Vero Cells: Vero Vero: Úttörő utak a vírusvizsgálatokban és az oltóanyag-innovációban

A Vero sejtvonal, az afrikai zöldmajom vesehámsejtjeiből származó, immortalizált emlőssejtmodell, a virológia, a mikrobiológia, valamint a sejt- és molekuláris biológia kutatásának élvonalában áll. Széles körű alkalmazásuk kiterjed a vakcinák fejlesztésére, a gyógyszeripari szűrésekre, valamint a vírus- és paraziták biológiájának, a tumorimmunológiának és az immunterápiás stratégiáknak a feltárására.

A Vero-sejtek eredete és fő jellemzői

Egy olyan sejtvonalba való belemerülés, mint a Vero, számos kérdést vet fel: Mi is pontosan az a Vero sejt? Hogyan jött létre a Vero sejtvonal? Mi a történet a "Vero" név mögött? Ez a szegmens a Vero sejtek kialakulásának és elsődleges tulajdonságainak megvilágítását célozza.

A Vero sejtvonal létrejötte 1962-re nyúlik vissza, és az afrikai zöld majom vesehámsejtjeiből származik. Ezt a vonalat Y. Kawakita és Yasumura tenyésztette a japán Chiba Egyetemen. A "Vero" kifejezés az eszperantó "Verda reno" szóból származik, ami "zöld vesét" jelent, bár a "Vero" az "igazság" fogalmával is egybecseng

A Vero-sejtek jellemzően monolayert alkotnak, de képesek alkalmazkodni a szuszpenziós kultúrákhoz is, és epithelszerű szerkezetet mutatnak. Ezeket a sejteket lekerekített vagy hosszúkás alakjuk és kb. 17 µm átlagos átmérőjük jellemzi. A Vero sejtek hipodiploid kromoszómaszámot mutatnak, a sejtpopuláció nagyjából 66%-ánál a kromoszómaszám 58, bár a sejtek kis hányadában (1,7%) magasabb ploiditású változatok is előfordulnak.

Vero sejtklónok és egyedi tulajdonságaik

A Vero sejtvonalból származó, elkülönülő klónok egyedi tulajdonságokkal rendelkeznek, amelyek megkülönböztetik őket az eredeti vonaltól. Ezek közül két figyelemre méltó Vero sejtklón a következő:

• Vero E6 sejtvonal: Ez a Vero C1008 néven is ismert klón a Vero 76 sejtekből származik, és 1979-ben P.J. Price izolálta mikrotengelyeken végzett hígítási technikával. A Vero E6 sejtek különösen alkalmasak a lassan szaporodó vírusok tenyésztésére.

• Vero 76 sejtek: Ezek a sejtek 1968-ban egy afrikai zöld majom veséjéből származnak, és megőrzik a Vero sejtekre jellemző epithelialis morfológiát.

A Vero-sejtek ezen változatai az anyavonal mellett továbbra is fontos szerepet játszanak a virológiai kutatások és az orvosi beavatkozások fejlesztésében, ami jelzi jelentőségüket a tudományos közösségben.

Információk tenyésztése

A Vero sejtek, egy majomsejtvonal tenyésztése olyan speciális paraméterek ismeretét igényli, mint a megduplázódási idő, a vetési sűrűség és a megfelelő táptalaj.

• A populáció megduplázódási ideje: A Vero sejtek megduplázódási ideje körülbelül 24 óra.

• Tapadás: A Vero sejtek tapadnak a felületekhez, és tenyésztéskor jellemzően monoréteget alkotnak.

• Ültetési sűrűség: Célszerű 1 x 10^4 sejt/cm^2 vetési sűrűséggel kezdeni. A tapadó Vero sejtek tenyésztéséhez mossuk őket PBS-szel, és kezeljük őket Accutase-szal a leválásukhoz. Leválasztás után centrifugáljuk a sejteket, reszuszpendáljuk őket friss tápfolyadékban, és helyezzük át őket új tenyésztőlombikokba.

• Növesztőközeg: A Ham's F12 és a DMEM egyaránt alkalmas táptalaj a Vero sejtek tenyésztésére. Ezeket 2,5 mM L-glutaminnal és 5% magzati szarvasmarha szérummal (FBS) kell kiegészíteni az optimális növekedés érdekében. A táptalajt hetente két-három alkalommal kell frissíteni.

• Növekedési feltételek: A Vero sejtek 37°C-os hőmérsékleten, 5% CO2-vel párásított légkörben fejlődnek.

• Tárolás: Hosszú távú tárolás esetén a Vero sejteket -150°C alatti hőmérsékleten kell tartani, vagy ultraalacsony hőmérsékletű fagyasztóban, vagy folyékony nitrogén gőzfázisában.

• Fagyasztási folyamat és közeg: A krioprezerváláshoz fagyasztási közegként a CM-1 vagy CM-ACF, illetve az FBS-t és DMSO-t tartalmazó növekedési közeg használható. Alkalmazzon lassú fagyasztási technikát, a hőmérsékletet percenként fokozatosan 1°C-kal csökkentve.

• Felolvasztási folyamat: Olvasszuk fel a Vero sejteket úgy, hogy a tartályt 37°C-os vízfürdőbe merítjük, és 40-60 másodpercig óvatosan kevergetjük. Ezután hígítsuk fel a sejteket friss tápfolyadékban, centrifugáljuk ki a krioprotektáns eltávolításához, szuszpendáljuk újra friss tápfolyadékban, és helyezzük őket egy új lombikba, hogy regenerálódjanak és növekedjenek.

• Biológiai biztonsági szint: A Vero sejteket olyan laboratóriumban kell kezelni, amely megfelel az 1. biológiai biztonsági szint követelményeinek.

A Vero sejtvonal alkalmazása a kutatásban

A Vero sejtvonal számos kutatási alkalmazással rendelkezik a sejtbiológia és a virológia területén. Az alábbiakban néhány konkrét alkalmazásról szólunk.

Vero sejtek a víruskutatásban és a vakcinagyártásban

Az afrikai zöld majom vesesejtjeiből származó Vero-sejtek a különböző vírusok, köztük a poliovírus és a japán encephalitis vírus elleni vakcinák biotechnológiai fejlesztésének alapanyagává váltak. Alkalmazkodóképességük mind az adherens, mind a szuszpenziós kultúrákban, valamint széleskörű vírustámogató képességük, beleértve az olyan kórokozókat is, mint a des petits ruminants vírus, kiemeli jelentőségüket a vírusizolálásban és a vakcinafejlesztésben.

Számos tanulmányban használták a Vero sejteket humán vakcinák előállítására. Egy 2019-ben közzétett figyelemre méltó tanulmány például a Vero sejtek felhasználását mutatta be a sárgaláz vírus inaktivált vakcina kifejlesztésében [2].

A Vero-sejteket gyakran használják vírusfertőzéses vizsgálatokban, például egy 2020-ban végzett tanulmányban a SARS-CoV-2 vírus különböző izolátumaival fertőzték meg a Vero-sejteket a vírus növekedési tulajdonságainak tanulmányozása céljából [4]. Hasonlóképpen, egy másik tanulmány a SARS-CoV-2 fertőzésre adott sejtválaszokat vizsgálta Vero sejtkultúra segítségével [5].

A Vero-sejtek szerepe a szövetszerkesztésben és a biotechnológiai folyamatok fejlesztésében

A vakcinagyártáson túl a Vero-sejtek hozzájárulnak a szövettechnológiához és a biotechnológiai folyamatok fejlesztésének tágabb területéhez, ami kiemeli a tulajdonságaik és alkalmazásaik folyamatos kutatásának szükségességét. A megfelelő Vero-sejt alvonalak kiválasztása kulcsfontosságú a bennük rejlő lehetőségek maximalizálásához a biotechnológiai és gyógyszeripari iparágakban.

A Vero-sejtek alkalmazása a gyógyszerek hatékonyságának és biztonságosságának vizsgálatában

A Vero-sejteket gyakran alkalmazzák a gyógyszerkísérletek során a gyógyszerkészítmények hatékonyságának és biztonságosságának értékelésére. Ezeket a sejteket gyakran tekintik a normál vesesejtek standard modelljének a különböző gyógyszerek és terápiás szerek citotoxikus hatását vizsgáló vizsgálatokban. Például a Terminalia avicennioides növényi gyökérkivonatok hatását a májrákos sejtvonalra, a HepG2-re, valamint a majomvese epitheléből származó Vero sejtekre összehasonlító kutatások azt találták, hogy a kivonatok károsabbak voltak a rákos sejtekre, mint a normál sejtekre.

A Vero sejtek korlátai

Bár a Vero sejteket széles körben használják, megvannak a korlátaik, mint például a vero toxintermelés és a genomiális változások, amelyek hatással lehetnek bizonyos alkalmazásokra. A Vero-sejtek, köztük az F6-os Vero-vonal specifikus alvonalainak és genomikai jellemzőinek megértése alapvető fontosságú a különböző biológiai folyamatokban való felhasználásuk optimalizálásához.

Fedezze fel Vero sejtjeinket és származékainkat úttörő kutatási alkalmazásokhoz

Kutatási publikációk

Az alábbiakban néhány közelmúltbeli és legtöbbet idézett kutatási publikáció található, amelyekben Vero sejtek szerepelnek.

Vero sejtek adaptálása szuszpenziós tenyésztésre veszettség vírus előállításához különböző szérummentes közegekben

Ez a Vaccine Journalban (2019) megjelent tanulmány a Vero sejteket szuszpenziós tenyészetben történő tenyésztésre adaptálta, hogy különböző szérummentes közegek felhasználásával magas titerű veszettségvírust állítsanak elő.

A Toxoplasma gondii érzékenysége a Tinospora crispa etanolos kivonatával szemben Vero sejtekben

Ez a cikk az Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine című folyóiratban jelent meg 2019-ben. A tanulmány azt javasolta, hogy a Tinospora crispa növény etanolos kivonata káros hatást gyakorol a Toxoplasma gondii parazitára. A gazdasejtekre (a Vero sejtvonalra) nézve azonban biztonságos.

A Colchicum baytopiorum levélkivonatának hatása a citotoxicitásra és a sejthalál útvonalaira a C-4 I és Vero sejtvonalakban

Ez a cikk a Journal of the Balkan Union of Oncology 2021-ben jelent meg. Ebben a stidyben Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez és Gul Ozcan a Colchicum baytopiorum levélkivonat citotoxikus hatását vizsgálta C-4I és Vero sejtvonalakon.

A resveratrol gátolja a súlyos akut légzőszervi szindróma 2-es koronavírus (SARS-CoV-2) szaporodását tenyésztett Vero sejtekben

A Phytotherapy Research (2021) című folyóiratban megjelent tanulmány SARS-CoV-2-vel fertőzött Vero sejteket használt a rezveratrol vírusszaporodásra gyakorolt terápiás hatásának vizsgálatára.

Lipofil sztatinok gátolják a Zika-vírus termelődését Vero sejtekben

A Nature Scientific Reports (2019) című szaklapban megjelent tanulmány azt javasolja, hogy a lipofil sztatinok, azaz a cerivastatin, a lovasztatin, a fuvastatin, a simvastatin és a mevastatin akadályozhatják a Zika-vírus termelődését Vero sejtekben.

Források a Vero sejtekhez: Videók, protokollok, és még sok más

• Vero sejtek transzfekciója: Ez a link végigvezeti Önt a Vero sejtek transzfekciós protokollján.
• Vero sejtvonal transzfektálása: Ez a videó a Vero sejtvonal transzfekciós protokollját ismerteti.
• Vero sejtek szubkultúrája: Ez a videó általános szubkultúrázási ajánlásokat ismertet az adherens sejtvonalakhoz.

Sejtkultúra protokollok

• Vero sejtek tenyésztése: Ez a weboldal egy jól magyarázott protokollt tartalmaz a Vero sejtek tenyésztéséhez.
• Vero sejtek tenyésztése: Ez a dokumentum segíthet a Vero sejtek szaporítására, fenntartására és fagyasztására vonatkozó protokoll megismerésében.

Hivatkozások

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton, and A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): A. A. 4E. o. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Vero sejtekben termelt sárgaláz vírus tisztítása inaktivált vakcina előállításához. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill és Perr. gyökerének kivonatainak és frakcióinak antiproliferatív hatása HepG2 és Vero sejtvonalakra. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): p. 1-7.
4. Yao, P., et al., A SARS-CoV-2 izolálása és növekedési jellemzői Vero sejtekben. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection. Biomolekulák és terápiák, 2021. 29(3): p. 273.