology (2019) propone che FARP1 possa facilitare lo sviluppo e la progressione del melanoma cutaneo. Pertanto, può essere un utile bersaglio terapeutico.

Potenziale citotossico e apoptotico degli estratti di Phyllodium elegans su linee cellulari tumorali umane

Questo articolo di ricerca è stato pubblicato su Bioengineered (2019). Questo studio ha esplorato l'attività citotossica e apoptotica di un estratto della pianta Phyllodium elegans su linee cellulari di carcinoma umano, tra cui la A375.

Risorse per la linea cellulare A375: Protocolli, video e altro

Di seguito sono riportate alcune risorse online relative alle cellule A375.

Trasfezione di cellule A375: Questo video tutorial vi aiuterà a imparare la trasfezione delle cellule A375 passo dopo passo.
Coltura cellulare: Questo video contiene informazioni molto utili sulla coltura delle linee cellulari.

I protocolli di coltura cellulare per le cellule A375 sono elencati qui.

Linea cellulare A375: Questo link contiene informazioni utili sulla coltura e sul mantenimento della linea cellulare A375, compresi i terreni di coltura A375 e la gestione delle colture A375 congelate e proliferanti.

Domande frequenti (FAQ) per le cellule A375

Riferimenti

Avram, S., et al., Standardizzazione di modelli di melanoma umano A375 su membrana corioallantoica di embrione di pollo e topi nudi Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., Il microRNA-3662 ha come bersaglio ZEB1 e attenua l'invasione della linea cellulare di melanoma altamente aggressiva A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., L'ossifadicalcone C inibisce la proliferazione e la metastasi delle cellule di melanoma A375 attraverso la soppressione dei percorsi PI3K/Akt e MAPK/ERK. Scienze della vita, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al., Micro e nanovescicole derivate dal pompelmo mostrano profili metabolici e attività antitumorali distinti nella linea cellulare di melanoma umano A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.