NIH-3T3 sejtek: NIH-3T3 sejtek: A fibroblasztok tanulmányozásának és alkalmazásának előmozdítása
Az NIH-3T3 sejtvonal, amelyet 1962-ben Howard Green és George Todaro a New York University School of Medicine-en egy 17 napos svájci albínó egér embrió szövetéből hozott létre, azóta az orvosbiológiai kutatások alapvető forrásává vált. A leukémiavírus és a szarkóma vírus fókuszok kialakítására való nagyfokú fogékonyságáról ismert NIH-3T3 sejtek kritikus eszközként szolgálnak számos tudományos vizsgálathoz, beleértve a vírusonkológiai vizsgálatokat, a génexpressziós elemzést és a sejtek növekedési dinamikájának feltárását. A "3T3" elnevezés a sejttenyésztési módszert tükrözi, és a "3 napos transzfer" intervallumot jelöli 3 × 10^5 sejt kezdeti vetési sűrűségével, kiemelve azokat a szabványosított feltételeket, amelyek mellett ezeket a sejteket először tenyésztették és bővítették.
Az NIH-3T3 sejtek változatos morfológiái és alkalmazásai
Az NIH-3T3 sejtek egyik jellemző tulajdonsága a morfológiai alkalmazkodóképességük, amely jelentősen változik a tenyésztési konfluencia függvényében. Alacsonyabb sűrűségnél ezek a fibroblasztok orsó alakú, szoliter sejtstruktúrát mutatnak, amely sűrű, örvénylő mintázattá alakul, ahogy a populáció eléri a konfluenciát. A körülbelül 18 μm átlagos átmérőjű NIH-3T3 sejtek sokoldalú modellt kínálnak a mélyreható sejtbiológiai vizsgálatokhoz, a szöveti javítási mechanizmusoktól a sejtciklus szabályozásának bonyolult útvonalaiig.
Kultúrált információ
Kulcsfontosságú tenyésztési részletek:
A populáció megduplázódásának ideje: Nagyjából 20 óra.
Növekedési típus: Adherens kultúrák.
Ültetési sűrűség: Ajánlott: 3-4 x 10^4 sejt/cm^2.
Növesztőközeg: DMEM vagy Ham's F12, 5% FBS-szel és 2,5 mM L-glutaminnal kiegészítve.
Növekedési feltételek: Tartsuk 37 °C-on, párásított inkubátorban, 5% CO2-vel.
Tárolás: -195 °C alatti hőmérsékleten, folyékony nitrogén gőzfázisában tároljuk.
Fagyasztási módszer: Használjunk CM-1 vagy CM-ACF táptalajt; alkalmazzunk lassú fagyasztási módszert (1 °C-os hőmérséklet-csökkenés).
Felolvasztási protokoll: gyors felmelegítés 37 °C-os vízfürdőben, majd centrifugálás a fagyasztóközeg eltávolítására, majd újraszuszpendálás a növekedési közegben.
Biológiai biztonsági szint: A tenyésztés 1. biológiai biztonsági szintet igényel.
Svájci albínó egér laboratóriumban.
Az NIH 3T3 sejtek használatának előnyei és hátrányai
Előnyök
Transzfekciós hatékonyság: Az NIH-3T3 sejtek magas transzfekciós rátájukról ismertek, és kiválóan alkalmasak mind átmeneti, mind stabil génexpressziós vizsgálatokra, és számos transzfekciós technikát alkalmaznak.
Feeder réteg hasznossága: Ezek a sejtek gyakran szolgálnak támogató feeder-rétegként olyan sejtekkel, mint a keratinociták és őssejtek, együttkultúrázott sejtekkel való együttkultúrázásokhoz, köszönhetően az együttkultúrázott sejtek növekedését elősegítő növekedési faktorok felszabadulásának.
Őssejtkutatás: Az NIH-3T3 sejtek az őssejtkutatásban kedvelt választásnak számítanak, mivel genetikai módosítás nélkül indukálják a pluripotenciát, és kedvező környezetet biztosítanak az őssejtek differenciálódásához.
Kultúrstabilitás: Az NIH-3T3 sejtek stabilitásukról és a spontán transzformáció alacsony gyakoriságáról ismertek. Bizonyos körülmények között, illetve specifikus onkogéneknek vagy mutagéneknek való kitettséget követően azonban az NIH-3T3 sejtek spontán átalakulhatnak. Ez az átalakulás olyan rákos tulajdonságok megszerzéséhez vezethet, mint a kontrollálatlan növekedés, a kontaktusgátlás elvesztése és a daganatképződés képessége, ha fogékony gazdaszervezetbe injektálják őket.
Hátrányok
Következetlen sejtméret: Az NIH-3T3 sejtek megnyúlt, orsószerű morfológiája változhat, ami bonyolítja a képelemzéseket a vizsgálatokban.
Fertőzésre való fogékonyság: Ezek a sejtek hajlamosak a bakteriális és mikoplazma fertőzésekre, ha nem szigorú aszeptikus körülmények között tartják őket, ami potenciálisan hatással lehet a kísérleti integritásra.
Az NIH-3T3 sejtek kutatási alkalmazásai
DNS-transzfekciós vizsgálatok: Az NIH-3T3 sejtek robusztussága miatt ideálisak különböző gének bevitelére és működésének tanulmányozására, amit az olyan fehérjéket, mint a NAB2-STAT6, és azok sejtfolyamatokban betöltött szerepét vizsgáló kutatások során mutattak be.
Sejtalapú vizsgálatok: Megbízhatóságuk kiterjed a különböző vizsgálatokra, beleértve az életképesség, az apoptózis és a fókuszképződési vizsgálatokat, betekintést nyújtva a sejtek különböző kísérleti körülmények közötti válaszaiba.
Sejtciklus-kutatás: A sejtvonal szérumszinteken keresztül történő egyszerű sejtciklus-manipulációja hatékony modellé teszi a sejtciklus-szabályozás és annak eltéréseinek tanulmányozására betegségekkel kapcsolatos kontextusokban.
Növelje kutatásait NIH-3T3 sejtekkel
A NIH 3T3 fibroblaszt sejtvonal bevonásával végzett kulcsfontosságú vizsgálatok kiemelése
Az NIH-3T3 sejtvonal számos, a sejtbiológia különböző aspektusait felölelő kutatási projektben kulcsszerepet játszott. Az alábbiakban bemutatunk néhány jelentős tanulmányt, amelyekben ezeket a sejteket használták:
- A NAB2-STAT6 fúziós fehérje vizsgálata: A Biochemical and Biophysical Research Communications című folyóiratban megjelent tanulmány azt vizsgálja, hogy a NAB2-STAT6 fúziós fehérje hogyan hat az NIH-3T3 sejtekre, különösen a sejtnövekedés és a migráció fokozásában játszott szerepét az EGR-1 szabályozásán keresztül
- Az APOBEC3 és a murine leukémiavírus vizsgálata: A Virology folyóiratban megjelent kutatás az AKV murine leukémiavírus hipermutációját vizsgálja az egér APOBEC3 gént expresszáló NIH-3T3 sejtekben
- Az epigenetikus gyógyszerek antimetasztatikus potenciáljának értékelése: Oncotargets and Therapy című folyóiratban megjelent tanulmány a hidralazin és a valproinsav antimetasztatikus hatását értékeli RAS-transzformált NIH-3T3 sejtekre
- A baicalein hatása az NIH-3T3 proliferációra és kollagénszintézisre: Ez a kutatás NIH-3T3 sejteket használ fel annak feltárására, hogy a miR-9/inzulinszerű növekedési faktor-1 tengely modulációján keresztül hogyan befolyásolja a baikalein a sejtproliferációt és a kollagéntermelést
- A riboflavin kimerülés és a tumorigenezis vizsgálata: Ez a tanulmány eredményeket mutat be arról, hogy a riboflavinhiány NIH-3T3 sejtekben hogyan járul hozzá a tumorigenezishez a sejtproliferáció elősegítése és a sejtciklusgének diszregulációja révén
Alapvető források az NIH-3T3 sejtek kutatásához
Az NIH-3T3 sejtekkel dolgozni kívánó kutatók számára számos forrás áll rendelkezésre a tenyésztési és kísérleti protokollok irányításához:
- Szferoidképződés NIH-3T3 sejtekben: Ez a videó részletesen bemutatja a szferoidok kialakítását, egy olyan 3D-s sejttenyésztési technikát, amely az NIH-3T3 sejteket klaszterekbe aggregálja, így fiziológiailag relevánsabb modellt kínál a vizsgálatokhoz
- NIH-3T3 sejtek növekedésének nyomon követése: Ez a videó a JuLI Br élősejtes képalkotó rendszeren keresztül rögzíti az NIH-3T3 sejtek növekedési dinamikáját 65 órán keresztül, bemutatva a valós idejű sejtburjánzást
Ezek az erőforrások célja, hogy támogassák az NIH-3T3 sejtekkel végzett kutatási törekvéseit, megalapozva a sikeres kísérleteket és felfedezéseket.
Gyakran ismételt kérdések az NIH-3T3 sejtekről
Hivatkozások
- Rahimi, A.M., M. Cai és S. Hoyer-Fender, Heterogeneity of the NIH3T3 Fibroblast Cell Line. Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
- Leibiger, C., et al., Az NIH 3T3 sejtvonal első molekuláris citogenetikai nagyfelbontású jellemzése murinális többszínű sávozással. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Wang, H.-X., et al., Különböző feeder rétegek összehasonlító elemzése 3T3 fibroblasztokkal nyulak limbális őssejtjeinek tenyésztéséhez. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): p. 1021.
- Wang, Z., et al., Neuronális sejtek differenciálása NIH/3T3 fibroblasztokból meghatározott körülmények között. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Park, Y.-S., et al., NAB2-STAT6 fúziós fehérje közvetíti a sejtproliferációt és az onkogén progressziót az EGR-1 szabályozásán keresztül. Biokémiai és biofizikai kutatási közlemények, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Mattsson, M., A Sloppymerase™ expressziója NIH/3T3 sejtekben: Egy hibára hajlamos fúziós polimeráz sokoldalúságának feltárása. 2021.
- Sahinturk, V., et al., Acrylamide exerts its cytotoxicity in NIH/3T3 fibroblast cells by apoptosis. Toxikológia és ipari egészségügy, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Lusi, E.A. és F. Caicci, Az első emberi retro-óriásvírus felfedezése: Morfológiájának, retrovírus kinázának és egerekben tumorok kiváltására való képességének leírása. bioRxiv, 2019: p. 851063.
- Endo, M., et al., E2F1-Ror2jelátvitel közvetíti az összehangolt transzkripciós szabályozást a G1/S fázis átmenet elősegítése érdekébenbFGF-stimuláltNIH/3T3 fibroblasztokban. The FASEB Journal, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Long, L., et al., Riboflavin Depletion Promotes Tumorigenesis in HEK293T and NIH3T3 Cells by Sustaining Cell Proliferation and Regulating Cell Cycle-Related Gene Transcription. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): p. 834-843.