Linea cellulare Neuro-2a
Neuro-2a è una linea cellulare neurale derivata dal topo ampiamente utilizzata nella ricerca neuroscientifica. Queste cellule vengono impiegate principalmente per lo studio dello sviluppo neurale, della differenziazione, della neurotossicità, delle vie di segnalazione cellulare e della crescita assonale. Inoltre, vengono utilizzate per lo sviluppo di farmaci e per lo screening.
Questo articolo si concentra su aspetti importanti delle cellule di neuroblastoma Neuro-2a che potrebbero esservi d'aiuto prima di iniziare a lavorarci. Tratterà principalmente:
- Caratteristiche generali e origine delle cellule Neuro-2a
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare Neuro-2a
- Vantaggi e svantaggi della linea cellulare Neuro-2a
- Applicazioni di ricerca della linea cellulare Neuro-2a
- Pubblicazioni di ricerca che trattano le cellule Neuro-2a
- Risorse per le cellule Neuro-2a: protocolli, video e altro
Caratteristiche generali e origine delle cellule Neuro-2a
Questa parte dell’articolo tratterà il contesto e le caratteristiche fondamentali della linea cellulare Neuro-2a che è essenziale conoscere prima di utilizzarla. Qui scoprirai: Che cos’è la linea cellulare Neuro-2a? Qual è l’origine della linea cellulare Neuro-2a? In cosa consiste la differenziazione delle cellule Neuro-2a? Quali sono le dimensioni di una cellula Neuro-2a? Qual è la morfologia delle cellule Neuro-2a?
- Le cellule Neuro-2a hanno origine da un tumore spontaneo (neuroblastoma) di un topo albino (ceppo A). La linea cellulare è stata isolata da R.J. Klebe e F.H. Ruddle.
- Le cellule di neuroblastoma Neuro-2a presentano una morfologia neuronale e ameboide tipica delle cellule staminali.
- Le dimensioni delle cellule Neuro-2a sono di 12 micrometri di altezza [1].
- Il numero cromosomico delle cellule Neuro-2a può variare da 59 a 193, con un numero modale di 95. Il cariotipo di queste cellule di neuroblastoma è instabile in un intervallo compreso tra 94 e 98 cromosomi.
Informazioni sulla coltura della linea cellulare Neuro-2a
Le cellule Neuro-2a sono ampiamente utilizzate nei laboratori di ricerca nel campo delle neuroscienze. Prima di lavorare con queste cellule, è necessario acquisire le informazioni fondamentali sulla coltura cellulare riportate di seguito. Ciò potrebbe aiutarti a gestire più facilmente il processo. Imparerai: Che cos’è un terreno di coltura per le cellule Neuro-2a? Come si coltivano le cellule Neuro-2a? Qual è il tempo di raddoppio delle cellule Neuro-2a? Qual è la densità di semina delle Neuro-2a ? Qual è il protocollo di coltura delle cellule Neuro-2a? Qual è il terreno di coltura per le cellule Neuro-2a?
Punti chiave per la coltura delle cellule Neuro-2a
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio delle cellule Neuro-2a è di circa 70 ore.
Aderenzi o in sospensione:
Neuro-2a è una linea cellulare aderente.
Densità di semina:
La densità di semina ottimizzata per la linea cellulare Neuro-2a è di 1 x 10⁴ cellule/cm². Per la semina, le cellule vengono lavate con soluzione salina tamponata con fosfato priva di magnesio e calcio (1x). Successivamente, viene aggiunta una soluzione di passaggio (Accutase) e le cellule vengono incubate per 8-10 minuti a temperatura ambiente. Dopo la dissociazione cellulare, viene aggiunto terreno fresco e le cellule vengono centrifugate. Il pellet cellulare raccolto viene accuratamente risospeso e le cellule vengono trasferite in un recipiente di coltura per la crescita.
Terreno di crescita:
Per la coltura delle cellule Neuro-2a si utilizza l’EMEM. Contiene il 10% di FBS, 2 mM di L-glutammina, 1,5 g/L di NaHCO₃, EBSS, 1 mM di piruvato di sodio e NEAA per una crescita cellulare ottimale. Il terreno di coltura deve essere sostituito da 1 a 2 volte alla settimana.
Condizioni di crescita:
Le colture di Neuro-2a vengono mantenute in un incubatore umidificato a 37 °C collegato a una fonte di CO₂ al 5%.
Conservazione:
Le cellule devono essere conservate a temperature inferiori a -150 °C in un congelatore elettrico a temperatura ultra-bassa o nella fase vapore dell’azoto liquido per la conservazione a lungo termine.
Processo di congelamento e terreno di coltura:
Per congelare le cellule Neuro-2a si utilizzano i terreni di coltura CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate mediante un processo di congelamento lento che consente un abbassamento della temperatura di solo 1 °C al minuto. Ciò protegge le cellule dallo shock termico e ne preserva la vitalità.
Processo di scongelamento:
Per scongelare le colture congelate, la fiala viene posta in un bagno d’acqua a 37 °C per 40-60 secondi, fino a quando rimane solo un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, si aggiunge il terreno di coltura e le cellule vengono sottoposte a centrifugazione. Questa fase aiuta a rimuovere i componenti del terreno di congelamento. Il pellet cellulare viene quindi risospeso e le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca riempita con terreno di coltura. Successivamente, le cellule vengono poste in un incubatore a 37 °C per un minimo di 24 ore.
Livello di biosicurezza:
Per la manipolazione e la manutenzione delle colture Neuro-2a è obbligatorio disporre di un laboratorio di livello di biosicurezza 1.
- Vantaggi e svantaggi della linea cellulare Neuro-2a
- Applicazioni di ricerca della linea cellulare Neuro-2a
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare Neuro-2a
- Caratteristiche generali e origine delle cellule Neuro-2a
- 5. Pubblicazioni scientifiche relative alle cellule Neuro-2a
- Risorse per le cellule Neuro-2a: protocolli, video e altro
- Domande frequenti
Vantaggi e svantaggi della linea cellulare Neuro-2a
Le cellule Neuro-2a presentano alcuni vantaggi e svantaggi che le distinguono dalle altre linee cellulari neuronali. Di seguito sono elencati alcuni dei principali pro e contro di queste cellule.
Vantaggi
I vantaggi della linea cellulare di neuroblastoma murino Neuro-2a sono:
-
Facile da mantenere:
La linea cellulare Neuro-2a non richiede procedure di coltura cellulare complesse o articolate. È facile da coltivare e mantenere nei laboratori di ricerca.
-
Modello cellulare neuronale in vitro:
Neuro-2a è un pratico modello cellulare neuronale ampiamente utilizzato dai ricercatori negli studi sullo sviluppo e sulla differenziazione dei neuroni.
Svantaggi
Gli svantaggi delle cellule Neuro-2a sono:
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Origine murina:
Neuro-2a è di origine murina e i ricercatori devono prestare attenzione quando estrapolano i risultati degli studi condotti sui topi alla salute e alle malattie umane, poiché la biologia dei topi e quella degli esseri umani possono differire in modo significativo.
Applicazioni di ricerca della linea cellulare Neuro-2a
Le cellule Neuro-2a offrono numerose applicazioni nel campo della ricerca neuroscientifica. Di seguito vengono illustrati alcuni utilizzi promettenti di questa linea cellulare:
- Sviluppo neurale: Neuro-2a è un modello cellulare neuronale in vitro ampiamente utilizzato per lo studio dello sviluppo neuronale e dei processi correlati, quali la differenziazione, la crescita assonale e la formazione delle sinapsi. Uno studio condotto nel 2020 ha utilizzato le cellule Neuro-2a per esplorare il ruolo del microRNA-124 nella differenziazione delle cellule neuronali indotta dall’acido retinoico [2]. Un altro studio ha esaminato l’espressione del recettore gamma dell’acido retinoico (RARG) e del miRNA-124 nella linea cellulare di neuroblastoma (N2A). Questo studio ha ipotizzato che il RARG sia bersagliato dal miR-124 e che ciò sopprima la crescita dei neuriti [3].
- Neurotossicità: Neuro-2a viene utilizzato anche per valutare gli effetti tossici di farmaci, sostanze chimiche o fattori ambientali sulle cellule neurali. Ad esempio, uno studio condotto da Zhihong Yin e colleghi ha esaminato la neurotossicità del bisfenolo A (BPA), una sostanza chimica presente nell’ambiente, utilizzando cellule Neuro-2a. È stato osservato che il BPA inibisce la differenziazione e la proliferazione delle cellule neuronali compromettendone l’integrità cellulare e sinaptica [4].
- Screening farmacologico: le cellule Neuro-2a vengono impiegate anche per valutare l’attività terapeutica di diversi farmaci, composti e prodotti naturali. Ad esempio, in uno studio sono state utilizzate le cellule Neuro-2a per studiare il potenziale antiossidante dell’estratto della pianta Ginkgo biloba. Inoltre, la ricerca ha suggerito che esso provochi una riduzione dell’aggregazione dell’Aβ e possa rappresentare un potenziale trattamento per il morbo di Alzheimer [5].
5. Pubblicazioni scientifiche relative alle cellule Neuro-2a
Di seguito sono riportati alcuni articoli di ricerca interessanti che trattano della linea cellulare Neuro-2a.
Questo studio, pubblicato nel 2018 sul *Journal of Natural Medicines*, ha esaminato gli effetti terapeutici delle alkamidi isolate dal pepe bianco (P. nigrum) sulle cellule neuronali Neuro-2a.
Questa ricerca, pubblicata su *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* nel 2020, ha ipotizzato che il gene Nkx2.1 svolga un ruolo importante nello sviluppo del cervello dei topi regolando la cascata di segnalazione Shh.
Questo articolo, pubblicato su *Toxicology and Industrial Health* (2023), ha suggerito che il bisfenolo A, una sostanza chimica presente nell’ambiente, scateni neurotossicità nelle cellule Neuro-2a e ne alteri la funzione sinaptica e citoscheletrica.
Questo articolo, pubblicato su *Pharmaceuticals* (2021), ha ipotizzato che un farmaco, l’esarelina, modifichi le cascate PI3K/AKT e MAPK nelle cellule di neuroblastoma (Neuro-2a) e inibisca l’apoptosi delle cellule Neuro-2a indotta dal perossido di idrogeno.
Questo articolo di ricerca pubblicato su *Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine* (2021) ha suggerito che l’estratto di frutto di *Emblica officinalis* sopprime la neuroinfiammazione nelle cellule Neuro-2a e può quindi essere benefico per le malattie neuroinfiammatorie.
Risorse sulle cellule Neuro-2a: protocolli, video e altro
Di seguito sono elencate le risorse online disponibili sulle cellule Neuro-2a. Esse includono il protocollo di coltura e trasfezione delle cellule Neuro-2a.
- Protocollo di trasfezione delle cellule Neuro-2a: le cellule Neuro-2a sono un ospite adatto alla trasfezione. Questo link fornisce indicazioni sul protocollo di trasfezione di questa linea cellulare. L’efficienza di trasfezione delle cellule Neuro-2a varia a seconda del reagente utilizzato.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule Neuro-2a.
- Protocollo di coltura delle cellule Neuro-2a: questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo di subcoltura delle cellule Neuro-2a.
- Cellule Neuro-2a: il sito web contiene informazioni complete sui terreni di coltura delle cellule Neuro-2a, sulla densità di semina e sui protocolli per la subcoltura e la gestione delle colture crioconservate e proliferative.
Riferimenti
- Lulevich, V., et al., La meccanica a singola cellula fornisce un metodo sensibile e quantitativo per studiare le interazioni tra il peptide beta-amiloide e le cellule neuronali. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Ruolo di miR-124 nella regolazione della differenziazione delle cellule Neuro-2A indotta dall’acido retinoico. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Il recettore gamma dell’acido retinoico è bersagliato dal microRNA-124 e inibisce la crescita dei neuriti. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., L’esposizione al bisfenolo A ha indotto neurotossicità ed è associata alle sinapsi e al citoscheletro nelle cellule Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., L’estratto di Ginkgo biloba (EGb) inibisce lo stress ossidativo nelle cellule Neuro-2A che sovraesprimono APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.